肠道病毒71型感染患儿免疫功能探讨

目的 探讨肠道病毒71型(EV71)感染患儿免疫功能变化与病情程度的关系.方法 患儿46例,健康同龄儿童12例,根据病情由轻到重将患儿分为4组:手足口病组11例、中枢神经系统病变组20例、中枢神经系统病变伴自主神经功能失调组10例、神经源性肺水肿组(pulmonaryedema,PE组)5例.进行下述检测:CD14~+单核细胞人类白细胞DR抗原(HLA-DR)表达率、淋巴细胞免疫分型、CD4~+CD25~+Foxp3~(high)调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cells)及TH17细胞比例;白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)、转录生长因子β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17A(IL-17A)血浓度;CD~4T细胞Foxp3、ROR-γt基因表达;血清免疫球蛋白及补体等.结果 (1)前炎症细胞因子TNF-α及IL-1β在轻症患儿中增高,随病情加重而下降,PE组明显降低(P<0.05);抗炎细胞因子IL-10及IL-10/TNF-α比值随病情加重增高,PE组增高明显(P<0.05).(2)HLA-DR、CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、NK细胞随病情加重呈现逐步下降趋势,PE组下降最为明显(P<0.05).各组间B淋巴细胞及抗体差异无统计学意义.(3)Treg细胞比例、转录因子Foxp3 mRNA及诱导因子TGF-β血浓度随病情加重降低,而TH17细胞比例、IL-17A血浓度、转录因子ROR-γt mRNA及诱导因子IL-6血浓度随病情加重升高.结论 EV71感染患儿机体免疫功能随病情程度而变化,轻症患儿处于全身炎症反应状态,重症或危重症病例处于代偿性抗炎症反应或混合性拮抗反应状态,对EV71感染的免疫调控治疗应强调分阶段、个体化.     

纤溶酶原激活物抑制物 1基因启动子区4G/5G多态性与川崎病冠状动脉损伤的关系

目的探讨纤溶酶原激活物抑制物 1(PAI 1)基因启动子区4G/5G多态性与中国汉族儿童川崎病(KD)的关系。 方法对2001—2003在深圳市儿童医院就诊的KD患儿126例，用等位基因特异性聚合酶链反应(AS PCR)检测126例患儿和120名健康儿童PAI 1基因启动子区4G/5G多态性；用发色底物法检测各组PAI 1血浆活性。 结果(1)KDⅠ组(合并冠状动脉损伤)和KDⅡ组(无冠状动脉损伤)患儿PAI 1血浆活性均高于健康对照组，差异有显著性(P均<005)。KDⅠ组PAI 1血浆活性高于KDⅡ组，差异有显著性(t=978，P<005)。(2)KDⅠ组和KDⅡ组中4G/4G基因型PAI 1血浆活性明显高于4G/5G基因型和5G/5G基因型，差异有显著性(均P<005)。(3)KDⅠ组4G/4G基因型频率显著高于KDⅡ组(P<005)和健康对照组(P<005)。与非4G/4G纯合子基因型相比，4G/4G纯合子基因型对KD冠状动脉并发症的比值比(OR)为280(95%置信区间：125~629，P<005)。 结论PAI 1基因启动子区4G/5G多态性与KD冠状动脉损伤密切相关，PAI 1基因启动子区4G/4G基因型可作为KD冠状动脉损伤高危人群的基因标志。     

TLR途经负性调节因子A20、IRF-4和TRAF4在川崎病免疫发病中的变化

目的 探讨Toll样受体（TLR）信号途径负性调控因子在川崎病（KD）免疫发病机制中的作用。方法 急性期KD患儿48例，正常同年龄对照组16例，感染性疾病对照组（ID）16例。采用逆转录．聚合酶链反应（RT．PcR）及荧光定量PCR检测外周血单核，巨噬细胞（MC）TLR4信号途径传导分子、负性调节因子及前炎症细胞因子mRNA的表达。结果 （1）急性期KD患儿TLR4、MD-2、MyD88、IRAK-4、TRAF6、TAK1、TAB1及TAB2mRNA表达明显高于正常同年龄对照组（P〈0．01）；（2）KD及ID患儿A20、IRF-4、TRAF4基因表达上调（P〈0．01）；KD患儿除．A20表达水平高于ID对照组外，IRF-4、TRAF4表达水平明显低于ID对照组（P〈0．01）；KD患儿前炎症细胞因子表达明显高于ID组（P〈0．01）；（3）经细菌脂多糖（LPS）刺激后，KD患儿及正常对照组A20、IRF-4及TRAF4表达明显增高（P〈0．01），但KD患儿3种负性调节因子基因表达显著低于正常对照组（P〈0．01）；（4）KD合并冠状动脉损伤组（KD-CAL^＋）MC负性调节因子IRF-4及TRAF4明显低于无冠状动脉损伤组（KD-CAL^-），A20表达则显著高于后者；KD-CAL^＋组前炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α均高于KD-CAL^-组（P〈0．01）。结论 急性期KD患儿TLR信号途径负性调节因子相对表达不足可能与KD的免疫发病机制有关。     

