应用改良连锁分析初筛家族性高胆固醇血症的候选基因

目的 应用改良连锁分析方法对2个纯合子家族性高胆固醇血症（FH）家系进行候选基因初筛,为后期测序明确方向,早期发现致病基因。方法 2010年6月和2010年7月首都医科大学附属北京安贞医院收治2例FH先证者,所有家系成员进行血脂测定、心电图、超声心动图及颈动脉超声检查,记录家系成员的其他临床资料（年龄、性别、发病年龄、病程、家族史及治疗情况）。选择新的微卫星位点和毛细管电泳仪进行连锁分析初筛,高度连锁者进一步测序明确致病基因。结果 先症者1心电图示左心室肥厚;先症者2心电图大致正常。先证者1超声心动图示主动脉瓣反流;先证者2超声心动图示左房室瓣反流。先证者1颈动脉超声示颈动脉内中膜增厚,颈动脉内斑块形成;先证者2颈动脉超声示颈动脉内中膜增厚。家系1中胆固醇增高者总胆固醇（TC）水平〔（6.98±1.99）mmol/L〕高于血脂正常者〔（3.20±1.02）mmol/L〕（t=7.023,P＜0.001）;胆固醇增高者低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平〔（3.02±2.26）mmol/L〕高于血脂正常者〔（1.98±0.93）mmol/L〕（t=3.497,P=0.004）。家系2中胆固醇增高者TC水平〔（8.12±3.65）mmol/L〕高于血脂正常者〔（4.37±1.01）mmol/L〕（t=4.355,P=0.001）;胆固醇增高者LDL-C水平〔（5.72±3.92）mmol/L〕高于血脂正常者〔（2.72±0.62）mmol/L〕（t=3.293,P=0.005）。改良连锁分析发现先症者1的致病基因与低密度脂蛋白受体（LDL-R）基因高度连锁,进一步核苷酸序列分析发现该患者LDL-R突变是中国罕见致病突变。先证者2的致病基因与已知致病基因均不连锁,推测可能存在第4种新的未知致病基因。结论 FH应用改良连锁分析方法成功发现1例中国罕见突变,推测可能还有新的未知致病基因存在。     

从胆固醇代谢标志物视角分析高脂血症患者血脂异常的影响因素

目的分析胆固醇吸收与合成标志物及其它相关指标对高脂血症患者血脂成份的影响,探讨高脂血症患者胆固醇代谢特点。方法选取高脂血症患者(n=53)和健康对照者(n=50),常规检测肝肾功能及血脂水平,应用气相色谱法检测胆固醇吸收与合成标志物水平。结果高脂血症组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)显著高于健康对照组(P0.05);高脂血症组角鲨烯、7-烯胆烷醇的合成率均高于健康对照组(P0.05),而豆固醇吸收率低于健康对照组(P0.05)。多元线性逐步回归分析显示,高脂血症组影响TC的独立影响因素为LDLC和菜油固醇,影响TG的独立影响因素为脱氢胆固醇和LDLC,影响健康对照组TC和TG的独立影响因素均为LDLC和7-烯胆烷醇。结论高脂血症患者胆固醇代谢标志物特点是角鲨烯、7-烯胆烷醇合成率显著增高,植物固醇中豆固醇吸收率显著降低;高脂血症组影响TC和TG的独立影响因素除LDLC外,还与胆固醇合成标志物(脱氢胆固醇)、胆固醇吸收标志物(菜油固醇)有关。     

代谢综合征组分与高血压早期肾损害关系的研究

目的:探讨代谢综合征组分与高血压患者早期肾损害的关系。方法:对399例肾功能正常且未治疗的原发性高血压患者进行横断面调查,测定身高、体质量、腰围、血脂、血糖等生化指标。根据Cockcroft-Gault公式计算肾小球滤过率(e GFR)诊断CKD,采用国际糖尿病联盟(IDF)全球共识定义诊断代谢综合征(MS),将患者分为MS组(n=246)和非MS组(n=153),比较两组患者临床特点差异;分析MS组分与高血压早期肾损害的关系。结果:(1)MS组BMI、腰围、TG、HDL-C、舒张压、尿酸、肌酐值、尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR)值均高于非MS组,MS组e GFR水平低于非MS组(P0.05)。(2)在MS组中,组分数与ACR的相关性分析显示,随MS组分的增多ACR水平呈逐渐上升趋势,5个代谢组分时达到最高值(P0.05)。而在e GFR与代谢综合征组分数相关性分析中发现,2个代谢组分时e GFR水平达到最高(P0.05),当≥3个代谢组分时,e GFR随着代谢组分的增加而减少。(3)二分类Logistic回归分析结果提示MS组分中空腹血糖受损、TG增高和血压分级是高血压早期肾损害的危险因素,而腹型肥胖和低水平HDL无明显影响。用年龄和性别因素校正后,空腹血糖受损、TG增高、血压分级与高血压早期肾损害仍显著有关(OR分别为1.852,3.622和1.6,P0.05)。结论:MS组分与高血压早期肾损害之间有显著相关性,这种相关性随MS组分的增多而增加,其中3个代谢综合征组分是e GFR代偿的临界点。代谢综合征组分中空腹血糖受损、高TG和血压与高血压早期肾损害增加相关。     

