紫草多糖抑制LPS活化PBMC表达炎症相关因子的基因转录

目的:研究紫草多糖对LPS活化外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)表达TNF-α、IL-10、IL-18相关因子的影响及其可能的信号通路。方法:LymphopreTM(1.077 g/ml)淋巴细胞分离液离心分离正常健康人PBMC,紫草多糖处理正常健康人的PBMC或LPS活化的PBMC,利用Real-time RT-PCR法检测TNF-α、IL-10、IL-18、IL-18BP、IL-18Rα、IL-18Rβ基因转录水平,通过Western blot检测PBMC中ERK磷酸化水平。结果:紫草多糖可增强PBMC TNF-α、IL-10、IL-18Rα、IL-18Rβ的转录,与LPS处理的PBMC相近。紫草多糖处理LPS活化的PBMC,在处理早期(4小时)可抑制LPS活化的PBMCTNF-α及IL-18的表达,抑制率达15%~50%(P<0.05);并可抑制LPS诱导的ERK磷酸化,抑制率达27%~61%(P<0.05)。结论:紫草多糖可能是通过抑制PBMC的MAPK信号通路进而抑制LPS诱导的炎症相关因子TNF-α等高表达。     

肾综合征出血热患者血清样本中汉坦病毒RNA检测及其临床意义

目的观察病毒血症在病程各期的变化。方法根据汉坦病毒血清Ⅰ型76-118株及血清Ⅱ型80-39株M基因G1区设计两对公有引物及一条探针,应用RT-nestedPCR方法对57例96份肾综合征出血热(HFRS)患者血清中HV-RNA检测,所有PCR产物用DOT-Blot证实。结果96份样本中68份阳性,阳性率70.8%;在病程第1、2、3周,HV-RNA检测率分别为94.7%、47.5%、25%,P<0.05;重型病人持续2周HV?RNA阳性检测率100%,而轻、中型分别为12.5%及42.8%,P<0.05。结论在HFRS病程中,病毒血症是一个急性过程,与发热期相平行,病毒血症持续时间与病情轻重密切相关。     

表皮葡萄球菌生物被膜形成相关icaC敲除突变株的构建及其表型的改变

目的构建表皮葡萄球菌脚阴性突变株，以期获得仅icaC基因不同而其他遗传背景与表皮葡萄球菌1457株相同的突变株，对脚基因产物在细菌形成生物被膜中的作用进行研究。方法构建同源重组质粒pBT2-△icaC，经金黄色葡萄球菌RN4220株修饰后电转化入表皮葡萄球菌1457株。将含重组质粒的表皮葡萄球菌1457株在40℃多次传代，筛选出icaC敲除突变株（△icaC株）。检测△icaC以株生长曲线，采用微量板半定量法检测细菌生物被膜的形成能力，并采用斑点免疫印迹法检测细菌多糖黏附因子的合成。结果使用同源重组法敲除表皮葡萄球菌1457株基因组中的脚基因，△icaC株的生长曲线与表皮葡萄球菌1457株相似，但生物被膜形成能力及细胞外多糖黏附因子含量显著降低。结论表皮葡萄球菌1457株中脚基因的缺失对细菌生长无明显影响，但显著降低细胞外多糖黏附因子含量及生物被膜形成能力，为进一步研究表皮葡萄球菌脚基因在生物被膜形成中的作用奠定基础。     

金黄色葡萄球菌临床分离株生物膜及ica操纵子检测

近年来,随着多种插管、透析技术及生物材料的广泛应用,以及人口老龄化及免疫力低下人群增加,形成生物膜的细菌感染迅速增加.金黄色葡萄球菌是临床上分离的常见细菌,可造成多种感染,既可引起社区感染又可造成医院感染,是医院感染的主要病原菌.     

重组质粒DNA—抗原—抗体复合物诱生乙型肝炎表面抗体的研究

本文研究了高编码乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因的重组质粒ＤＮＡ（ｐＣＭＶ－ＨＢｓ）对ＨＢｓＡｇ，抗．ＨＢｓ免疫复合物（ＩＣ）诱生抗－ＨＢｓ的影响，在Ｂａｌｂ／ｃ小鼠中，ＩＣ加ｐＣＭＶ－ＨＢｓ（１００μｇ）免疫组比单独使用ＩＣ或ｐＣＭＶ－ＨＢｓＤＮＡ缚诱生的抗－ＨＢｓ效价高，虽然略低于ＩＣ加氢氧化铝组，但无明显差异，在ＩＣ中加２０μｇｐＣＭＶ－ＨＢｓＤＮＡ，经再次免疫亦可有效地诱生高效价的抗     