传染性单核细胞增多症患儿NKG2D表达变化初探

目的 观察传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)患儿自然杀伤(NK)细胞和CD8+T细胞NKG2D表达,探讨导致Epstein-Barr病毒(EBV)感染免疫功能紊乱的可能机制.方法 传染性单核细胞增多症患儿29例,同龄健康对照组25例.流式细胞术检测外周血NK细胞、CD8+T细胞表面激活性受体NKG2D及抑制性受体NKG2A表达,CD14+单核细胞(MC)表面NKG2D配体MHC Ⅰ相关分子A(MICA)与人巨细胞病毒蛋白UL16的结合蛋白1(ULBP-1)表达;酶联免疫吸附试验(EHSA)检测血浆游离MICA (sMICA)、IL-7、IL-12、IL-15、IFN-γ及TGF-β等细胞因子浓度.结果 (1)IM组患儿NK细胞及CD8+T细胞表面NKG2D表达明显低于对照组(P＜0.05),其中3例拟诊EBV-相关噬血细胞综合征(EBV-HLH)患儿表达下调最为显著;(2)IM组患儿CD14+ MC MICA与ULBP-1表达与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);(3)IM患儿细胞因子IL-15与TGF-β较对照组降低,IL-7、IL-12、IFN-γ及sMICA较对照组升高;(4)IM患儿NK细胞NKG2A表达明显高于对照组(P＜0.05),CD8+T细胞NKG2A表达与对照组相比无明显差异(P＞0.05).结论 EBV感染患儿NK细胞、CD8+T细胞NKG2D表达过度下调可能是导致免疫功能紊乱的原因之一,IL-15及IL-12等细胞因子调控失衡,sMICA血浓度增高等多种因素可能与其NKG2D表达下调有关.     

B-ALL患儿外周血髓源性抑制细胞的变化及临床意义

目的通过研究急性B淋巴细胞白血病(acute B lymphoblastic leukemia,B-ALL)患儿外周血中髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)数目、亚群比例、主要功能物质变化,探讨MDSC在儿童B-ALL发病中的作用。方法 28例初诊治疗前和完全缓解后B-ALL患儿作为试验组,按照危险度分为高危组、中危组及标危组,15例健康儿童作为正常对照组,采用流式细胞术(flow cytometric method,FCM)检测各组外周血中MDSC(CD11b~+CD33~+)的数量变化;检测单核细胞样MDSC(CD14~+CD11b~+CD33~+)和粒细胞样MDSC(CD15~+CD11b~+CD33~+)两种不同亚群的比例及其变化情况;检测MDSC主要功能物质精氨酸酶1(arginase-1,Arg-1)和活性氧物质(reactive oxygen species,ROS)的表达情况。结果治疗前B-ALL患儿外周血中MDSC数量比例(2.41%±0.45%)高于完全缓解后(1.56%±0.44%)及正常对照组(0.68%±0.16%)(P0.01);且MDSC数量比例与不同危险度分层呈正相关(r_s=0.680,P0.01),不同危险度分层间MDSC的数量比例差异也具有统计学意义(P0.01);治疗前B-ALL外周血MDSC亚群以粒细胞样MDSC(granulocyte-MDSC,G-MDSC)为主,完全缓解后B-ALL患儿与正常对照外周血中MDSC亚群组成差异无统计学意义(P0.05),且均以单核细胞样MDSC(monocytoid-MDSC,M-MDSC)为主。外周血MDSC中Arg-1和ROS在治疗前B-ALL患儿表达最高(41.00%±9.34%,3 004.26±611.05),完全缓解后次之(24.13%±5.49%,2 031.75±294.01),正常对照组表达最低(10.72%±4.37%,811.33±195.12)(P0.01);Arg-1的表达随ALL危险度分层升高有上升趋势,但差异无统计学意义(P0.05);不同危险度分层中ROS表达差异有统计学意义(P0.01),其中高危组表达高于中危组和标危组,中危和标危组的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 B-ALL患儿外周血中MDSC数量随危险度分层的升高而增加,MDSC可能通过其代谢产物Arg-1及ROS的表达而抑制机体免疫功能,参与儿童B-ALL的发病。     

