生物化学实验教学改革初探

生物化学在生命科学中既是一门前沿学科,又是一门重要的基础学科,同时也是一门实验学科,实验教学在整个生物化学的教学中占有十分重要的位置.原有生物化学实验大多以验证性实验为主,且存在较大的重复性,内容相对陈旧、缺乏时代气息,远远落后于现代科技的发展,从而不能充分激发学生的学习兴趣,更谈不上对学生科研能力的培养及促进其创造性的发挥.     

人bit1 cDNA基因的克隆、测序及表达

目的: 克隆并在大肠杆菌中表达人bit1 cDNA基因. 方法: 从新鲜的胎盘组织中提取总RNA,经反转录成单链cDNA, 以此为模板扩增出人bit1 cDNA基因,将该基因克隆入载体pUC19中,测序正确后亚克隆入表达载体pGEX-4T3中进行表达. 结果: 利用所设计的引物扩增出完整的人bit1 cDNA基因.以大肠杆菌为宿主在IPTG的诱导下获得表达,激光薄层扫描显示表达蛋白占总蛋白的40.6%. 结论: 获得了人bit1 cDNA基因及其原核表达产物,对研究人Bit1蛋白的功能具有重要的意义.     

外源HCV核心基因表达载体在HepG2中蛋白表达的亚细胞定位

目的研究HCV全长（天然）核心蛋白（C蛋白）和成熟C蛋白在HepG2细胞内的亚细胞定位，为进一步研究C蛋白与宿主细胞蛋白因子相互作用提供实验依据。方法设计HCV全长和成熟核心基因引物，以pBRTM／HCV1-3011为真核表达载体为模版行PCR；将PCR扩增产物酶切纯化后定向插入pEGFP-C1的BeglⅡ和EcoRⅠ位点，得到能表达全长HCV核心蛋白（C191aa．）和成熟核心蛋白（C173aa．）的真核表达载体pEGFP-C1-C191、pEGFP-C1-C173；将扩增pEGFP-C1-C191、pEGFP-C1-C173质粒转染到HepG2细胞中，28h、5d在荧光显微镜下观察两种C蛋白的亚细胞定位。5d后再用免疫细胞化学法观察两种C蛋白在HepG2细胞中着色现象。结果HCV核心基因PCR产物和构建的pEGFP-C1-C191、pEGFP-C1-C173经扩增测序证实。pEGDP-C1-C191转染HepG2细胞28h后融合荧光全长C蛋白C191主要出现在核膜和胞质中，少部分出现在胞核及其膜中；而pEGDP-C1-C173转染HepG2细胞28h后主要定位在核中和核膜上。但pEGDP-C1-C191转染HepG2细胞5d后，其表达的融合荧光蛋白主要出现在核内和核膜上，少量在胞质中；而成熟C蛋白C173则仍然在胞核内及核膜上。pEGDP-C1-C转染HepG2细胞5d后进行免疫细胞化学显示，C191蛋白和C173蛋白主要在核中、核膜着色，胞质有少量着色。结论HCV全长C蛋白的亚细胞定位是一动态过程，先出现在胞质中和核膜上，最后定位在核中和核膜上；成熟C蛋白主要定位在核中和核膜上。这种现象为解释瞬时转染HCV不同长度C基因对p53／p21通路作用出现相反结果奠定基础。     

浅谈县级中心血库建立和实施质量管理体系所面临的问题及对策

自2006年《血站管理办法》[1]、《血站质量管理规范》[2]、《血站实验室质量管理规范》[3](以下简称一法两规)作为行业强制性法规实施以来,各地血站都陆续建立并实施了符合以上法规及自身实际的质量管理体系,本中心血库也在2009年根据“一法两规”的要求,建立了符合本单位工作实际的质量管理体系,实施后取得了很好成效.如:质量体系建立实施后质量职责明确,体系文件的详尽规定为质量活动提供依据,记录的规范化管理为采供血活动提供有力的证据等,但在建立和实施过程中也面临一些问题,现就县级中心血库(注:本中心血库截止到2011年6月1日前独立承担血液检测任务)建立和实施质量管理体系过程中面临的问题及相应对策总结如下.     

131I-RC-160对转染SSTR2基因的A549肺腺癌移植瘤的抗肿瘤效应

目的 研究131I-RC-160(伐普肽)对转染人生长抑素受体二型(SSTR2)的A549(A549-SSTR2)肺腺癌移植瘤的抑制作用.方法 建立A549-SSTR2肺腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,同时建立pcDNA3质粒转染组的A549(A549-pc3)肺腺癌移植瘤模型作对照,观察131I-RC-160、RC-160、Na131I对移植瘤的抑制作用,等量的生理盐水作空白对照.治疗结束后,计算抑瘤率,随后处死裸鼠,取肿瘤组织作HE染色和免疫荧光染色,观察瘤组织的病理变化.采用SPSS 11.0软件对数据进行统计学处理.结果 A549-SSTR2细胞致瘤组中,131I-RC.160组和RC-160组的移植瘤生长明显受抑[抑瘤率分别为(75.1±4.2)%和(45.2±3.7)%],且131I-RC-160的抗肿瘤增殖效应较RC-160明显提高,差异有统计学意义(t=-6.165,P＜0.01);HE染色显示131I-RC-160组的肿瘤组织大部分片状坏死,残留少量瘤细胞,RC-160组肿瘤组织也可见片状坏死,但不如131I-RC-160组明显;免疫荧光染色显示131I-RC-160组和RC-160组的坏死区域荧光强度明显减弱,未坏死区域与生理盐水对照组无明显差异,可见明亮的绿色荧光.A549-pc3细胞致瘤组中,131I-RC-160和RC-160对瘤体有较弱的抑制效应[抑瘤率分别为(18.4 ±3.9)%和(15.2±3.4)%],与生理盐水组差异均无统计学意义(t值分别为-0.261和-0.302,P＞0.1);HE染色显示可见点状坏死,未见明显片状坏死;免疫荧光染色各组均未见明显的绿色荧光.Na131I组对转染或未转染SSTR2的移植瘤抑制作用与生理盐水组差异无统计学意义.结论 将SSTR2转染至不表达SSTR2的肿瘤后,可以介导放射性核素对肿瘤进行靶向杀伤效应,提高对这类肿瘤的治疗效果,为外源性受体基因介导放射性核素靶向性内照射治疗肿瘤提供依据.     