5种血清微小核糖核酸在主动脉夹层患者中的表达变化及联合诊断价值研究

目的:评价5种血清微小核糖核酸(microRNA)联合在主动脉夹层(AD)患者中的表达变化和联合诊断价值。方法:选择2015年9月至2016年3月期间在北京安贞医院急诊科就诊并最终确诊为主动脉夹层(AD)患者60例为AD组,同时选取年龄性别匹配的在北京安贞医院体检健康者60例为对照组(HC组),采集AD患者入院24h内以及对照组空腹常规血清,根据文献选出5个可能与AD相关的microRNA(has-miR-26a-5p、has-miR-191-5p、has-miR-143-3p、has-miR-21-5p、has-miR-223-3p),采用荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测60例AD患者和60例健康对照(HC)血清中这5种microRNA的表达量,采用2~(-△△CT)方法计算5种microRNA在两组中的相对表达量。通过单个或联合的ROC曲线分析血清microRNA对于AD和HC的区分效能,通过曲线下面积(AUC)评估血清microRNA对于AD的诊断价值。结果:两组研究对象年龄和性别比较差异无统计学意义(P均0.05);与HC组相比,5种血清microRNA在AD组表达均显著下降(P均0.05);5个血清microRNA区分AD与HC的曲线下面积(AUC)分别为0.915、0.912、0.910、0.732和0.717(P均0.05),将AUC0.9的这3个microRNA联合为Signature~a,Signature~a将AUC提升至0.958(95%CI:0.942~0.992,P0.05),全部5个microRNA全部联合作为Signature~b,Signature~b将AUC提升至0.964(95%CI:0.935~0.993,P0.05),所以microRNA联合可以提高AD的诊断效果。结论:5种血清microRNA在AD患者表达变化,联合5种血清microRNA对AD有潜在诊断价值。     

家族性高胆固醇血症患者的临床表现和超声心动图特征

目的 分析家族性高胆固醇血症（FH）患者的临床表现和超声心动图特征.方法 经我院动脉粥样硬化研究室确诊的FH患者41例,女23例,男18例,年龄3～62岁,平均（19.94±14.87）岁.另选取健康人39例作为对照组.采用彩色多普勒超声仪观察两组受检查心脏、瓣膜、主动脉的形态结构和功能.结果 FH患者血清总胆固醇为（13.24±4.36）mmol/L,低密度脂蛋白胆固醇为（10.57±4.41）mmol/L.35例患者皮肤出现黄色瘤,33例为首发症状.二尖瓣反流19例,主动脉瓣反流13例,主动脉瓣钙化6例,主动脉瓣狭窄3例,主动脉根部狭窄8例.FH患者心脏收缩和舒张功能基本正常.结论 FH以高胆固醇血症、特征性黄色瘤、早发的心血管疾病和阳性家族史为主要临床表现.超声心动图检查有瓣膜反流、主动脉口狭窄等表现,能为FH患者动脉粥样硬化的形态和功能变化提供重要依据.     

何首乌总苷抗氧化与实验性小鼠主动脉粥样硬化病变的形成

目的：研究何首乌总苷(polygonum multiflorum total glycoside,PMTG)的抗氧化性及对载脂蛋白E基因缺陷(apoprotein E gene deficiency,ApoE-/-)小鼠实验性动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)病变形成的影响。方法：将ApoE-/-小鼠随机分为4组：何首乌总苷高剂量组(150 mg·kg^-1·d^-1)、低剂量组(25 mg·kg^-1·d^-1)、阿托伐他汀阳性药物组(5 mg·kg^-1·d^-1)及模型组,给药第10周后全部处死,酶法检测4组血清脂质含量；化学法测氧化指标一氧化氮(NO)、总抗氧化能力(TAC)及丙二醛(MDA)；电镜观察主动脉壁内皮细胞形态变化以及免疫组织化学染色方法测定ApoE-/-小鼠主动脉壁NFκB的表达。结果：实验10周后,何首乌总苷高、低剂量组及阳性药物组与模型组比较,显示：①可以显著降低血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)水平(P<0.01)；②明显增加血浆NO及TAC(P<0.05及P<0.01),减少MDA的生成(P<0.01)；③电镜观察发现何首乌总苷可以维持主动脉壁内皮细胞正常形态；④抑制ApoE-/-小鼠主动脉壁核因子-κB（NF-κB）的表达(P<0.01)。结论：何首乌总苷可能通过抗氧化保护主动脉内皮细胞形态,降低ApoE-/-小鼠氧化型LDL(ox-LDL)、减少主动脉壁NF-κB的表达,从而下调主动脉壁ICAM-1及VCAM-1的表达等环节延缓主动脉斑块的形成,起到防止ApoE-/-小鼠实验性动脉粥样硬化病变形成的作用。     

