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目的利用基因工程技术制备铜绿假单胞菌外毒素A(PE),为深入研究PE的致病机理和免疫防治奠定基础。方法应用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增外毒素A全长结构基因,将其克降于原核表达载体pQE-31中,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109, IPTG诱导表达;制备融合蛋白包涵体,并采用Ni-NTA柱亲和层析、葡聚糖凝胶过滤和阴离子交换层析分离和纯化目的蛋白;采用透析法对纯化后的目的蛋白进行复性,MTT法测定复性后的重组PE对L929细胞、B16黑素瘤细胞的细胞毒活性。结果通过对PCR反应体系的优化,扩增到了PE全长结构基因。所构建的pQE-PE重组质粒经酶切及测序鉴定与设计序列一致;转化E.coli JM109后,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(M_r)约为66×10~3,与理论预期值一致;破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式表达。经亲和层析、葡聚糖凝胶过滤和阴离子交换层析后蛋白纯度大于95%。MTT法测得重组PE对L929细胞和B16黑素瘤细胞的半数抑制浓度(IC_(50)值)分别为2.13μg/ml、2.58μg/ml。结论通过对PE的表达纯化,获得了具有细胞毒活性的重组PE,为利用基因工程手段大量制备PE的工作奠定了基础。 相似文献
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目的:探讨重症急性胰腺炎(SAP)致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织β-AR和G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)的变化规律以及甲强龙的影响。方法:SD大鼠36只,随机分为3组,每组12只。对照组,仅做十二指肠翻动;模型组,胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg),建立SAP模型;干预组,建立SAP模型后1 h给予甲强龙(30 mg/kg)。于6 h和12 h分别处死大鼠6只取肺组织,放射配基结合实验测量肺组织β-AR最大结合容量Bmax和平衡解离常数Kd,免疫荧光法检测肺组织GRK2表达。结果:模型组和干预组胰腺组织损伤评分显著高于对照组,模型制备成功;模型组和干预组肺组织损伤评分显著高于对照组,发生SAP肺损伤;模型组β-AR Bmax显著低于对照组和干预组,Kd显著高于对照组和干预组;模型组GRK2的表达显著高于对照组和干预组。结论:SD大鼠肺组织有丰富的GRK2表达,SAP肺损伤大鼠肺组织GRK2表达显著增加,这可能是β-AR下调的重要机制。 相似文献
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薄层色谱扫描法测定龙胆和苦胆草片中龙胆苦甙的含量 总被引:6,自引:1,他引:5
报告用薄层色谱扫描法测定滇产龙胆生药及苦胆草片制剂中龙胆苦甙含量的方法和结果。研究表明,云南不同产地龙胆生药,含量差别最高4.2倍;不同厂家苦胆草片制剂,含量差别最高达5倍,内在质量显然不同。龙胆苦甙是龙胆的有效成分,为保证药品质量和合理用药,应建立系统的含量控制标准,本研究为此提供了科学依据和技术方法。 相似文献
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家兔脑出血模型的建立及脑血清对该模型脑组织含水量的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
介绍采用天然骨缝标志定位,注入自体动脉血复制家兔脑出血模型的方法。并观察了中药脑血清对该模型脑组织含水量的影响。结果提示:该药能明显减轻脑出血家兔的脑组织含水量,可减轻脑水肿。 相似文献
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28.
饶春意 《现代食品与药品杂志》2003,13(5):27-28
目的 通过对头孢呋辛钠溶液颜色变化原因的探讨和研究不同溶剂对溶液颜色的影响 ,选出最适合的溶剂测定头孢呋辛钠溶液的颜色。方法 通过HPLC法及目测比色法来探讨含量、杂质与溶液颜色的关系 ,并比较了不同溶剂时的溶液颜色变化。结果 头孢呋辛钠溶液的颜色变化与杂质有关 ,头孢呋辛钠以水和 0 .0 5mol/LEDTA·2Na为溶剂时溶液颜色有显著不同。结论 0 .0 5mol/LEDTA·2Na是头孢呋辛钠颜色测定的理想溶剂 相似文献
29.
目的 研究三角帆蚌多糖的抗肿瘤活性。方法 给荷HepA腹水瘤小鼠胃饲三角帆蚌多糖(每日剂量5 0 ,2 5 0和5 0 0mg/kg) 8d ,检测抑瘤率、胸腺指数和脾指数;采用3H-TdR掺入法,检测三角帆蚌多糖对HepA腹水瘤细胞DNA合成的影响。结果 在上述三种试验剂量,三角帆蚌多糖对小鼠HepA腹水瘤的抑制率分别为3 4.9%、48.6%和5 1.0 % ;与对照组比较,试验组的胸腺指数分别提高5 5 .6% ,61.1%和77.8% ,脾指数分别提高8.2 % ,12 .3 %和16.3 % ;在离体细胞培养试验中仅高浓度组(1000μg/mL)三角帆蚌多糖对HepA瘤细胞DNA合成和细胞增殖有显著的抑制作用(P<0.05)。结论 三角帆蚌多糖有一定的抗肿瘤活性,其作用机制可能与增强胸腺免疫功能有关。 相似文献
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