人红细胞胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性的测定

目的建立红细胞胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶(IRTK)的活性测定法。方法应用IRTK催化的聚(谷,酪)4∶1的磷酸化产物作为抗原,抗磷酸酪氨酸抗体作为第一抗体,羊抗兔lgG-HRP作为第二抗体,建立酶联免疫吸附测定法。结果批内变异系数为7．8％,批间变异系数为8．6％。20例健康入的红细胞IRTK活性值为(0．184±0．026)nmolPY/(min．mg受体蛋白),36例2型糖尿病患者中有5例活性低于正常范围。胰岛素在106mol/L时对IRTK的激活达到最大限度,Mn2+是IRTK的激活剂。结论此法灵敏、定量、准确、简便,是深入研究糖尿病及其它胰岛素抵抗综合征病因及治疗的一个极有用的检测方法。     

雷帕霉素纳米粒滴眼液联合环孢素A缓释膜治疗兔高危角膜移植术后免疫排斥反应的研究

Objective To evaluate the combined effect of topical rapamycin (RAPA) eye drop in nanometer vector and poly (lactic acid) (PLA) wafers of cyclospoirne A(CsA) in the prevention of acute allograft rejection after rabbit corneal transplantation. Methods It was an experimental study. RAPA was incorporated into the nanometer particles and CsA was incorporated into PLA wafers. A was syngeneic control whose both donor and recipient are New Zealand rabbit. Gray donor corneas were implanted into the 102 recipients of New Zealand albino rabbits with corneal neovascularization who were randomly divided into B, C, D, E, F, G 6 groups to receive the different types of therapy: B was no therapy control; C was eye drop of nanometer vector but no RAPA twice a day,28 days; D was PLA wafers in the anterior chamber of rabbit eyes but no drugs; E was 0.5% RAPA eye drop of nanometer vector twice a day,28 days; F was PLA wafers of CsA in the anterior chamber of rabbit eyes; G was PLA wafers of CsA in the anterior chamber of rabbit eyes and 0.5% RAPA eye drop of nanometer vector eye drop twice a day for 28 days together. Postoperative evaluation included slit-lamp biomicroscopy, histopathology and immunohistoiogy, Cytokines related with neovascularization and immunosuppression in the corneal tissue by RT-PCR. The graft survival was assessed by One-Way ANOVA and q test. Results Corneal allograft survival time: A (100.00±0.00), B ( 8.44±1.24), C (8.89±2.57), D (8.56±2.30), E (43.11±5.58), F (43.67±9.54), G (72.00±15.34)d. Group G led to a statistically significant prolongation of transplant survival and was superior than group E and F which was a statistical prolongation compared with group B, C and D (qGE=11.42, qGF=11.24,qEB=13.64, qEC=13.38, q<=13.46, qFB=13. 82, qFC=13.56, qFD=13.64; P<0.01). Immunohistopathologically, the grafts were subjected to an immune response contained a dense infiltrate of neutorphils,CD4+ and CD8+ T lymphocytes in the group B ,C and D. This cellular infiltrate was a significant reduction in group E,F,G. RT-PCR showed that the gene expression of IL-2 was inhibited earlier (3 days) in group F, G and VEGF gene expression being suppressed later (14 days) in group E, G. Conclusions Combined therapy with topical application of RAPA eye drop of nanometer vector and CsA PLA wafers can significantly prolong the survival of allograft at high-risk. Moreover, topical combined treatment of them is more effective, lower dosage, less side-effects and cheaper than the treatment with topical individual immunosuppressive drug.     

人红细胞胰岛素受体自身磷酸化的酶联免疫吸附测定

目的建立人红细胞胰岛素受体自身磷酸化测定法。方法应用合成的磷酸酪氨酸钥孔帽贝血蓝蛋白（ＰＹＫＬＨ）免疫家兔得到抗血清，将纯化的抗磷酸酪氨酸抗体作为第一抗体，羊抗兔Ｉｇ酶结合物（辣根过氧化物酶标记）作为第二抗体，建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定法。结果批内变异系数为８．４％，批间变异系数为９．０％。２０例健康人的红细胞ＩＲ的自身磷酸化活性，测定值为０．１５０±０．０２２ｎｍｏｌＰＹ／ｍｇ受体蛋白。在体外，胰岛素在１０－６ｍｏｌ／Ｌ时对自身磷酸化达到最大激活。结论用酶免法测定人红细胞胰岛素受体灵敏、特异、简便，为胰岛素作用机制的理论研究、胰岛素受体基因突变的检测和糖尿病及其它胰岛素抵抗综合症的病因及治疗的探讨提供了有效的方法。     

甲状腺过氧化物酶抗体在自身免疫性甲状腺疾病中的表现

甲状腺功能亢进（甲亢）、甲状腺功能低下（甲低）和亚临床甲低患者甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）、甲状腺球蛋白抗体（TGAb）和甲状腺微粒体抗体（TMAb）的阳性率和阳性患者的抗体水平均高于正常对照组，TPOAb阳性率在各组中又明显高于同组的TGAb和TMAb阳性率。甲状腺功能恢复正常的复诊组TPOAb阳性患者的抗体水平明显低于甲亢组、甲低组和亚临床甲低组。提示TPOAb对自身免疫性甲状腺疾病的诊断、治疗及预后评估具有一定的临床意义。     