Citrin 缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症 SLC25A13 基因分析

目的：Citrin 缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症（NICCD）是一种由SLC25A13基因突变引起的常染色体隐性遗传病,临床可表现为肝内胆汁淤积性黄疸、低出生体重、生长迟缓和低蛋白血症等。本研究通过DNA测序技术探讨中国NICCD患儿 SLC25A13 基因突变类型。方法：针对 SLC25A13 基因的 18 个外显子及其侧翼区碱基序列设计引物,应用 PCR 技术扩增目的片度。PCR 扩增、纯化后直接测序,确定其突变类型。IVS16ins3kb 突变则采用巢式 PCR 和 RT-PCR 进行检测。结果：发现7种SLC25A13基因突变类型,包括851del4、1638ins23、IVS16ins3kb、IVS6+5G>A、c.775C>T（p.Q259X)、c.1505C>T（p.P502L） 和 c.1311C>T（p.C437C）;并确认一种复合突变类型［1638ins23+IVS16ins3kb］。其中c.775C>T（p.Q259X）、c.1505C>T（p.P502L）和 c.1311C>T（p.C437C）为新发现的基因突变类型。在20例NICCD患儿中,6 例为 851del4 纯合突变,7 例为杂合突变,另有 7 例为单一突变类型的杂合子。突变类型以 851del4 为主,占所有突变类型64%;其次为 1638ins23、IVS16ins3kb 和 IVS6+5G>A（分别占15%、12% 和 6%）。结论：851del4突变在 NICCD 患儿中最为常见。     

IFN-α/STAT1/STAT3信号在急性期川崎病PB/Breg细胞分化失衡机制中的作用及意义

目的 探讨急性期川崎病(KD)患儿α-干扰素(IFN-α)/信号传导及转录活化因子1(STAT1)/信号传导及转录活化因子3(STAT3)信号改变及其在浆母细胞(PB)/调节性B细胞(Breg)分化失衡机制中的作用.方法 选取2019年3月至2020年10月深圳市儿童医院接收诊治的38例KD患儿为研究对象,分别于静脉输...     

1376例小儿意外损伤病例临床分析

目的总结儿童意外损伤特点及危险因素,为制定儿童损伤控制策略提供依据。方法对2005年1月1日至2006年12月31日我院内科、外科、耳鼻喉科及眼科等收住小儿意外损伤病例的损伤类型、年龄分布及相关危险因素进行分析。意外损伤按国际疾病分类标准ICD-10进行分类。结果在1376例小儿意外损伤中,主要损伤类型为外伤（72.67%）,好发季节为夏季（35.6%）,好发场所为运动娱乐场所（21.8%）、家中（15.3%）,0-3岁为多发病年龄,其中气道异物和烫伤受年龄影响最明显,该类型损伤分别有88.29%和78.5%发生在0-3岁。结论意外损伤严重威胁小儿健康与生命,它的发生受环境、季节、年龄等因素影响,不同损伤类型有各自的特点。加强安全意识,采取相应措施,多数意外损伤可以预防。     

BLyS/April在川崎病患者中的表达及意义

目的 探讨BLyS／April在川崎病（KD）免疫发病机制中的作用。方法 急性期KD患儿48例，正常同年龄对照组32名，KD患儿分别于静脉注射丙种球蛋白（IVIG）治疗前后直接取血备检。采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及荧光定量PCR检测单核-巨噬细胞（MC）BLyS和April，BLyS／April受体BR3、BCMA、TACI及细胞因子mRNA表达；双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆中细胞因子蛋白浓度。结果 ①急性期KD患儿MCBLyS和Aprilm RNA表达明显高于正常同年龄对照组（P〈0．01），经IVIG治疗后表达不同程度下降；②BLyS／April受体BR3、BCMA和TACI基因转录水平显著高于正常同年龄对照组（P〈0．01）；③急性期KD患儿抗体类型转换相关细胞因子白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-15 mRNA表达水平及蛋白浓度明显高于正常同年龄对照组（P〈0．01）；④KD患儿BLyS／April调控因子干扰素（IFN）-α/γ、IL-10 mRNA表达水平及血浆浓度明显高于正常同年龄对照组（P〈0．01）。结论 急性期KD患儿BLyS／April过表达可能是导致KD免疫功能紊乱的因素之一。