人类新基因CHID1的克隆与功能初步研究

使用生物信息学手段,从人公共蛋白质数据库的蛋白质序列中筛选到新的分泌蛋白基因CHID1(Chitinase domain containing 1),该基因定位于人11号染色体短臂15区5带(11p15.5),cDNA长1 182 bp,其编码蛋白共有393个氨基酸。转染COS-7细胞后Western blot实验显示:在细胞培养液中没有检测到CHID1蛋白。对CHID1基因在mRNA水平上进行组织分布考察发现:它在肺、肾、肝、心、胸腺中都有表达,肝中最高。细胞生长曲线揭示,Lovo-CHID1稳定细胞株有生长抑制的现象,而细胞周期分析发现细胞株在G1期发生阻滞。这表明CHID1有可能是个潜在的抑癌基因。     

响应面法优化S-腺苷蛋氨酸发酵培养基的研究

目的 采用响应面法对酿酒酵母菌发酵生产S-腺苷蛋氨酸(SAM)的培养基进行优化,提高S-腺苷蛋氨酸发酵单位.方法 采用Plackett-Burman设计和响应面法进行培养基优化,对8个因素进行了筛选,结果表明:酵母粉,葡萄糖,丝氨酸的浓度对S-腺苷蛋氨酸产量的影响最大.通过最陡爬坡试验及Box-Behnken设计对3个显著因素进行寻优,并利用Design-Expert软件对实验数据进行二次回归分析.结果 结果显示酵母粉、葡萄糖和丝氨酸的最佳浓度分别为39.5、73.4和6g/L.经过3次试验所测得的数据8402.6、8600.0和8357.9mg/L.与预测结果基本一致.结论 模型预测值与实际值吻合度比较高,模型具有显著性,比优化前提高了53％.     

改良小梁切除手术治疗硅油填充眼继发青光眼的疗效观察

硅油长期填充眼最常见的并发症就是硅油乳化引起的继发顽固性青光眼[1].对其治疗,除了引流植入物与下方的滤过手术外,透巩膜电凝、冷冻、激光光凝等也是临床上常用的治疗方法.但这些治疗手段主要以降低眼压为目的,对视力的改善和保留不能令人满意.本研究根据硅油与硅油眼的特点,设计了一种从下方入路的小梁切除术,并对一组硅油填充眼继发性青光眼进行了手术治疗,取得了较好效果,现将结果报道如下.     

人工机械心脏瓣膜置换术后抗凝治疗强度与并发症发生率的关系

目的:探讨我国人工机械心脏瓣膜置换术后华法林抗凝治疗的国际标准化比值（INR）范围以及抗凝治疗INR值与不良事件的关系。方法: 对我院2007年12月~2011年9月1 684例人工机械心脏瓣膜置换术后应用华法林抗凝治疗且远期随访依从性较好的患者按照瓣膜置换位置不同分为主动脉瓣置换（AVR）组、二尖瓣置换（MVR）组、双瓣置换（DVR）组,各组再按照INR=1.4~1.7、INR=1.7~2.0、INR=2.0~2.3、INR=2.3~2.6分为四个范围进行追踪随访,对比研究出血和血栓栓塞的发生情况。其中男性 793例,女性891例,年龄18~69（44.5±18.2）岁,随访时间6个月~48个月,平均随访（2.6±1.4）年。AVR 462例,MVR 684例,DVR 538 例。结果: AVR组INR=1.4~1.7和INR=1.7~2.0出血发生率比INR=2.0~2.3和INR=2.3~2.6明显降低且差异有统计学意义。MVR组与DVR组在INR=1.4~1.7、INR=1.7~2.0、INR=2.0~2.3三个范围出血发生率都比INR=2.3~2.6明显降低且差异有统计学意义。在AVR组、MVR组、DVR组内INR=1.4~1.7、INR=1.7~2.0,INR=2.0~2.3, INR=2.3~2.6四个范围的血栓栓塞发生率均没有出现明显差异,无统计学意义。结论: 瓣膜置换术后抗凝治疗强度与并发症的发生率有关,AVR术后抗凝治疗范围控制在INR=1.4~2.0较为合适。MVR、DVR术后抗凝治疗范围控制在INR=1.4~2.3较为合适。     

