遗传性凝血因子V缺陷症的诊断

目的对遗传性凝血因子V（FV）缺陷症进行诊断。方法通过检测先证者及家系成员的活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、FV促凝活性（FV：C）和FV抗原（FV：Ag）等进行临床表型诊断，应用聚合酶链反应（PCR）方法对先证者F5基因的25个外显子及其侧翼序列进行扩增，PCR产物进行直接测序以发现其基因突变，进行家系调查以期发现遗传规律。结果先证者APTT和PT显著延长，FV：C为3．5％，FV：Ag为1．47％。F5基因测序发现，先证者F5基因外显子区共有7处与GenBank AY364535序列不同的位点，其中外显子10区的C38591T杂合突变导致产生1个终止密码（R506Term），外显子13区的C47504T纯合变异导致编码氨基酸L1369F替换，该变异被证实为基因多态性。家系分析表明，前者遗传于先证者母亲，后者遗传于其父母双亲。结论通过表型检测、家系调查和基因诊断，明确该先症者为遗传性凝血因子V缺陷症，C38591T杂合突变产生终止密码是导致先证者FV缺陷的原因之一。     

10例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症分子发病机制与临床特性分析

目的探讨10例遗传性凝血因子Ⅶ(coagulation factor Ⅶ，FⅦ)缺陷症基因突变类型与临床特性。方法 检测凝血指标以明确诊断；用DNA直接测序法对先证者及其家庭成员FⅦ基因的全部外显子及其侧翼、5’和3’非翻译区进行分析，寻找基因突变；将含插入或缺失突变序列克隆人pMD18-T TA克隆载体中，对所得两条染色体相应序列分别测序，以确定突变在染色体上的分布。应用限制性内切酶对先证者及家系成员相应基因片段进行酶切分析，无酶切位点改变的基因片段用等位基因特异的PER(ASPCR)方法，证实测序所发现的突变。结果 在10例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症患者中发现8种类型的基因突变，其中6390T→C(Phe40Cys)，9482G→T(Argl52Leu)，和11487．9delC3种突变为国际首次报道；6种突变发生在催化区；除一种缺失突变外，其余均为点突变；所有的基因突变都来自先证者的父亲和(或)母亲。Thr359Met和Arg304Trp突变分别在4个及2个无亲缘关系的家系中重复出现。2例Thr359Met纯合突变(FⅦ：C分别为2％和3％)及1例Argl52Leu、11487-9delC及Arg304Trp复合杂合突变(FⅦ：C为1％)临床表型为重型；2例双重杂合突变(His348Gln和Thr359Met，Agr304Trp和Arg304Gln)临床表型分别为中型和无症状(FⅦ：C分别为3．4％和10％)。4例杂合突变(Phe40Cys伴有Arg353Gln杂合多态性、Thr359Met、Arg152Gln、-55C→T)FⅦ：C分别为1％、3．0％、1％、5．5％，临床表型为中型或轻型；1例-323P0／P10、73G→A及Arg353Gln复合杂合多态性(FⅦ：C为1％)的临床表型为轻型。结论 在10例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症患者中发现了8种类型的FⅦ基因突变，其中3种为新突变。中国汉族人中存在导致FⅦ基因缺陷的突变热点。纯合及双杂合FⅦ基因突变FⅦ：C较低，临床出血常较重；特定的杂合突变可有临床出血倾向，FⅦ基因突变与FⅦ：C及临床表型无明显的相关性。     

心血管手术对患者脑电图的影响

目的　比较接受体外循环 (CPB)心内直视手术患者和接受动脉导管未闭结扎术的患者手术前后脑电图 (EEG)的变化 ,探讨心内直视手术对脑功能的影响。方法　选择接受心内直视手术患者 5 1例 ,分为 2组 ,A组 (n =2 6 )为先天性室间隔缺损的患者 ,B组 (n =2 5 )为风湿性心脏病二尖瓣病变的患者。A、B两组患者均在浅低温CPB心脏不停跳下施行心内直视手术 ;同时选择接受先天性动脉导管结扎术的患者 8例为C组 (n =8)。全部患者术前和术后 7d进行EEG检查。结果　接受心内直视手术的患者术后 7dEEG较术前明显变差 (P <0 0 1) ,与接受动脉导管未闭结扎术的患者相比也明显变差 (P <0 0 1) ,但A、B两组间差异不显著 (P >0 0 5 )。结论　CPB下心内直视手术会造成患者EEG的明显异常。     