拮抗甲状腺刺激性抗体单链抗体的制备及鉴定

目的 构建一个针对Graves病(GD)患者IgG的鼠单链抗体,体外实验证明其是否具有拮抗甲状腺刺激性抗体(TSAb)的能力.方法 利用噬菌体展示技术,得到一个抗TSAb的噬菌体抗体scFv,测定其相对亲和力.用表达重组人促甲状腺激素受体(hTSHR)的中国仓鼠卵巢细胞测定GD患者血中TSAb水平,并观察此scFv片段对GD患者IgGs诱导cAMP释放的抑制作用.结果 16例GD患者中有13例TSAb活性被scFv克隆T17显著抑制(最大抑制率为88%),相对亲和力为2.8 mol/L.结论 本实验利用噬菌体展示技术,筛选出一个具有较强拮抗TSAb活性的scFv克隆(T17).     

糖皮质激素升高因子在自身免疫性甲状腺疾病发病中的作用

目的：观察外周血中糖皮质激素升高因子（GIFs）水平在GIF-HPA反馈回路及实验性自身免疫性甲状腺炎（EAT）形成中的作用,探讨AITD发病机理。方法：采用EAT易感的Lewis大鼠和非易感的Wistar大鼠,均用Tg免疫诱发EAT形成,观察免疫后不同时间（初次抗原免疫后3～4小时和8～12小时及EAT形成时）,其甲状腺组织炎症反应和血清中皮质醇、GIFs（IL-1β,IL-6）和TPOAb水平。结果：诱发EAT的Lewis大鼠甲状腺炎发病率及甲状腺炎细胞浸润程度,均明显重于Wistar大鼠。Tg免疫后3～4小时,Lewis大鼠血清中皮质醇水平呈轻度升高,而Wistar大鼠明显升高。两种大鼠血清中GIFs（IL-1β,IL-6）水平动态变化与各自皮质醇水平的变化类似,免疫后Wistar大鼠血清中两种细胞因子水平的升高水平均明显高于Lewis大鼠。免疫后（3～4小时组除外）Lewis大鼠血清中TPOAb水平明显高于Wistar大鼠。结论：可以认为个体免疫应答生成的IL-1β、IL-6等细胞因子水平会影响GIF-HPA反馈回路,其异常反应也是构成AITD发病的因素。     

抗肿瘤坏死因子-α治疗葡萄膜炎的研究现状

葡萄膜炎系眼内炎症的总称，病情反复发作，且治疗比较棘手，是临床上常见的致盲性眼病之一。目前认为葡萄膜炎的发病与葡萄膜自身抗原的自身免疫反应有着十分密切的关系，有学认为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是参与葡萄膜炎发生和发展的关键性细胞因子，阻断TNF-α的生成和活性，可抑制视网膜葡萄膜炎的发生和发展。本就目前TNF-α及抗TNF-α在葡萄膜炎发病及治疗的研究现状进行综述。     

碘对环孢霉素A抑制免疫性甲状腺炎拮抗作用

目的研究碘过量对环孢霉素A(Cyclosporin A,CsA)抑制实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)形成的拮抗作用,进一步探讨碘在自身免疫性甲状腺炎发病中的作用。方法给予Lewis大鼠不同碘摄入量,EAT诱发组和EAT+CsA组均用猪Tg进行免疫诱发EAT形成,EAT+CsA组于首次免疫后的第10 d开始腹腔注射CsA,5 mg/(kg.d),非EAT对照组不做任何处理,末次免疫后2周处死各组大鼠并取材。观察大鼠甲状腺组织的病理改变和炎细胞浸润程度,采用放射免疫法检测血清中甲状腺球蛋白抗体(TG-Ab)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)和T3、T4水平。结果(1)不同碘摄入量的EAT组和EAT+CsA组的大鼠甲状腺组织均有不同程度的炎性细胞浸润,非EAT对照组大鼠甲状腺未见明显炎性细胞浸润。EAT组大鼠甲状腺的炎症反应重于EAT+CsA组,诱发EAT的2组甲状腺的炎症反应随碘摄入量的增加而加重。(2)EAT组和EAT+CsA组的血清中自身抗体TG-Ab和TPO-Ab水平均高于对照组(P<0.05),EAT+CsA组的TG-Ab和TPO-Ab水平均低于EAT组,2组自身抗体水平亦随着碘摄入量的增加有升高趋势。(3)100倍碘水平的各组T4水平下降,各组的血清T3含量比较差异无统计学意义。结论增加碘的摄入量会明显加重EAT的炎症反应,促进EAT的形成和发展;CsA对EAT的形成及甲状腺自身抗体的产生有一定的抑制作用,碘过量可以拮抗CsA的这种作用,且随碘摄入量的增加拮抗效应增强;碘摄入过多可以抑制甲状腺激素的合成和释放。