椎弓根螺钉3种入路内固定治疗胸腰段骨折:脊柱功能、椎体高度复位与局部Cobb角的恢复

背景:椎弓根螺钉内固定手术是治疗胸腰段骨折的首选之一,目前关于经皮、经Wiltse入路和传统后正中入路置钉的治疗效果存在一定争议.目的:探究经皮、经Wiltse入路和传统后正中入路置入椎弓根螺钉内固定治疗胸腰段骨折的临床效果.方法:回顾性分析2017年2月至2019年10月苏州大学附属第一医院收治的胸腰段骨折患者的病历...     

多孔聚醚砜平板膜培养肝细胞的初步研究

目的初步观察一种多孔聚醚砜平板膜上支持人肝细胞系L02细胞生长能力,探讨聚醚砜膜材料用于生物人工肝的可行性。方法将正常人肝细胞系L02细胞接种在多孔聚醚砜平板膜片上,用倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜以及扫描电镜观察L02细胞在此种平板膜上的贴壁和生长情况。结果倒置相差显微镜下可以观察到L02细胞能够在多孔聚醚砜平板膜较好生长,细胞培养到7 d时,细胞仍然保持良好生长增殖状态。激光共聚焦显微镜证实了该结果,且随着培养时间延长,细胞可呈多细胞聚集状态生长,保持活性。扫描电镜下膜表面微孔和微小孔结构得以观察,并能观察到部分细胞可以向微孔中延伸密集生长。结论多孔聚醚砜平板膜能够有效的支持L02细胞在其表面生长,有望成为生物人工肝支持系统理想的生物支架材料。     

两种人工肝生物反应器内乳猪肝细胞培养的比较研究

目的 采用普通型中空纤维及编织型中空纤维两种人工肝生物反应器,比较其内培养的肝细胞生存时间及功能,为生物反应器的设计提供新的方法和思路.方法 将新生中国实验小型猪的肝细胞与微载体共同培养,待肝细胞与微载体充分粘附形成微载体-球形聚集体后,将其注入生物反应器的外腔,在培养液内加入氯化氨、醋胺酚检测生物反应器的生物转化和代谢功能,行无血清培养检测肝细胞白蛋白的合成功能,并检测肝细胞酶的漏出量.锥虫蓝染色测定肝细胞的活力,透射电镜观察其超微结构.结果 肝细胞与微载体相互聚集,形成了具有一定结构层次的肝细胞聚集体,重构了肝细胞之间的相互连接;接种入生物反应器后,在编织型生物反应器中肝细胞1周内保持较高的活力,至第7天肝细胞活力仍高达(75±6.3)%,对醋氨酚和氯化铵有良好的代谢、生物转化功能,白蛋白合成在第7天为(0.57±0.13)mg/106个肝细胞,酶的漏出量也少,各项指标均明显优于普通型生物反应器组(P＜0.05).结论 编织型生物反应器为肝细胞的生长、增殖提供一个类似体内的三维立体环境,是一种性能良好的生物反应器.     

LncRNA GAS5通过miR-21调控脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制研究

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5（LncRNA GAS5）与微小RNA-21（miR-21）的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧（OGD/R）处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC-12）模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白（phosphatase and tensin homolog,PTEN）基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3（Caspase 3）、B淋巴细胞瘤（Bcl）-2相关X基因（Bax）、Bcl-2和蛋白激酶B（AKT）的RNA表达水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT（p-AKT）的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及p-AKT表达水平降低（P＜0.05）,GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高（P＜0.05）。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡（P＜0.05）。结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。     

体外生物人工肝支持系统生物功能的体外研究

用２×１０８ 个混合聚集球形培养的人肝细胞、肝非实质细胞与中空纤维型生物反应器组成体外生物人工肝支持系统（ＥＢＬＳＳ）,通过循环液（ＰＲＩＭ １６４０）中肝细胞合成分泌产物的分析,评价其生物功能。结果表明,经过６ ｈ 的体外循环,循环液中总蛋白、白蛋白、甲胎蛋白和尿素含量均显著增加,该循环液使体外培养大鼠肝细胞ＤＮＡ 合成率显著增加（与对照组比较Ｐ＜ ００１）,实验后球形体肝细胞仍保持良好的活力。提示由培养人肝细胞和中空纤维型生物反应器组成的体外生物人工肝具备肝脏生物合成功能,并有刺激肝细胞增殖的能力。     

