用于筛选组蛋白去乙酰化酶抑制剂细胞模型的验证

目的验证已建立的组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂筛选细胞模型,并采用该模型进行药物筛选。方法采用脂质体转染法将含有TA1和TA2启动子元件的荧光素酶报道基因真核表达载体pTA1-Luc和pTA2-Luc导入COS-7细胞,G418筛选获得稳定转染上述报告基因系统的细胞克隆。以特异性HDAC抑制剂缩酯环肽FK228,N-辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)和曲古抑菌素A(TSA)为阳性对照,通过测定荧光素酶活性评估TA1和TA2启动子对HDAC抑制剂的反应;并采用此细胞模型对其他抗肿瘤药物和植物提取物进行初步筛选。结果稳定转染的COS-pTA1及COS-pTA2细胞对HDAC抑制剂具有良好的浓度依赖性(FK228:相关系数为0.7236;SAHA:相关系数为0.7997;TSA为相关系数为0.9815;P<0.01),其中COS-pTA1的特点是灵敏度高,可以有效避免因样品活性低而出现漏检。COS-pTA2细胞的特点是检测背景低,特异性强,可以有效排除假阳性的标本。两种细胞模型的联合筛选,可以鉴定具有HDAC抑制活性的化合物。结论该细胞模型可用于筛选具有HDAC抑制活性的先导化合物。     

经维甲酸处理的瘤细胞作为“瘤苗”的免疫治疗实验

为观察维甲酸对体外培养的肿瘤细胞免疫原性的影响,本实验将经维甲酸处理的小鼠前胃癌(MFC)细胞作为活瘤苗,进行了免疫接种及免疫治疗的实验观察。结果表明免疫接种小鼠可完全排斥再次接种未经药物处理瘤细胞的生长,同时伴有体内细胞免疫反应增强。将该瘤苗用于荷瘤小鼠的免疫治疗,可使肿瘤生长速度减慢,荷瘤生存期明显延长,提示维甲酸可通过改变肿瘤细胞的免疫原性介导机体抗瘤反应。     

肺癌细胞中survivin与紫杉醇作用的实验研究

目的:探讨survivin与紫杉醇作用机制可能的关系.方法:分别以体外药物敏感试验(MTT法)、流式细胞术、Western blot观察紫杉醇作用后,A549细胞生长抑制情况以及细胞周期、凋亡、survivin蛋白等指标的变化.结果:紫杉醇作用12h后,A549细胞才表现出生长抑制,并且这种抑制具有明显的时间依赖性(P＜0.05).不同作用浓度对A549生长的影响也存在差异,在同一时间点,紫杉醇浓度越大,细胞存活率越低(P＜0.05).时间依赖性实验中,10nM紫杉醇诱导的survivin表达与G2/M期阻滞一样,早在4h即已出现,延长作用时间(48h或更长),表达反而降低,但凋亡所占比例则与作用时间呈正相关(P＜0.05).浓度依赖性实验中,不同浓度紫杉醇同样表现出有效诱导survivin表达的能力(P＞0.05),G2/M期阻滞则呈浓度依赖性特点,凋亡比例于10nM达高峰;survivin表达与G2/M期阻滞、凋亡无相关性(P＞0.05).结论:紫杉醇对A549的生长抑制作用呈时间依赖性,紫杉醇诱导的survivin表达与G2/M期阻滞及凋亡的关系可因紫杉醇浓度而不同.时间依赖性实验中,10nM紫杉醇诱导的survivin表达与G2/M期阻滞变化趋势基本一致,但与凋亡相反,提示有丝分裂生存途径可能是肺癌细胞通过survivin拮抗紫杉醇诱导凋亡的一种重要方式,抑制survivin表达可能成为增加肺癌细胞对紫杉醇敏感性的有效途径.     