HPLC-ELSD分析米格列醇和杂质1-脱氧野尻霉素

目的:建立一种高效液相-蒸发光散色检测法用于米格列醇和1-脱氧野尻霉素的杂质分析。方法:使用随行标准曲线法测定杂质含量,采用Inertsil NH2(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-15 mmol.L-1pH 5.5乙酸铵(75∶25),流速为1.2 mL.min-1,柱温为35℃;Alltech ELSD2000检测器的漂移管温度为90℃,载气流速为2.9 L.min-1。结果:米格列醇和1-脱氧野尻霉素在0.02～5.05 mg.mL-1范围内峰面积对质量浓度呈现良好的对数线性关系,r分别为0.9985和0.9989;定量限和检出限分别为1和0.4μg;两种化合物在该色谱条件下重现性良好;精密度n=6时,RSD分别为1.5%和1.0%。结论:本方法有效、快速、简便、结果可靠,可用于米格列醇和1-脱氧野尻霉素的杂质分析。     

脐带穿刺产前诊断21-三体综合征1例

经腹胎儿脐静脉穿刺术简称脐带穿刺,是妊娠中晚期在超声引导下经母体腹壁穿刺采集胎儿脐带静脉血的技术。随着超声诊断及产前筛查技术的发展,脐带穿刺在产前诊断中具有重要的意义。因脐带穿刺术要求高,目前许多医院开展受限。[1]我院产前诊断中心率先开展此项技术并成功诊断唐氏综合症1例,现报道如下。     

低氮源消耗和高产雷帕霉素菌株的选育

目的 采用亚硝基胍(NTG)、常压室温等离子体(ARTP)、核糖体工程育种方法处理产雷帕霉素游动放线菌SIIA-1602，结合OSMAC策略以期筛选得到发酵水平有较大提高，氮源利用更加高效的新菌株。方法 首轮采用NTG诱变筛选；第二轮采用链霉素抗性育种，第三轮采用ARTP诱变育种；采用3种不同的发酵培养基考察突变菌株的发酵水平。结果 出发株游动放线菌SIIA-1602经过NTG诱变、链霉素抗性和ARTP诱变筛选得到的突变株ASN-256，其发酵水平提高了55.7%，通过发酵培养基删减有机复合氮源并且添加了赖氨酸和哌可酸后，发酵水平提高分别107.6%和148.9%。在10t发酵罐通过流加 ，使菌种ASN-256发酵单位进一步提高到1250mg/L，是出发菌株SIIA-1602发酵水平的2.85倍。菌种ASN-256发酵过程中总氮源使用量减少50%，放罐时氨基氮排放仅为菌株SIIA-1602的一半，菌渣量也显著降低。结论 本方法简单经济，突变效率高，能够快速获得传代稳定，氮源利用更加高效的雷帕霉素高产突变株。另外，该菌通过发酵培养基的调整实现了氨基氮排放和菌渣量的大幅降低，在环保方面取得了显著的效益。     

尿激酶溶栓治疗急性心肌梗死34例

目的：观察尿激酶溶栓治疗急性心肌梗死（AMI）发病后〈12 h的疗效。方法：予国产尿激酶150万U加生理盐水100 mL,30 min内静脉滴入。结果：34例AMI患者总再通率为70.58%,其中发病≤2 h、〉2~4 h、〉4~6 h、〉6~12 h溶栓再通率分别为87.5%、81.8%、62.5%、42.85%;再通时间依次为（78±4）min、（98±3.0）min、（128±3.0）min、（190±4.0）min。比较≤2 h与〉2~4 h溶栓再通时间没有显著性差异,〉2~4 h、〉4~6 h、〉6~12 h溶栓再通时间差异均有显著性（P〈0.01）。死亡6例,占17.64%。结论：尿激酶静脉溶栓时间越早,冠脉再通率越高,是一种治疗AMI安全、有效,积极的抢救措施。     