汉坦病毒S片段荧光定量PCR参考标准品的构建

[目的]构建汉坦病毒S片段标准品,用于实时荧光定量PCR检测汉坦病毒。[方法]对S片段基因进行序列分析,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针,提取病人总RNA,逆转录为cDNA,经PCR扩增,产物纯化后与PMD 18-T Vector连接,转化到大肠杆菌DH5α,筛选得到标准品的质粒,提取质粒并进行定量。[结果]重组S片段基因质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长,表明基因已成功克隆。以不同稀释水平的标准品进行扩增,统计学分析显示C t值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,回归系数在0.99以上。成功制备并获得稳定的S片段重组质粒。[结论]该方法能大量制备质粒标准品,如何进行荧光RT-PCR条件的优化是关键所在。     

乙肝病毒核心抗原DNA疫苗诱导小鼠抗原特异性CD8+T细胞动态变化和动态分布

目的：研究乙肝病毒核心抗原(HBcAg)DNA疫苗诱导的细胞免疫应答。方法：用表达乙肝病毒核心抗原N端144个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc144)100ug免疫C57BL／6小鼠，用细胞内细胞因子染色技术检测小鼠体内抗原特异性CD8^ T细胞的动态变化。结果：pHBc144免疫后抗原特异性CD8^ T细胞逐渐增多，在初次免疫的第14天出现第一个免疫应答高峰，此后抗原特异性CD8^ T细胞数量逐渐下降进入免疫记忆期并在1年内维持在稳定水平。加强免疫后在第10天抗原特异性CD8^ T细胞数量达到高峰，约是初次免疫应答高峰的2倍，此后抗原特异性CD8^ T细胞数量逐渐下降，但下降的速度比初次免疫应答减缓。结论：pHBc144DNA疫苗可诱导有效的细胞免疫应答。     

穿心莲内酯对人PBMC/PBM表达IL-18相关细胞因子的影响

目的:研究穿心莲内酯对外周血单核细胞表达IL-18相关细胞因子的影响。方法:不同浓度穿心莲内酯处理LPS刺激的PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells,外周血单个核细胞)和LPS+IFNγ-/IL-4激活的磁珠分选PBM(PeripheralBlood Monocytes,外周血单核细胞),利用real-time RT-PCR法检测IL-18、IL-18BP、IL-18Rα、IL-18Rβ基因转录水平,ELISA法检测PBM上清中的IL-18、IL-18BP和IL-1β、IL-1Rα。结果:穿心莲内酯呈剂量和时间依赖地调节PBMC IL-18和IL-18BP的表达。穿心莲内酯处理使LPS刺激的PBMC IL-18BP转录增加,IL-18BP/IL-18比值升高;使LPS+IFNγ-激活的PBM表达IL-18BP/IL-18比值从9.60倍升高至214倍;IL-4激活的PBM表达IL-1Rα/IL-1β比值从9 200降低至6 520。结论:穿心莲内酯可调节激活的外周血单核细胞IL-18相关基因转录和表达,抑制炎症时IL-18的高表达。     

重组乙肝病毒核心基因DNA与表面抗原-抗体共免疫应答研究

目的:了解小鼠对乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因免疫及与乙肝表面抗原-抗体复合物(HBsAg-抗HBs)联合免疫的应答。方法:用表达乙肝病毒核心抗原N端144个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc144)100μg及含1μgHBsAg的重组乙肝表面抗原-鼠抗体组建的复合物(简称sIC)免疫Balb/c小鼠。用ELISA法检测血清抗体IgG和IgG1、IgG2a亚类的效价。用半定量PCR法分别检测鼠脾细胞IFN-γ及IL-4的mRNA。结果:pHBc144及sIC联合免疫鼠的抗HBs IgG、IgG1、IgG2a效价均显著高于sIC组(P＜0．05)。同时小鼠还可产生抗HBc及由HBsAg、HBcAg特异诱生的IFN-γ及IL-4。但与sIC共免疫,小鼠对HBcAg诱生的IFN-γ mRNA有所降低。结论:可用HBcAg基因与sIC共免疫,以获得针对乙肝病毒2种结构蛋白的免疫应答。     

质粒DNA促进HBsAg—抗HBs复合型疫苗诱生的免疫应 …

目的 研究ＨＢｓＡｇ－抗ＨＢｓ－质料ＤＮＡ复合型疫苗的免疫原性及其诱生细胞免疫应答的类型。方法 分别以ＨＢｓＡｇ、ＨＢｓＡｇ－抗－ＨＢｓ（ＩＣ）、ｐＩ／ＡｍｐＨＢｓ、ＩＣ－ｐＩ／ＡｍｐＨＢｓ及ＩＣ－ｐＩ／Ａｍｐ免疫小鼠，检测抗－ＨＢｓ的效价，分析抗－ＨＢｓ ＩｇＧ亚类（ＥＬＩＳＡ）；取免疫小鼠脾细胞，体外抗原刺激，用竞争性ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＩＦＮ－γ及ＩＬ－４ ｍＲＮＡ转录水平。结果 ＩＣ－ｐＩ