应用实时荧光PCR法快速检测从业体检人群肠道致病菌结果分析

目的分析与评价实时荧光PCR法快速筛查从业人员沙门菌、志贺菌的带菌情况。方法收集从业人员肛拭样本,用实时荧光PCR法进行快速筛查,采用常规细菌培养法作为标准方法进行验证和血清分型,分析其灵敏度及特异性。结果在24598份样品中,实时荧光PCR法检出沙门菌阳性18份,志贺菌阳性11份．阳性率分别为0．732‰和0．447‰。通过细菌培养法验证及分型,14份标本确认为沙门菌阳性,阳性率为0．569‰,分布于A、B、C、D、E、F6个群11个血清型;6份标本确认为志贺菌阳性,阳性率为0．244‰,分布于B、C、D3个群5个血清型。实时荧光PCR法筛查沙门菌、志贺菌的灵敏度均为100．00％。特异性均为99．98％。结论与传统细菌培养法相比．实时荧光PCR法简便、快速,可提高检测的灵敏度和特异性,减少工作量,适用于肠道致病菌的快速筛查。     

深圳市部分酒店的空调系统微生物污染情况监测

目的 了解深圳市部分酒店的空调系统微生物污染情况，以便对空调系统采取消毒和卫生管理措施。保障空调环境卫生。方法 采用对酒店各部不同类型空调进行抽样调查，检测空调系统过滤网、冷却水、空气中的细菌总数、霉菌总数以及军团菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌等项目。结果 中央空调冷却水军团菌污染严重，阳性率为65．66％。不同类型空调系统集尘过滤网的细菌总数、霉菌总数超标率达33.8％，金黄色葡萄球菌，溶血性链球菌未检出阳性，而芽胞杆菌检出率较高为70.87％；在空气积尘中细菌、霉菌总数超标率较低，金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、芽胞杆菌检出率较低。结论部分酒店空调系统污染较为严重，必须引起注意，加强卫生消毒措施及管理。     

非结核分枝杆菌耐药性特征及聚合酶链式反应检测方法的建立

目的建立一种快速鉴别非结核分枝杆菌的聚合酶链式反应方法,并与直接测序法比较,探讨该方法的可行性。方法根据分枝杆菌16~23srDNA间隔区序列设计引物,建立检测分枝杆菌的PCR分型方法,并利用该技术对5例临床分离株进行PCR扩增,借助凝胶电泳分析和直接测序分析进行临床分离株的分子分型。结果 5例分离株均耐利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、丁胺卡那、环丙沙星、左氧氟沙星、硫异烟胺、力克肺座和比嗪酰胺,为多重耐药菌株。PCR扩增结果和直接测序结果相吻合,均为脓肿分枝杆菌。结论分枝杆菌高度保守的16~23srDNA间隔区序列可做为分枝杆菌鉴定的靶基因,建立快速、特异、敏感的PCR扩增体系,且从基因水平上可对分枝杆菌进行分子分型,为临床治疗提供快速、准确的实验数据。     

金黄色葡萄球菌多位点熔解曲线分型可行性研究

目的建立多位点熔解曲线体系(Mutiple locus melting curve system,MLMC)对金黄色葡萄球菌(金葡菌)进行分子分型,并评价其可行性。方法建立并应用多位点熔解曲线体系检测59株金葡菌,以脉冲场凝胶电泳技术(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)作为金标准,评价MLMC方法应用与金葡菌食物中毒快速溯源的可行性。结果MLMC将59株金葡菌分为19个型别,包括11个流行克隆和8个散发克隆。PFGE将其分为15个型别,包括8组流行克隆和7个散发克隆。两者有13株金葡菌呈现不一致的分型结果,两种方法分型一致性为77.97%(46/59)。MLMC和PFGE的Simposn相关系数依次是0.92和0.87。结论结合流行病资料分析,认为MLMC方法具有良好的分型能力、分辨力和合理性,同时操作简单快速,分辨率高于PFGE分型技术,可应用于金葡菌食物中毒的快速溯源和筛查。     

金黄色葡萄球菌熔解曲线分子分型体系的建立及应用

目的 建立金黄色葡萄球菌熔解曲线分子分型体系,应用于金黄色葡萄球菌食物中毒快速溯源。方法 根据文献合成金黄色葡萄球菌VNTR位点的相应引物,用于检测已知PFGE型别的金黄色葡萄球菌,从中筛选出4个分辨力较高的位点。在此基础上建立熔解曲线分子分型体系,检测59株分离自食物中毒的金黄色葡萄球菌。结果 熔解曲线分子分型体系具有良好的精密度,其批内重复性实验的标准差(s)为0.03~0.05℃,批间重复性实验的s为0.04~0.06℃,日间重复性实验的s为0.04~0.06℃。同时,熔解曲线分子分型体系能将59株金黄色葡萄球菌分为19个型别,包括11个流行克隆和8个散发克隆,Simpon相关系数为0.916 4。结论 建立的体系快速、灵敏度高、重复性好,能应用于金黄色葡萄球菌食物中毒的快速溯源和筛查。     

