庆大霉素中毒性耳聋豚鼠耳蜗热休克蛋白70的表达及川芎嗪的保护作用

背景：川芎嗪具有降低庆大霉素的耳毒性作用，但川芎嗪能否通过增加耳蜗热休克蛋白70表达，从而拮抗庆大霉素的耳蜗毒性作用。目的：应用免疫组化及图像分析技术并结合听性脑干反应测试，观察川芎嗪对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达的影响。设计：随机对照实验，直线相关分析。单位：沈阳医学院生理教研室和中国医科大学听力研究室。材料：选用清洁级耳郭反射灵敏的健康白色红目豚鼠40只，体质量200～250g，雌雄不拘。随机分为庆大霉素组、川芎嗪＋庆大霉素组、川芎嗪组、正常对照组，每组10只。方法：川芎嗪＋庆大霉素组每日左侧腹腔注射川芎嗪注射液140mg／kg，同时在右侧腹腔注射硫酸庆大霉素注射液100mg／ks。庆大霉素组：每13腹腔注射硫酸庆大霉素注射液100mg／kg。川芎嗪组每日腹腔注射川芎嗪注射液140mg／kg。正常对照组每日腹腔注射生理盐水2．5mL／kg，各组皆连续用药10d。各组动物混合饲养，每13测量体质量调整药量。在用药前和停药后分别检测各组大鼠听性脑干反应阈值，停药处死后应用SABC免疫组化和图像分析技术，观察各组豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达情况。主要观察指标：①各组大鼠听性脑干反应阈值。②各组大鼠耳蜗热休克蛋白70表达。结果：①豚鼠听性脑干反应阈值：川芎嗪＋庆大霉素组、庆大霉素组均明显高于正常对照组[（21．09&;#177;4．50）dBnHL，（36．55&;#177;6．13）dBnHL，（2．50&;#177;2．75）dBnHL，t=15．764-22．665，P〈0．001]。川芎嗪＋庆大霉素组明显低于庆大霉素组（t=9．092，P〈0．001）。②豚鼠耳蜗各部位热休克蛋白70表达：庆大霉素组耳蜗Corti＇s器、血管纹和螺旋韧带、螺旋缘、螺旋神经节4个部位细胞热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值低于正常对照组[（88．24&;#177;4．34，96．85&;#177;1．05；121．24&;#177;0．92，128．76&;#177;1．59；96．15&;#177;1．10，98．78&;#177;0．54；117．73&;#177;1．18，120．51&;#177;0．80），（t=6．097～18．307，P〈0．001）]。川芎嗪＋庆大霉素组耳蜗Corti＇s器、血管纹和螺旋韧带、螺旋缘、螺旋神经节4个部位细胞热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值明显高于庆大霉素组（92．53&;#177;2．25，88．24&;#177;4．34；125．20&;#177;1．43，121．24&;#177;0．92；98．71&;#177;0．91，96．15&;#177;1．10；118．91&;#177;0．46，117．73&;#177;1．18，t=3．925～10．415，P〈0．001）。③各组各部位热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值与听性脑干反应阈值高度相关（r=-0．8141--0．9841，P〈0．001）。结论：应用川芎嗪注射液可降低听性脑干反应阈值和庆大霉素中毒耳蜗热休克蛋白70的表达，以减轻庆大霉素的耳毒性损伤，从而改善听功能。     

川芎嗪拮抗顺铂耳毒性损伤耳蜗STAT1表达的实验研究

目的:探讨川芎嗪拮抗顺铂耳毒性损伤的作用机制。方法:将40只小鼠随机分为3组:对照组、顺铂组(CDDP组)、川芎嗪+顺铂组(TMP+CDDP组)。通过腹腔进行给药,连续用药10 d。于用药前后分别进行听性脑干电位(ABR)监测。10 d后断头处死并制备耳蜗标本,进行耳蜗柯蒂氏器、血管纹、螺旋神经节STAT1免疫组化染色,并用图像分析技术进行灰度值分析。结果:顺铂组ABR阈值明显高于对照组,提示耳毒性损伤的发生;而TMP+CDDP组ABR阈值明显低于CDDP组(P 0. 01)。CDDP组耳蜗柯蒂氏器、血管纹、螺旋神经节STAT1蛋白表达水平明显高于对照组,而TMP+CDDP组STAT1蛋白表达虽然高于对照组,但是明显低于CDDP组。结论:川芎嗪拮抗顺铂耳毒性损伤可能与STAT1蛋白表达下降相关。     