胚胎干细胞在可降解聚合三维支架上的生长增殖与分化

目的:三维可降解生物材料是组织工程的重要载体,观察胚胎干细胞在聚合三维支架上的生长、增殖和分化状态,为胚胎干细胞分化形成任何组织修复替代治疗机体组织器官的损伤和功能衰竭提供实验学依据.方法:实验于2007-05109在解放军第三军医大学西南医院感染病研究所人工肝实验室完成.①材料:鼠胚胎干细胞CCE株为加拿大Stem Cell Technologies公司产品,由聚乳酸和聚乙醇酸聚合而成的非编织型三维支架为美国Synthecon公司产品,细胞外基质MatrigelTM由BD Biosciences公司提供.②实验方法:将鼠胚胎干细胞株接种于被覆明胶的培养瓶内,加入含0.1 mmol/L非必需氨基酸、2 mmol/L L-谷酰胺、0.1 mmol/L二羟基丙硫醇、15%胎牛血清、1000 U/mL白血病抑制因子的IMDM培养液.3 d后采用"悬滴法"使细胞在不含白血病抑制因子的上述IMDM培养液中形成胚胎体,6 d后胰酶消化得到胚胎干细胞,浓度调整为(3～4)×109L-1,与MatrigelTM按1:1混合并接种于剪成5 mm×4 mm×1 mm小片的三维支架内,加入含1%二甲基亚酚、10-7 mol/L地塞米松、5mg/L ITS、15%胎牛血清的IMDM培养液进行诱导分化.③实验评估:激光共聚焦显微镜观察胚胎干细胞在三维支架上的生长与增殖情况;应用荧光染色检测细胞活性;苏木精-伊红染色光镜下观察胚胎干细胞的组织分化情况.结果:①细胞牛长与增殖:接种培养1 d多数胚胎干细胞粘连在一起形成聚集体,状似球形,附着于三维支架的纤维上.7 d时聚集的胚胎干细胞开始沿纤维支架生长,互相粘连,呈片状和网状.细胞数随培养时间延长而不断扩大,至14d细胞交织在一起呈现多层面立体景象,布满整个三维支架.②活细胞观察:接种培养1,7,14 d的胚胎干细胞绝大多数发出绿色荧光,始终保持良好的细胞活性.⑨胚胎干细胞的组织分化:在非特异诱导培养液作用下,胚胎干细胞可向原始血细胞样细胞、血管样结构、软骨样结构和腺样结构分化.结论:胚胎干细胞能够附着于可降解聚合三维支架上生长增殖,并在保持细胞活性的情况下呈现向多细胞、多组织分化的良好态势.     

中间型人工肝对重型肝炎肝功能支持的效果评价

目的　评价中间型人工肝支持方法血浆置换对重型肝炎肝功能的支持效果和安全性。方法　对 17例重型肝炎患者进行血浆置换治疗 ,观察治疗前后患者临床症状、体征变化 ,比较治疗前后肝、肾功能 ,血常规 ,凝血酶原时间 (PT)和凝血酶原活动度 (PTa)变化。结果　血浆置换治疗后 ,患者的临床症状均有不同程度改善 ,总有效率为 5 8.8% ,最终存活率仅为 11.8%。检测指标中转氨酶、总胆红素、凝血酶原时间、凝血酶原活动度和总蛋白治疗前后差异均有显著性 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ;血尿素氮、血肌酐和血常规各指标治疗前后差异均无显著性 (P均 >0 .0 5 ) ;而且不良反应较轻。结论　中间型人工肝对重型肝炎患者肝功能有肯定的支持效果。     

培养猪肝细胞中空纤维型生物反应器的制备

目的 探讨培养猪肝细胞中空纤维型生物反应器的制备方法。方法 将两步法分离的新生实验小型猪肝细胞接种于中空纤维器内,用培养液循环式人工毛细管培养系统进行培养,观察生物反应器的蛋白分泌、利多卡因转换能力;检测培养猪肝细胞的乳酸脱氢酶(LDH)漏出量及细胞形态和活力。结果在反应器制备后第2、4、6天可检测出猪肝细胞分泌的白蛋白,生物反应器对利多卡因的转换率为89.6％～96.1％。培养结束时LDH漏出量由(23.7±4.6)U/L升高至(127.8±17.4)U/L(F=39.582,P<0.01),细胞活力由95.8％±0.3%降低至83.8％±4.7％(t=5.135,P<0.01)。结论 可用人工毛细管培养系统制备出1周内性能较好的培养猪肝细胞中空纤维型生物反应器。     

生物人工肝体外支持系统合成功能的评价

目的 对人肝细胞型体外生物人工肝进行生物合成功能的评价,藉以探讨其用于肝衰竭治疗的可能性。方法 用2×10~8个混合聚集球形培养的人肝细胞、肝非实质细胞与中空纤维型生物反应器组成体外生物人工肝支持系统(EBLSS),通过循环液(RPMI 1640)中肝细胞合成分泌产物的分析,评价其生物功能。结果 经过6小时的体外循环,循环液中总蛋白、白蛋白和甲胎蛋白含量均显著增加,尿素和葡萄糖水平也有明显改变,该循环液使体外培养大鼠肝细胞DNA合成率显著增加(与对照组比较P<0.01),实验后球形体肝细胞仍保持良好的活动。结论 由培养人肝细胞相中空纤维型生物反应器组成的体外生物人工肝具备肝脏生物合成功能,并有刺激肝细胞增殖的能力,对肝衰竭可能有一定的支持治疗作用。     

毛细管柱-氮磷检测器-气相色谱法测定空气中肼

目的建立一种高灵敏度、高选择性测定空气中肼的新方法。方法空气中的肼用酸性硅胶管采集、解吸、衍生和萃取后,经大孔毛细管柱分离,氮磷检测器检测。对色谱柱、衍生和萃取条件进行了选择。结果方法的检出限为0.4μg/L;最低检测浓度为0.05μg/m3(采样体积为15.0L),当标准溶液浓度为0.25～2.50mg/L时,标准曲线的相关系数为0.9998,0.5、1.0、2.5mg/L的吸附管加标样品分别6次测定的相对标准偏差为2.1%、4.7%和2.5%。结论通过样品测试证明,该方法具有色谱峰形对称、不拖尾、保留时间短、无杂质干扰、准确、高灵敏度、高选择性、快速简便等优点。