凝血酶生成试验在监测华法林抗凝治疗中的应用

目的 探讨不同抗凝强度口服华法林治疗患者的凝血酶生成情况及其与出血的关系以及凝血酶生成试验在监测华法林抗凝治疗中的应用.方法 采集78例因心脏瓣膜置换术后房颤而口服华法林3个月以上的患者血样,检测凝血酶原时间-国际正常化比值(FT-INR)及凝血酶生成状况.结果 华法林治疗组按PT-INR不同分成三组:I组23例,PT-INR为1.51～2.00;Ⅱ组39例,PT-INR为2.01～3.00;Ⅲ组16例,PT-INR为3.01～4.26.三组凝血酶生成的延迟时间(lagtime)、峰值(peak)、达峰时间(ttpeak)都存在显著性差异(P《0.01),而反映凝血酶总体生成量的指标凝血酶生成潜力(endogenous thrombin potential,ETP),Ⅰ组和Ⅱ组比较差异存在统计学意义(P=0.0001),Ⅱ组和Ⅲ组比较差异无统计学意义(P=0.06).有出血并发症的患者5例,其ETP值小于正常对照组的15%.结论 口服华法林抗凝治疗患者,当PT-INR》3.0后,提高剂量会增加出血风险,但并不降低凝血酶生成量.服用华法林抗凝治疗期间同时检测PT-INR和ETP能更好地反映机体的凝血状态,从而有效地防止出血发生.     

心内直视手术后长时间呼吸机支持的危险因素分析

目的　分析心内直视手术后影响患者呼吸机辅助时间的危险因素 ,提高心内直视手术后呼吸并发症的诊治水平。方法　回顾性分析我院在 1995年 1月— 2 0 0 3年 8月期间长时间呼吸机辅助呼吸的 5 0例成人患者的临床资料 ,并用多因素线性回归分析模型评价各影响因素的作用大小。结果　本组患者年龄 14～6 5岁 ;体质量 2 8～ 80 kg;男性 2 8例 ,女性 2 2例 ;平均转流时间 (15 6 .38± 5 2 .0 2 ) m in;术后呼吸机辅助时间为 (6 2 .86± 2 2 .5 5 ) h;病死率为 18.0 %。与对照组相比 ,长时间呼吸机辅助呼吸组患者术前心功能差(P<0 .0 0 1) ,体外循环时间与阻断时间长 (P<0 .0 0 1) ,术后动脉血氧分压 (Pa O2 )及氧合指数 (Pa O2 /Fi O2 )低(P<0 .0 0 1) ,而术后肺泡动脉血氧分压差 (A a DO2 )高 (P<0 .0 0 1) ,肺内分流 (Qs/Qt)增大 (P<0 .0 0 1) ,术后肺动态顺应性 (PCD)无明显区别 ,术后引流量较多 (P<0 .0 0 1) ,术后心肌酶谱水平高 (P<0 .0 0 1) ,术后并发症的发生率也较高 (P<0 .0 0 1)。经多因素线性回归分析结果显示 ,术后呼吸机辅助呼吸时间与患者术前心功能、术中转流时间、术后 Pa O2 /Fi O2 、术后心肌酶谱水平及术后引流量明显相关。结论　心内直视手术患者术前心功能差、术中转流时间长、术中心肌     

蛋白C基因G12918A突变所致Ⅰ型遗传性蛋白C缺陷症

目的研究一个遗传性蛋白C（PC）缺陷症家系的遗传表型和基因特征。方法PC抗原（PC：Ag）和PS抗原（PS：Ag）检测采用酶联免疫吸附试验，AT抗原（AT：Ag）测定采用免疫比浊法测定；PC活性（PC：A）、PS活性（PS：A）和AT活性（AT：A）采用发色底物法在Sysmex1500全自动血凝仪上进行测定。用聚合酶链反应扩增3代家系10个成员PC基因各个外显子及侧翼序列，用直接测序法检测其基因突变点。结果该家系3代10名成员中，有8名PC抗原水平在1．06～1．92mg/L（参考值3．00～6．00mg/L）之间，PC活性在41％～67％（参考值70％～140％）之间，明显低于正常参考范围；而PS：Ag和PS：A、AT：Ag和AT：A均在正常参考值范围内。PC基因测序分析：8名成员存在Ⅸ号外显子第12918位核苷酸G→T突变，密码子TGG→TGA，使第372位Trp→Stop；并在基因启动子区存在2405C／T、2418A／G、2583A／T的多态性。结论该家系为Ⅰ型遗传性PC缺陷症，PC基因Ⅸ号外显子存在第12918位核苷酸G→T突变，该突变是目前尚未报道的一个新的基因突变点；并在基因启动子区存在2405C／T、2418A／G、2583A／T的多态性。     