Kearns—Sayre综合征与线粒体DNA缺失的关系

目的：研究ＫＳＳ与线粒体ＤＮＡ缺失之间的关系。方法：提取患者骨骼肌标本中的总体ＤＮＡ，用ＰｖｕⅡ酶解的进行琼脂糖电泳分离，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转移后用经放射性标记的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）作探针进行杂交和放射自显影。     

中国西部地区乳腺癌诊断年龄的抽样分析及中美对比研究

目的：研究中国乳腺癌诊断年龄并比较与美国乳腺癌诊断年龄的差异。方法：收集从1975年-2005年间西京医院收治的乳腺癌病例，对诊断年龄分布进行统计分析，并与美国Surveillance Epidemiology EndResults（SEER）数据库数据比较。结果：获得乳腺癌患者3074例，诊断年龄范围17—91岁，平均48．65岁；高峰集中在45—54岁年龄段，共1006例，占总患病人数的3273％；〈35岁的年轻型乳腺癌297例，占9．67％。而美国SEER数据显示，2002年-2005年间美国乳腺癌平均诊断年龄为61岁；高峰集中在55—64岁年龄段，占总患病人数的23．7％；〈35岁的年轻型乳腺癌占总患病人数1．9％。同期中美乳腺癌平均诊断年龄及总体年龄分布存在显著差异（P〈0．01）。结论：我国乳腺癌患者的诊断年龄较美国年轻，与美国SEER公布数据相比，乳腺癌诊断平均年龄和高峰年龄段明显提前，年轻型乳腺癌患者所占比例明显增高。     

甲状腺肿瘤组织中IL-8的表达及意义

目的 探讨ＩＬ－８在甲状腺肿瘤组织中的表达及意义。方法 应用免疫组织化学方法,观察１２例甲状腺腺瘤和１６例甲状腺瘤（其中８例甲状乳头状瘤,４例甲状腺滤泡状织中ＩＬ－８的表达及分布。结果 甲状腺腺瘤和甲状腺瘤者甲状腺组织中ＩＬ－８表达阳性率分别为２５％和６１％（Ｐ〈０．０１）,甲状腺瘤中ＩＬ－８免疫染色强度显著异异（Ｐ〈０．０１）,其中术分化癌染色强度较高,其次为滤泡状癌,砂状癌和随样癌染色强度较低     

抗凋亡基因bcl-2在大肠癌中的表达及意义

本研究采用免疫组织化学ＳＡＢＣ法对７７例大肠癌ｂｃｌ－２进行了检测。结果表明，在７７例大肠癌中，ｂｃｌ－２阳性６７例（８７．０１％）；在作为对照的５７例癌周组织中，ｂｃｌ－２阳性占４７例（８２．４５％）；在４６例高分化的大肠癌中，比１５例低分化腺癌表达要强（Ｐ＜０．０１）。结论：ｂｃｌ－２在绝大部分大肠癌中都有表达，这表明其参与了大肠癌的凋亡调控，其表达与大肠癌的分化有关。     

用于胃幽门螺杆菌检查的改良 Giemsa 染色法

幽门螺杆菌（ＨＰ）是一种革兰氏阴性菌，已经证明ＨＰ与一些胃炎和消化性溃疡有较密切的关系。ＨＰ也是胃窦炎最常见的病因之一，并与远端胃癌和低度恶性胃淋巴瘤的发生有关。所以，越来越引起人们的重视。在临床病理工作中，胃粘膜活检不要仅局限于胃粘膜本身的病变检查，还需要进一步检查有无ＨＰ感染。ＨＰ是一种较弱的噬苏木素菌，对ＨＥ染色着色较淡，在观察时有一定的困难。为了明确有无ＨＰ感染常借助于特殊染色。用于ＨＰ特殊染色的方法有Ｇｉｅｍ－ｓａ染色法和银染色法等。我们采用改良的微波Ｇｉｅｍｓａ染色法，即在原Ｇｉｅｍｓａ染色法的基础上，加入了表面活性剂ＴｒｉｔｏｎＸ－１００，在染色过程中经微波炉加温处理。应用改良的Ｇｉｅｍｓａ染色法，可缩短染色时间。染色结果表明，胃粘膜组织和ＨＰ着色良好，细微结构清楚，结果明确。微波Ｇｉｅｍｓａ染色法用于胃粘膜石蜡切片染色，具有常规ＨＥ染色和特殊染色的双重效果，能同时清楚地显示出胃粘膜组织和ＨＰ的结构。