中性红法检测巨噬细胞吞噬功能的实验条件的优化

目的:优化中性红法检测巨噬细胞(Mψ)吞噬功能的实验条件,为快速筛选Mψ吞噬功能调节成分提供更为稳定的细胞模型.方法:以小鼠腹腔Mψ吞噬中性红的能力作为模型检测指标,考察细胞收集方法、细胞浓度、贴壁孵育时问、培养时间、LPS浓度、中性红浓度、检测波长等因素对检测结果的影响,优化中性红法检测Mψ吞噬功能的实验条件.结果:本实验条件下,PBS等三种清洗液收集小鼠腹腔Mψ的效率没有显著性差异(P>0.05);Mψ贴壁孵育时间以3h为宜;Mψ加样浓度可选择在2～8×106/ml范围内;LPS在30μg/ml时达到最佳刺激效应;中性红浓度选择0.09%能够满足检测要求;加入中性红后的反应时间以3h的OD值最高:检测波长以520nm时OD值最高.结论:优化中性红法检测Mψ吞噬功能,对快速筛选Mψ吞噬功能调节成分具有实用价值.     

合欢皮乙醇提取物在荷瘤鼠体内抗肿瘤作用的研究

目的 探讨合以乙醇提取物在荷瘤鼠体内的抗肿瘤活性。方法 采用ＥＬ－４细胞株建立Ｃ５７ＢＬ／６小鼠荷模型,在不同时间给予合以乙醇提取物注射,观察期对荷瘤小鼠存活时间及荷瘤生长速度的影响。结果 该提取物能明显地抑制小鼠荷瘤的生长速度,延长荷瘤鼠的存活时间。结论 合欢皮乙醇提取物具有较好的体内抗肿瘤作用。     

六君子汤对幽门螺杆菌感染小鼠胃内微生态环境的影响

目的探讨六君子汤治疗幽门螺杆菌(H.Pylori)感染相关性胃病的机制。方法将60只小鼠随机分成5组,分别为正常对照组、模型组及六君子汤大、中、小剂量治疗组。正常对照组给予生理盐水,其余小鼠造模成功后分别给予生理盐水(模型组)及各剂量六君子汤灌胃治疗,末次灌胃2周后,处死小鼠,计算每只小鼠每克胃组织中所含菌落数。结果六君子汤大、中剂量治疗组乳酸杆菌、双歧杆菌数量接近甚至超过正常对照组水平,较模型组明显增加(P<0.05或P<0.01),六君子汤大剂量治疗组双歧杆菌数量较小剂量组增加,差异有统计学意义(P<0.05)。六君子汤大剂量治疗组肠球菌数量较模型组增加,差异有统计学意义(P<0.05),模型组H Pylori定植密度为102~103CFU/g,各治疗组H Pylori定植密度为101~102CFU/g,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论六君子汤可以通过扶植胃内正常菌群、改善胃内微生态环境,来有效的阻止H.Pylori在胃内定居或增殖,且六君子汤对正常菌群的扶植作用呈明显的剂量-效应关系。     

高效液相色谱法测定鸭掌散不同煎液中麻黄碱的含量及体外抗菌作用比较

目的考察用合煎(传统汤剂)、分煎(配方颗粒汤剂)方法制备的鸭掌散汤剂中麻黄碱含量的变化,并比较其体外抗菌作用。方法①建立高效液相色谱方法,采用Diamonisl C18柱(250 mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸(5∶95)为流动相,流速1ml/min,检测波长207 nm。分析鸭掌散合煎液和分煎液样品中麻黄碱的含量变化。②采用稀释法体外测试鸭掌散不同煎液对常见菌种的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果①鸭掌散分煎液中麻黄碱的平均含量大于合煎液中麻黄碱的平均含量。②鸭掌散分煎液对福氏痢疾杆菌有抑菌作用,而合煎液没有;合煎液对白色葡萄球菌、黄曲霉菌的抑菌作用大于分煎液。结论与传统汤剂比较,鸭掌散配方颗粒汤剂中麻黄碱的含量较高,抗菌谱较广。     