丹参注射液对链霉素肾损伤豚鼠肾组织细胞凋亡及超微结构的影响

目的 探讨丹参注射液(DS)治疗链霉素(SM)肾损伤的效果及机制.方法 将40只豚鼠随机分为四组,对照组每日腹腔注射生理盐水2.5 ml/kg; SM组每日腹腔注射硫酸SM 150 mg/kg;DS+SM组每日腹腔注射DS 3 g/kg,同时在对侧腹腔注射硫酸SM 150 mg/kg; DS组每日腹腔注射DS 3 g/kg.各组皆连续用药10 d,10 d后处死动物制作肾组织标本,应用原位末端标记法观察肾小球和肾小管上皮细胞凋亡情况,透射电镜观察肾脏超微结构变化.结果 电镜下可见SM组肾脏病理改变严重,DS+SM组肾损伤较轻,且凋亡细胞数明显少于SM组(P＜0.01).结论 DS可减轻SM所致肾小管结构破坏和肾功能障碍,并阻止细胞凋亡发生,但具体机制尚待进一步研究.     

阿托伐他汀对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞功能的影响及其机制的初步探讨

目的观察阿托伐他汀对2型糖尿病患者(T2DM)患者外周血内皮祖细胞功能的影响并初步探讨其机制。方法将40例糖尿病患者随机分为他汀治疗组和对照组,前者给予阿托伐他汀40 mg/d口服,治疗前及治疗后2、4周抽取外周血,采用密度梯度离心法分离培养内皮祖细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测内皮祖细胞增殖情况,Transwell小室检测迁移,Matrigel管腔形成实验检测管腔形成能力。另取20例T2DM患者血培养内皮祖细胞,加入阿托伐他汀、一氧化氮合酶(NOS)/NO途径抑制剂L-NAME后观察对其功能的影响。结果阿托伐他汀治疗后2周、4周外周血内皮祖细胞数量明显上升,功能明显改善(P<0.01)。体外实验他汀+L-NAME组的血内皮祖细胞数目较他汀组明显下降(P<0.01)。结论阿托伐他汀对糖尿病患者内皮祖细胞的功能具有一定保护作用,这种作用能被L-NAME阻断。阿托伐他汀的作用机制可能与激活NOS/NO信号通路有关。     

构建以培养能力为核心的研究性实验教学体系的探索

构建研究型大学本科教学的实验教学体系,是建设研究型大学、培养具有创新能力的高素质人才的核心内容.通过更新教学理念,东南大学基础医学实验教学中心改革了传统的机能学科实验教学的教学体系与教学模式,建立了以学生为主体、教师为主导的开放式教学模式,制定了机能实验学独立授课的实验课程教学大纲,突出了实验教学在人才培养与能力培养中的重要地位,建立了以创新能力培养为核心,开展多学科交叉融合的分层次、开放式、一体化实验教学体系,建立了计算机网络实验教学助学平台与研学信息平台和大学生研学实践平台,构建了适合于分层次、开放式、一体化实验教学的考核评价体系.     

钾通道KCNQ1在大鼠胰腺发育过程中的表达

目的分析钾通道KCNQ1在不同发育阶段大鼠胰腺以及成年大鼠胰岛中的表达情况,为探悉其在胰腺B细胞发育及功能中可能的作用提供实验依据。方法采用高密度寡核苷酸芯片对胚胎第12.5天(E12.5)、E15.5、E18.5、新生和成年大鼠胰腺进行基因转录水平分析,并用RT-PCR对KCNQ1通道亚基在上述5个时期大鼠胰腺以及成年大鼠胰岛中的表达进行验证和分析。结果与胰腺内分泌细胞分化、成熟有关的转录因子分别于E15.5、E18.5达到表达高峰;E18.5胰腺中B细胞功能成熟标志基因的表达显著增加,而KCNQ1钾离子通道的编码基因KCNQ1及KCNE1此时才出现表达。成年胰腺及胰岛中均具有多种KCNQ1通道亚基的表达。结论 KCNQ1通道的表达出现于胰腺发育后期内分泌细胞功能逐渐成熟阶段,在成年胰岛中亦具有较高表达水平,提示KCNQ1通道可能表达于成熟B细胞并参与其内分泌功能。     