淫羊藿苷促进脐血来源树突状细胞的分化与成熟

目的：研究淫羊藿苷（icariin,ICA）体外对脐血单个核细胞来源树突状细胞的分化、成熟及免疫活性的影响。方法：无菌条件下采集脐血,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,用GMCSF、IL4诱导树突状细胞（dendritic cells, DCs）,第5天后将DCs分为3组（ICA组、TNFα组和阴性对照组）并作相应处理。倒置显微镜和透射电镜下观察DCs形态,流式细胞术检测DCs表面分子CD1a、CD80、CD83和CD86的表达情况,ELISA法检测DCs培养上清中IL12和IFNγ的水平,MTT法检测DCs刺激T细胞增殖的能力。结果：ICA刺激后,脐血单个核细胞来源DCs呈现典型的成熟DCs形态学特征。ICA组DCs表面CD1a、CD80、CD83和CD86表达水平较对照组均明显上调（P<0.05）,且CD86的表达水平显著高于TNFα组（P<0.05）。ICA组DCs上清中IL12、IFNγ的水平及诱导T细胞增殖的能力较对照组DCs明显增高（P<0.05）,但与TNFα组DCs无显著差异。结论：ICA可刺激脐血单个核细胞来源DCs的分化和成熟,增强DCs的免疫学活性。     

5-FU对小鼠乳腺癌4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞的富集作用

目的:探讨以氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)处理并通过荷瘤小鼠模型体内传代的方法富集乳腺癌干细胞样细胞的可行性,为靶向肿瘤干细胞治疗奠定基础.方法:以乳腺癌细胞株4T1皮下接种小鼠制备荷瘤模型,以一定剂量5-FU腹腔注射4周;处死小鼠后取肿瘤组织制成细胞悬液,并接种小鼠制备下一代小鼠荷瘤模型,5-FU处理及再次传代方法同上,共传4代.对照组小鼠给予生理盐水注射,其余处理同模型组.流式细胞术检测各代肿瘤组织中CD44+ CD24-/low细胞比例,Hoechast 33342染色法检测侧群(side population,SP)细胞的比例,免疫组化法检测CD55和ALDH1蛋白的表达,倒置显微镜观察乳腺癌细胞微球体的形成,小鼠致瘤实验检测不同肿瘤细胞的致瘤能力.结果:各代对照组小鼠模型肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞比例为(11.5±0.9)％,SP细胞比例为(9.7±1.3)％,ALDH1表达阴性,CD55强阳性表达细胞数为(0.6±0.3)％,乳腺癌细胞微球体比例为(0.5±0.2)％;5-FU处理组4代小鼠模型肿瘤组织中CD44+ CD24-/low细胞比例分别为(49.8±1.2)％、(56.8％±1.7)％、(66.4±1.5)％、(69.0±1.6)％,SP细胞比例分别为(25.0±1.2)％、(42.6±2.8)％、(58.4±2.1)％、(61.3±2.6)％,ALDH1阳性表达细胞比例为(3.8±0.7)％、(14.1±2.4)％、(25.2±3.1)％、(27.5±2.7)％,CD55强阳性细胞比例为(7.8±1.6)％、(10.1±2.0)％、(15.6±1.4)％、(17.3±1.9)％,乳腺癌细胞微球体形成比例为(5.9±0.4)％;两组各相应指标之间差异均具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).5-FU作用后富集了肿瘤干细胞的第3代肿瘤细胞的致瘤作用显著强于对照组细胞(P＜0.05).结论:5-FU作用并通过荷瘤小鼠体内传代能够富集小鼠乳腺癌4T1细胞株中的肿瘤干细胞样细胞.