降脂灵治疗高脂血症疗效和安全性的观察

目的观察中药降脂灵片对高脂血症患者的降脂疗效及安全性。方法对入选的31例高脂血症患者,进行开放性研究,治疗前后自身对照;予降脂灵15片/d,分3次服用。为期4周,于实验前及实验结束后,检测血清总胆固醇、甘油三酯、肝肾功能、血清肌酸激酶等的变化。结果治疗后胆固醇水平与治疗前经较显著下降[(5.8±0.8)mmol/Lvs(6.3±0.7)mmol/L,P<0.05)];甘油三酯、肝肾功能、肌酸激酶变化无统计学意义(P>0.05)。结论中药降脂灵有一定的降低血清胆固醇作用,而对甘油三酯肝肾功能、血清肌酸激酶等无明显影响,是一种安全有效的降脂中药。     

表观遗传学中DNA甲基化对心血管疾病影响的研究进展

表观遗传学是研究遗传信息的遗传表型表达改变而DNA序列不改变现象的学科,主要从DNA甲基化、蛋白质修饰与非编码RNA调控这3个层面调控基因表达,这些变化是通过复杂的环境／基因组相互作用介导的。其中,DNA甲基化（DNAmethylation）是最受关注的表观遗传标志高脂血症、吸烟以及不良生活习惯等心血管危险因素均可导致相关基因甲基化异常,促进心血管疾病发生发展。研究这些变异为进一步阐明心血管疾病发病机制提供了新的途径。本文将重点阐述DNA甲基化对心血管疾病的影响。     

降脂宁抗动脉粥样硬化作用的效应机制研究

目的:观察中药降脂宁对载脂蛋白E基因缺陷(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响及其作用机制。方法:将ApoE-/-小鼠随机分为4组:降脂宁大剂量组、降脂宁小剂量组、阿托伐他汀阳性药物组及模型组。给药第12周后全部处死,主动脉根部切片,HE染色,观察动脉斑块形成程度,测定斑块面积与管腔面积之比。酶法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)含量,ELISA法测定血清中脂联素(Ad iponectin)含量。结果:给药12周后,主动脉HE染色可见降脂宁大、小两个剂量组均可显著抑制ApoE-/-小鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块的形成,斑块面积/管腔面积均小于模型对照组(P<0.001)。此外,与模型组比较,降脂宁大剂量可降低ApoE-/-小鼠血清TC水平(P<0.01);降脂宁小、大剂量组均可降低血清TG水平。此外,与模型组比较,降脂宁大、小剂量组均可升高ApoE-/-小鼠血清脂联素含量(P<0.001)。结论:降脂宁具有较好的抑制动脉粥样硬化形成的作用,与其降血脂及升高脂联素水平的作用有关。     

家族性高胆固醇血症一家系成员低密度脂蛋白受体基因复合杂合突变分析

目的 对1例临床确诊为纯合型家族性高胆固醇血症(FH)先证者及其3代家系成员进行基因检测和系谱分析,探讨该FH患儿发病的分子病理基础.方法 收集FH先证者家系3代共29例血标本及临床资料.对先证者进行心电图和超声检查.对其家系成员进行血脂测定,改良苯酚-氯仿法提取患儿及家系成员基因组DNA并鉴定,应用多聚酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析结合DNA直接测序方法 ,检测其低密度脂蛋白受体(LDLR)基因全部18个外显子和启动子及载脂蛋白B100(ApoB100)R3500Q位点,核苷酸序列分析结果 与GenBank比对寻找突变.结果 1.血管超声示先证者右锁骨下动脉起始,双侧颈总动脉分叉处中段内-中膜轻度增厚,右侧颈总动脉中段后壁多发小钙化斑,主动脉瓣轻度关闭不全;2.该家系排除ApoB100基因R3500Q突变;3.核苷酸序列分析证实先证者及其父亲、祖父和叔叔等6人LDLR基因第10外显子发生W462X杂合突变,为色氨酸改变为终止密码子,使终止密码子在第462位提前出现;先证者及母亲和外祖母LDLR基因第13外显子发生A606T杂合突变,为第1 879位G→A碱基置换,导致丙氨酸改变为苏氨酸.结论 该FH先证者LDLR基因存在W462X/A606T复合杂合突变,分别来源于父系及母系遗传.这种复合杂合突变患者具有与FH纯合子相同的临床特征.