iNOS在链霉素耳中毒豚鼠耳蜗血管纹的表达

目的探讨链霉素（streptomycin,SM）耳中毒过程中豚鼠耳蜗诱生型一氧化氮合霉（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的表达.方法 20只豚鼠随机分为正常对照组、SM组,每组10只,SM组每日腹腔注射硫酸链霉素150 mg/kg,正常对照组每日腹腔注射等量生理盐水,用药10天后处死.以听性脑干反应（ABR）为监测指标,结合电镜、免疫组化及图像分析技术,检测链霉素耳中毒过程中耳蜗血管纹iNOS的表达及形态学改变.结果用药10天后,SM组ABR阈值明显高于正常对照组,有统计学差异（P〈0.01）,电镜下可见SM组血管纹损伤严重;免疫组化结果表明,SM组血管纹iNOS的表达明显高于正常对照组.结论 SM耳中毒时ABR阈值升高,血管纹iNOS表达增强.     

音频法诊断骨折

美国纽约特洛伊莱塞雷尔综合工业学院的生物医学工程师Hyo Sub Yoon博士研究出一种能取代X线诊断骨折的新方法。这一方法称为骨折的音频辐射法,它能探测的骨折比用标准X线法所能测定的还要小,患者还能免受有害射线辐射之苦。 Yoon博士的声探测器利用了这样一     

外源性p16基因导入对人原发性肝癌细胞迁移能力和VEGF及nm23表达的影响

目的 探讨外源性p16基因导入对人原发性肝癌细胞迁移能力和VEGF及nm23表达的影响。方法 细胞划痕法检测外源性p16基因导入对人肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响；免疫细胞化学法分析外源性p16基因导入对VEGF表达的影响；Western blotting法分析外源性p16基因导入对nm23表达的影响。结果 外源性p16基因导入人肝癌细胞SMMC-7721后，转染组细胞迁移能力较空载体对照组和空白对照组SMMC-7721细胞明显下降。外源性p16基因导入人肝癌细胞SMMC-7721后，转染组VEGF表达较空载体对照组和空白对照组SMMC-7721细胞减弱。外源性p16基因导入人肝癌细胞SMMC-7721后，转染组nm23表达较空载体对照组和空白对照组SMMC-7721细胞增强。结论 外源性p16基因导入能降低人肝癌细胞SMMC-7721的侵袭和迁移能力。     

组织细胞肉瘤L-Ⅱ高侵袭转移瘤株的筛选及鉴定

目的取小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ的肺转移灶细胞体内连续传代，筛选出L-Ⅱ高侵袭转移瘤株。方法L-Ⅱ瘤细胞接种小鼠胁部皮下，取其肺转移灶接种另一小鼠体内，再取其肺转移灶传代，如此数代后，建立L-Ⅱ肺高转移模型。检测：形态学，免疫组化，核型分析，流式细胞分析，肿瘤生长曲线，小鼠荷瘤生存时间，肺转移率。结果目前传至第7代，第1、第7代形态学上比较，光镜下无明显差别，染色体均为亚四倍体核型，众数66～70条。细胞周期1／7：G1期：70．1／50．8，S期：15．9／27．7，G期：14．0／21．6。DNA倍体为亚四倍体。平均荷瘤生存时间为22／16．33天，P〈0．01。免疫组化nm23第1代表达弱阳性，第7代未见表达。肺转移率：1／7为25％（3／12）／66．7％（8／12），P=0．099。结论筛选出L-Ⅱ高侵袭转移瘤株，为肿瘤的侵袭和转移的研究提供了理想的实验模型。