六味降脂汤对高脂血症大鼠肠道菌群及小肠NPC1L 1、ACAT2和APOB48蛋白表达的影响

目的:探究六味降脂汤对高脂血症可能的干预机制以及对肠道菌群的影响。方法:60只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阿托伐他汀0.9 mg/kg组及六味降脂汤5.4、10.7、21.4 g/kg。除正常对照组外,其余各组给予高脂饲料合并高脂乳剂灌胃6 w制备高脂血症大鼠模型,造模成功各组灌胃给予相应药物,8 w后采集血清、粪便及小肠组织样本,检测大鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)含量;同时采用16S rDNA高通量测序分析肠道菌群的多样性和结构变化;免疫组织化学法检测大鼠小肠组织NPC1L1、ACAT2及APOB48蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量显著升高,小肠NPC1L1、ACAT2及APOB48蛋白表达显著上调(P<0.01),肠道菌群Beta多样性改变;与模型对照组比较,各给药组TC、TG、LDL-C含量均明显降低(P<0.05或P<0.01),六味降脂汤10.7 g/kg组小肠NPC1L1、ACAT2及APOB48蛋白表达明显下调(P&...     

小鼠腹腔巨噬细胞模型的优化及其在中药复方筛选中的应用

目的:优化巨噬细胞(Mφ)筛选模型,并应用于四物汤等6个促吞噬组分的筛选。方法:以小鼠腹腔Mφ吞噬中性红的能力作为模型检测指标,考察细胞收集方法、细胞浓度、贴壁孵育时间、培养时间、LPS刺激浓度、中性红浓度、检测波长等因素对检测结果的影响,优化中性红法检测Mφ吞噬功能的实验条件,并用于四物汤等6个复方总多糖中促吞噬活性成分的筛选。结果:本实验条件下,PBS等三种清洗液收集小鼠腹腔Mφ的效率没有显著性差异(P>0.05);Mφ贴壁孵育时间以3h为宜;Mφ加样浓度可选择在2～8×106/ml范围内;LPS在30μg/ml时达到最佳刺激效应;中性红浓度选择0.09%能够满足检测要求;加入中性红后的反应时间以3h的OD值最高;检测波长以520nm时OD值最高。四物汤、四君子汤、六味地黄汤多糖组Mφ吞噬中性红的能力明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:优化中性红法检测Mφ吞噬功能,对筛选中药免疫活性成分具有实用意义。     

葛根散等3首解酒方对急性酒精性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的影响

目的:比较葛根散等3首方剂对急性酒精性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的干预效果,探讨3首方剂防治酒伤的部分作用机制。方法:将小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、各给药大、中、小剂量组,制备急性酒精性肝损伤模型,给药组以中药水煎剂灌胃,对照组代以蒸馏水,检测肝组织病理学改变、肝细胞凋亡指数、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠肝组织脂肪变性、肝细胞凋亡指数及肝细胞Bax阳性表达均明显升高(P<0.01),肝细胞Bcl-2阳性表达明显降低(P<0.01)。与模型对照组比较,葛根散和葛花解酲汤在一定剂量下都能显著减少小鼠肝组织脂肪变性、肝脏凋亡指数和Bax蛋白的表达(P<0.01),显著增加小鼠肝细胞Bcl-2蛋白的表达(P<0.01);石膏汤在一定剂量下能显著减轻小鼠肝组织脂肪变性(P<0.01),但对小鼠肝脏凋亡指数及Bcl-2、Bax的表达无影响,与葛根散比较具有显著差异(P<0.05)。结论:葛根散和葛花解酲汤能减轻肝细胞的变性、坏死,减少细胞凋亡,可能与其解酒机制有关。     

复方白毛夏枯草免疫调节作用的实验研究

目的 探讨复方白毛夏枯草对实验小鼠免疫功能的影响.方法 实验小鼠随机分为复方白毛夏枯草大、中、小剂量组和生理盐水对照组,给予相应的药物及生理盐水灌胃7 d后,测定胸腺指数、脾脏指数、EA花环形成率、吞噬细胞吞噬中性红的能力、脾淋巴细胞转化能力、血清IgG及IgM含量.结果 与生理盐水对照组比较,复方白毛夏枯草各组小鼠的胸腺及脾脏指数无明显差异(P＞0.05);腹腔巨噬细胞的数量明显增加(P＜0.05),同时吞噬能力也明显增强(P＜0.05或P＜0.001),以中、大剂量用药组最显著;血清中免疫球蛋白IgG的含量明显升高(P＜0.05或P＜0.01),大剂量用药组含量最高,而血清中免疫球蛋白IgM的含量无明显变化(P＞0.05);脾脏淋巴细胞增殖能力有显著提高(P＜0.01或P＜0.05或P＜0.001),以大剂量用药组增殖最显著.结论 复方白毛夏枯草对实验小鼠免疫功能总体上表现为增强效应.     