深圳市戊型肝炎血清流行病学调查

目的 了解深圳市戊型肝炎抗-HEV IgG抗体水平,为制定预防控制措施以及戊肝疫苗免疫策略提供依据.方法 采用多阶段分层随机抽样法,全市按行政级别由高到低分为区、街道办事处、工作站3层,每层均采取随机抽样的原则进行抽样,对深圳市8个区1～59岁3 771名居民戊型肝炎抗体水平进行调查研究,采用酶联免疫吸附试验检测戊型肝炎IgG抗体.结果 本次调查共检测3 771人,男性1 834人,抗体阳性率为23.72％,女性1 937人,抗体阳性率为23.64％.其中深圳户籍人口1 389人,抗体阳性率为19.08％;非深圳户籍人口2 382人,抗体阳性率为26.36％.不同年龄组人群抗体阳性率差异有统计学意义,且随着年龄的增长抗体阳性率呈增长趋势.不同文化程度人群抗体阳性率差异有统计学意义,且文化程度高的人群抗体阳性率最低,为28.50％.结论 深圳市人群中抗-HEV IgG流行率与年龄、居住地类型、文化程度有关,而与性别无关.深圳市戊肝的流行趋势不容忽视,应加强对戊肝的监测.     

食品中副溶血弧菌PFGE分子分型及三种毒力基因的测定

目的:了解食品中分离的副溶血弧菌菌株之间及其与病人分离菌株的关系,了解食品中分离菌株的毒素基因携带情况。方法:对食品中分离的副溶血弧菌进行PFGE分子分型;并应用PCR法进行3种毒力基因(tdht、rh和tlh)测定。结果:55株O1～O4群副溶血弧菌的PFGE图谱分为50型别;三种毒力基因检测结果为:12株菌tdh检测阳性、55株菌trh检测均为阴性5、5株菌tlh检测均为阳性。结论:食品中分离的副溶血弧菌PFGE型别多,且相互之间关系分散;所有被检测副溶血弧菌均携带tlh基因,没有检测到携带trh基因的菌株,不同来源的菌株TDH基因携带情况差异较大。     

深圳市2007年副溶血弧菌的实验室监测分析

[目的]分析深圳市2007年感染性腹泻分离副溶血弧菌血清型分布,携带毒力基因情况,菌株之间的遗传相关性。[方法]对45株副溶血弧菌进行血清学分型,用荧光PCR检测毒力基因tdh,细菌基因组DNA经NotI酶切后进行脉冲场凝胶电泳分析。[结果]菌株共分为5种血清型,27株为血清型O3:K6,所有菌株毒力基因tdh荧光PCR检测阳性,血清型O3:K6菌株主要有3种PFGE型,其余同种血清型的大部分菌株有相同的PFGE型。[结论]O3:K6血清型菌株是引起腹泻副溶血弧菌的主要菌型,部分菌株有共同的来源,以实验室为基础的监测有助于副溶血弧菌所致感染性腹泻的主动监测和预警。     

深圳市2007--2008年腹泻病副溶血弧菌监测及分子特性分析

目的 了解深圳地区2007年和2008年腹泻病副溶血弧菌感染状况和临床分离株的分子生物学特征.方法 4个哨点监测医院每月至少对80份腹泻病例的粪便样本进行致病菌分离培养.对所分离的361株副溶血弧菌进行血清型分型和两个主要毒力基因tdh和trh的检测.对2007年8月和2008年9月6个疑似腹泻暴发地点的60株O3:K6型副溶血弧菌分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型.结果 4个哨点临测医院共检测4384份标本,分离出361株副溶血弧菌,361株副溶血弧菌分属于28种不同的血清型,其中O3:K6型占67.90%,其次是O4:K8和O1:KUT血清型,所占比例分别为7.50%和6.10%.深圳地区腹泻病副溶血弧菌临床分离株主要是tdh+trh-菌株,361株菌株中有337株是tdh+trh-菌株,11株为tdh-trh-菌株,13株为tdh+trh+菌株.60株副溶血弧菌分型得到20种图谱类型,分别属于3个克隆群.分离自同一个地点的副溶血弧菌菌株具有相同的PFGE图谱,来自不同年份的菌株仅有部分菌株有相同的PFGE图谱.结论 深圳地区腹泻患者的副溶血弧菌分离菌株主要以O3:K6型为主,大部分菌株携带tdh基因,少数携带trh基因.来自6个地点的副溶血弧菌都具有相同的PFGE图谱,说明该地区存在副溶血弧菌腹泻病的暴发.但2007年和2008年菌株的PFGE图谱又不相同,说明副溶血弧菌的来源存在多样性.     

黄芪多糖对缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞抗氧化应激机制探讨

目的:探讨黄芪多糖对缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞氧化应激的影响。方法:将培养至5代的脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组、模型组、模型+黄芪多糖组、模型+美托洛尔组,观察黄芪多糖对缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞活性、ROS、LDH、MDA含量、线粒体膜电位的影响。结果:与正常对照组比较,缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞ROS、MDA含量、LDH漏出率均显著升高,线粒体膜电位、细胞活性下降;黄芪多糖干预后,缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞ROS、MDA含量、LDH漏出率降低,线粒体膜电位、细胞活性升高。结论:黄芪多糖可能通过抑制自由基、脂质过氧化产物的生成,减少氧化应激而保护缺血再灌注损伤内皮细胞。