质粒介导16S rRNA甲基化酶在奇异变形杆菌临床分离株的流行情况研究

到目前为止,在革兰阴性杆菌中已发现AnnA、RmtA、RmtB、RmtC、RmtD和NpmA 6种16S rRNA甲基化酶,且编码这些酶的基因通常和超广谱β-内酰胺酶(ESBL)基因共处一个质粒上,通过质粒在不同的菌株之间播散~[1-4].RmtC型16S rRNA甲基化酶首次在奇异变形杆菌中被发现~[4],但16S rRNA甲基化酶在奇异变形杆菌中的流行情况还不清楚.本研究的目的是对从我院2004年5月至2007年9月临床标本中分离的198株奇异变形杆菌进行16SrRNA甲基化酶筛查,并对其转移机制进行研究,现将结果报道如下.     

异氟醚对人单核细胞株THP-1细胞凋亡的影响

目的:检验异氟醚是否诱导入单核细胞株THP-1细胞凋亡。方法:培养THP-1细胞于RPMI1640培养基中,检测THP-1细胞与不同浓度(0.5、1.0、2.0MAC)异氟醚接触不同时间(0、2、4、6h)的细胞凋亡率,同时检测接触异氟醚6h后再继续培养至24h的细胞凋亡率。细胞用碘化丙啶染色后通过流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:THP-1细胞凋亡率呈剂量依赖方式增加,在接触异氟醚6h为12.62±4.56%[1.0MAC],16.02±4.31%[2.0MAC]),对照为2.50±0.66%;在接触异氟醚24h为35.49±5.89%[1.0MAC],37.50±5.36%[2.0MAC]),对照为7.71±1.36%。THP-1细胞凋亡率也呈时间依赖方式增加,在接触1.0MAC异氟醚为1.14±0.34%[0h],8.55±1.44%[4h],12.62±4.56%[6h],35.49±5.89%[24h],对照为1.11±0.35%[0h],1.27±0.18%[4h],2.50±0.66%[6h],7.71±1.36%[24h];在接触2.0MAC异氟醚为1.20±0.25%[0h],9.30±1.78%[4h],16.02±4.31%[6h],37.50±5.36%[24h],对照为1.11±0.35%[0h],1.27±0.18%[4h],2.50±0.66%[6h],7.71±1.36%[24h]。结论:吸入0.5MAC以下浓度异氟醚对THP-1细胞凋亡无明显影响,当吸入浓度大于1.0MAC时,异氟醚以剂量和时间依赖方式诱导THP-1细胞凋亡。     

组氨酸蛋白激酶EnvZ抑制剂对福氏志贺菌毒力影响的初步研究

目的初步研究福氏志贺菌组氨酸蛋白激酶EnvZ抑制剂对福氏志贺菌毒力的影响。方法通过构建志贺菌：EnvZ胞内段（SF-EnvZc）蛋白的原核表达质粒,表达并纯化SF-EnvZc蛋白,在SPECS公司的小分子化合物库中模拟筛选出的10个候选EnvZ抑制剂的基础上,通过体外磷酸化的方法筛选出能够有效地抑制SF- EnvZc蛋白磷酸化的小分子化合物（EnvZ抑制剂）,然后采用表面等离子共振（SPR）技术检测EnvZ抑制剂与SF-EnvZc蛋白的结合力,并采用小鼠角结膜志贺菌感染模型检测EnvZ抑制剂对福氏志贺菌株Sf9380毒力的影响。结果在10个候选EnvZ抑制剂中,化合物1、2、3能够有效地抑制SF-EnvZc蛋白的磷酸化,其IC50值分别为（70．17±5．83）、（10．18±0．86）和（37．66±9．64）μmol／L,且上述3个化合物表现出对SF-EnvZc蛋白的高亲和力,其平衡解离常数（Kd）分别为4．08、3．57和2．94μmol／L,其中化合物1和2能够明显抑制福氏志贺菌株Sf9380导致的小鼠角结膜炎症反应（由＋＋＋变为-）,化合物3能够明显降低其炎症反应（由＋降为＋）,化合物1、2、3的最小有效浓度分别为12．5、12．5和100μmol／L结论筛选出3个EnvZ抑制剂,化合物1、2、3能够不同程度地抑制或降低福氏志贺菌导致的小鼠角结膜炎症反应,提示EnvZ抑制剂能够降低福氏志贺菌的毒力。     

逆转录聚合酶链反应、间接免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验检测严重急性呼吸综合征相关冠状病毒感染的探讨

严重急性呼吸综合征(SARS)是2002年底首先在我国南部地区爆发流行的一种新型传染病，2003年4月经世界卫生组织(WHO)组织的国际多中心合作网络研究确定，该病由新发现的SARS相关冠状病毒(SARSCOV)所致。目前虽已初步建立了包括逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫荧光试验(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)的特异性检测方法，对SARS的诊断起到重要作用，     