血浆凝血因子ⅩⅢ抗原及活性的测定

目的　建立血浆F抗原及活性定量测定的方法。方法　对 4 6例正常人及两个遗传性F缺陷症家系部分成员采用双抗体夹心法检测F抗原 ,生物素化戊胺测定F活性 ,以F标准品建立标准曲线。结果　 3例患者FA :Ag均为 0 % ,FB :Ag分别为正常人的 78.4 6 %、6 6 .4 3%、5 7.2 9%。 4 6例正常人血浆F活性F∶C平均值为 86 .34%± 17.98% ,范围在5 6 .5 %～ 16 5 .17%之间 ,3例患者为 0 % ,家系中杂合子范围为 2 9.6 0 %～ 10 4 .86 %。结论　双抗体夹心法和生物素标记法均为简捷、灵敏而且特异的F测定方法。     

凝血因子Ⅺ基因内含子区受位剪切位点突变导致的遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症

目的探讨一个遗传性凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺陷症患者及其家系成员中FⅪ基因突变方法用自动凝血仪检测患者及其家系成员凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)，一期法检测血浆F Ⅺ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FⅫ活性；采用ELISA法检测血浆FⅪ：Ag。以外周血中抽提的基因组DNA为模板，PCR扩增FⅪ基因的所有外显子及其侧翼序列，用直接测序的方法查找突变以RT-PCR检测患者FⅪ mRNA的水平，分析突变对FⅪ mRNA剪切造成的影响。结果患者及部分家系成员APTT延长，先证者及其兄血浆FⅪ：C、FⅪ：Ag均低于正常人的10％，其父母血浆FⅪ：C、FⅪ：Ag均低于正常人的．50％。基因测序结果表明FⅪ基因内含子10 3’端4个碱基缺失(IVs J-4delgttg)，先证者及其兄为纯合突变，其父母及侄女、外甥均为杂合型。在患者外周血中未能检测到FFⅪ mRNA。结论该突变导致FⅪ mRNA不能正常剪切，引起FⅪ转录本质和量的改变，不能合成正常的F Ⅺ，是导致该遗传性F Ⅺ缺陷症家系成员发病的分子遗传学基础。     

某些肿瘤标志物基因表达检测在胃肠道恶性肿瘤中的意义

近年,一些肿瘤标志物已被证实与胃肠道恶性肿瘤转移及患者预后密切相关。本文着重介绍经典的肿瘤标志物——癌胚抗原（CEA）和细胞角蛋白20（cytokeratin 20,CK20）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及其抑制剂、生存素（survivin）等肿瘤标志物的结构、功能及其基因表达监测在恶性肿瘤转移和复发方面的应用进展。     

一种新的FⅩⅢ基因突变导致的遗传性FⅩⅢ缺陷症

目的 对1例遗传性凝血因子ⅩⅢ（FⅩⅢ）缺陷症患者及其家系成员FⅩⅢ基因[F（13）A]进行分析，探讨其分子致病机制。方法 尿素溶解法定性检测FⅩⅢ活性，抽提外周血基因组DNA．PCR扩增FⅩⅢA基因的15个外显子及其侧翼序列，PCR产物纯化后直接基因测序，并对家系成员F（13）基因相应的突变序列进行检测。结果 先证者FⅩⅢ定性试验阳性。基因测序发现先证者F（13）A存在纯合缺失，外显子10自127067位起缺失33个核苷酸（127067del33，GI：AF418272），导致阅读框内缺失11个氨基酸（406Met-416Ala），产生了由720个氨基酸残基组成的截短型FⅩⅢA蛋白。其父母FⅩⅢ定性试验为阴性，均显示为该序列的杂合缺失突变。结论 先证者为遗传性FⅩⅢ缺陷症患者，由F（13）A外显子10缺失突变所致。该突变为国际首次报道。