中医药防治动脉粥样硬化炎症反应相关信号通路研究进展

动脉粥样硬化(AS)是我国当今社会中存在的对人体健康产生巨大威胁的一种慢性炎症性疾病,其所引发的冠心病、脑卒中等多种心脑血管疾病具有高致死率和高致残率的特点。AS以内皮细胞功能障碍、脂蛋白聚集和炎性细胞浸润为主要表现,其演变过程的病理机制非常复杂。炎症反应贯穿于AS发生、发展的整个过程,且为多种病理因素的共同环节,干预炎症反应是控制AS的有效途径和重要策略。而中医药凭借其特有的优势,在AS的临床治疗中一直发挥着重要作用。传统中医理论认为,AS的形成和发展与风、火、痰、瘀、虚5种因素紧密相关,其中瘀血和痰浊与其关联最为密切,瘀血和痰浊既是病理产物同时又是致病因素,其形成主要是因于机体整体的阴阳失衡,人体气血津液输布障碍和脏腑功能失调。各致病因素既有独立性,又有相关性。近年来,关于中医药干预AS作用与机制的研究日渐增多,但中医药的干预对AS炎症反应信号通路的影响尚未见报道,该文章主要介绍中医药对AS的认识、中医药干预AS炎症反应相关的6条信号通路,即酪氨酸激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路、核转录因子-κB(NF-κB)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)依赖性信号通路,活性氧(ROS)依赖性信号通路,CD40/CD40L信号通路,Toll样受体(TLR)依赖性信号通路。     

泻心汤含药血清对RAW264.7源性泡沫细胞TLR9/MyD88/NF-κB p65信号通路的影响

目的:通过体外细胞实验研究泻心汤对巨噬细胞源性泡沫细胞Toll样受体9(TLR9)信号通路的影响,探讨泻心汤抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:50只SPF级雄性SD大鼠随机分为泻心汤低、中、高剂量组(1. 4,4. 2,12. 6 g·kg~(-1)·d~(-1))及正常组,除正常组20只外,其余每组10只,正常组给予等体积的纯水灌胃,各组连续灌胃7 d,末次给药1 h后,分离血清,制备泻心汤低、中、高剂量组含药血清及正常组血清。用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)干预RAW264. 7巨噬细胞分化为泡沫细胞。采用油红O染色法鉴定细胞泡沫化;噻唑蓝(MTT)比色法观察含药血清对巨噬细胞源性泡沫细胞增殖的影响后,选择各剂量浓度为20%的含药血清作用于泡沫细胞模型,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β),γ-干扰素(INF-γ)的含量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别测定TLR9,髓样分化因子88(MyD88),核转录因子-κB(NF-κB) mRNA及蛋白表达。结果:油红O染色显示出ox-LDL干预后细胞内红色颗粒明显,泡沫细胞模型制备成功; MTT比色法结果显示,与正常组血清比较,泻心汤高剂量组含药血清在10%～30%浓度范围内,其细胞增殖差异无显著性。后续选择各剂量浓度为20%的含药血清干预经ox-LDL诱导的泡沫细胞,与正常组比较,模型组用ox-LDL干预后诱导了TLR9,MyD88,NF-κB p65,IL-1β,INF-γ的高表达(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,不同剂量组泻心汤含药血清干预后降低了TLR9,MyD88,NF-κB p65,IL-1β,INF-γ的表达(P 0. 05,P 0. 01),且部分干预作用呈现出剂量依赖性。结论:泻心汤含药血清可抑制泡沫细胞TLR9/MyD88/NF-κB p65通路以及促炎因子IL-1β,INF-γ的转录和过表达,这可能是泻心汤抗动脉粥样硬化重要作用机制之一。