β-lactamase genotyping of multi-drug resistant Acinetobacter baumannii in a neonatal intensive care unit

Objective To investigate the correlation between drug resistance and β-actamase genes of multi-drug resistance Acinetobacter baumannii (MDR-AB) in neonatal intensive care unit to provide evidence for rational antibiotics administration and nosocomial infection control.Methods Twenty-six MDR-AB strains were separated and collected from clinical specimens.The minimum inhibitory concentrations of 13 antimicrobial agents were determined by agar dilution method.Genotypes of β-lactamase were detected by polymerase chain reaction.Results The resistant rates of the 26 strains to Ceftazidime,Cefoxitin,Piperacillin-tazobactam and Ciprofloxacin were 100.0%.About 80.8% to 96.2% of these strains were resistant to the other antimicrobial drugs.Among the 26 MDR-AB strains,100% (26/26) strains possessed oxa-51,77% (20/26) possessed oxa-23 gene,54% (14/26) carried arnpC gene,both oxa-23 and ampC were identified in 42% (11/26) strains,while oxa-24,oxa-58,imp-1,imp-4 and vim-2 gene were not identified.Conclusions The drug resistance of Acinetobacter baumannii is serious,oxa-23 and ampC are the major plactamase genes carried by MDR-AB in neonatal intensive care unit.     

生物安全防护水平三级实验室新风口设计的考虑

<正>目前,随着SARS病毒、禽流感病毒、耐药结核菌等高致病性病原微生物的不断涌现,生物安全成为世界各国普遍关注的研究焦点,同时生物安全实验室的建设也进入一个快速发展的时期。为加强对病原微生物感染的控制、提高生物安全防护能力,我国各省市疾病预防控制中心、高校或科     

不同麻醉方法对人外周血淋巴细胞促炎性细胞因子基因表达的影响

目的：研究复合麻醉中人外周血淋巴细胞IL－8,IL－1β基因表达,探讨异氟醚吸入和硬膜外阻滞对外周血炎性反应的影响。方法：24例肝脏部分切除手术病人随机分为异氟醚组（n=12)和硬膜外组（n=12),在麻醉诱导后即刻和4h分别取静脉血20ml用外周血淋巴细胞分离液（Ficoll)进行梯度离心,从收获的淋巴细胞中提取RNA,逆转录合成cDNA,PCR后电泳扫描求积,检测淋巴细胞IL－8,IL－1β和mRNA表达结果：异氟醚组麻醉维持4h后比麻醉诱导后即刻IL－8,IL－1β的表达增加,（P＜0．05）,硬膜外组麻醉维持4h与麻醉诱导后即刻ILIL－8,IL－1β的表达无明显变化（P＞0．05）,结论：复合麻醉中吸入异氟醚能增强肝脏部分切除病人外周血淋巴细胞促炎性细胞因子mRNA表达,即在转录水平上,异氟醚能增强外周血炎性反应,而硬膜外阻滞无此效应。     

紫草多糖抑制LPS活化PBMC表达炎症相关因子的基因转录

目的:研究紫草多糖对LPS活化外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)表达TNF-α、IL-10、IL-18相关因子的影响及其可能的信号通路。方法:LymphopreTM(1.077 g/ml)淋巴细胞分离液离心分离正常健康人PBMC,紫草多糖处理正常健康人的PBMC或LPS活化的PBMC,利用Real-time RT-PCR法检测TNF-α、IL-10、IL-18、IL-18BP、IL-18Rα、IL-18Rβ基因转录水平,通过Western blot检测PBMC中ERK磷酸化水平。结果:紫草多糖可增强PBMC TNF-α、IL-10、IL-18Rα、IL-18Rβ的转录,与LPS处理的PBMC相近。紫草多糖处理LPS活化的PBMC,在处理早期(4小时)可抑制LPS活化的PBMCTNF-α及IL-18的表达,抑制率达15%~50%(P<0.05);并可抑制LPS诱导的ERK磷酸化,抑制率达27%~61%(P<0.05)。结论:紫草多糖可能是通过抑制PBMC的MAPK信号通路进而抑制LPS诱导的炎症相关因子TNF-α等高表达。     

肾综合征出血热患者血清样本中汉坦病毒RNA检测及其临床意义

目的观察病毒血症在病程各期的变化。方法根据汉坦病毒血清Ⅰ型76-118株及血清Ⅱ型80-39株M基因G1区设计两对公有引物及一条探针,应用RT-nestedPCR方法对57例96份肾综合征出血热(HFRS)患者血清中HV-RNA检测,所有PCR产物用DOT-Blot证实。结果96份样本中68份阳性,阳性率70.8%;在病程第1、2、3周,HV-RNA检测率分别为94.7%、47.5%、25%,P<0.05;重型病人持续2周HV?RNA阳性检测率100%,而轻、中型分别为12.5%及42.8%,P<0.05。结论在HFRS病程中,病毒血症是一个急性过程,与发热期相平行,病毒血症持续时间与病情轻重密切相关。