FK228阻断细胞生存信号通路诱导前列腺癌细胞凋亡

目的：研究组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂FK228诱导前列腺癌细胞系DU145凋亡的作用机制。方法：MTT比色法测定FK228抑制DUl45细胞增殖及其对细胞的杀伤效应；瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态的变化；流式细胞术分析细胞周期的改变；蛋白印迹实验检测细胞内蛋白表达水平的变化。结果：FK228明显抑制DU145细胞体外增殖，并介导细胞死亡；12．5ng／ml FK228作用细胞48h后，细胞存活率降至63．7％；伴有细胞形态改变及细胞周期阻滞于G0／G1期；细胞内多种重要的激酶蛋白，包括EGFR、Her2、Raf-1、Src、Cdk4、Akt及凋亡抑制蛋白Survivin均发生了不同程度的降解，细胞内两条重要的生存信号通路Raf-MEK—ERK及P13K／Akt被阻断，细胞发生凋亡。结论：FK228可以通过清除细胞内重要信号蛋白、阻断细胞生存信号通路来诱导DU145细胞发生凋亡。     

HER2/neu靶向治疗与非小细胞肺癌

在世界范围内,肺癌是发病率最高的肿瘤之一,同时也是病死率最高的肿瘤。人们估计,在美国2001年新诊断了169500例肺癌患者,死亡157400例[1]。根据临床表现和细胞学类型,肺癌分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC),85%肺癌患者的病理类型为NSCLC。绝大部分NSCLC患者就诊时已处于晚期(ⅢB期或Ⅳ期)。这些晚期患者已经失去手术和放疗的机会,临床上只能采用全身化疗的方法进行治疗。目前对于晚期肺癌,最好的化疗方案的有效率也只有15%～21%,患者的中位生存期为7～8个月。因此,近些年来人们根据肿瘤细胞的分子生物学特征,开发了针对…     

肝细胞癌组织微血管密度和VEGF表达及意义

目的 探讨肝细胞癌组织中微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)表达特征及其与组织形态和自然病程的关系.方法 采用免疫组化法检测63例肝癌患者癌组织、癌旁组织和20例非癌肝组织中MVD及VECF表达.结果 肝细胞癌组织MVD明显高于癌旁和非癌组织(P<0.0500);低MVD者生存期明显长于高MVD者(P<0.05);癌组织VEGF表达与组织分化程度无明显相关性(P=0.1393),与MVD及预后有相关性(P分别=0.0002、0.0039).结论 VEGF参与了肝细胞癌组织血管新生;MVD及VEGF与肝细胞癌的发生发展及自然病程有关.     

黄芪甲苷逆转血管紧张素Ⅱ引起的主动脉平滑肌细胞线粒体功能障碍

目的:研究黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,As-Ⅳ)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)引起的线粒体功能障碍的逆转作用?方法:培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),低血清培养液饥饿处理后分为24 h 对照组?Ang Ⅱ 24 h 处理组?48 h 对照组?Ang Ⅱ 48 h 处理组?As-Ⅳ 治疗组?24 h 对照组和Ang Ⅱ 24 h 处理组使用线粒体呼吸功能检测仪进行线粒体呼吸功能检测,线粒体 ATP 含量检测;48 h 对照组?Ang Ⅱ 48 h 处理组和As-Ⅳ 治疗组进行线粒体呼吸功能检测?线粒体ATP 含量检测?电镜观察线粒体结构变化,共聚焦显微镜检测线粒体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和Mn-SOD活性检测?结果:Ang Ⅱ 24 h 处理组与 24 h 对照组相比,线粒体耗氧率(oxygen consumption rates,OCRs)出现下降,线粒体ATP 含量减少(P ≤ 0.05);Ang Ⅱ 48 h 处理组与 48 h 对照组相比,线粒体 OCRs 显著下降,线粒体ATP含量明显减少(P < 0.05),线粒体出现嵴模糊?肿胀?空泡,线粒体内 ROS 水平升高(P < 0.05),Mn-SOD 活性下降(P ≤ 0.05);As-Ⅳ 治疗组较 Ang Ⅱ 48 h 处理组线粒体 OCRs 和线粒体 ATP 含量明显回升(P < 0.05),线粒体形态结构损伤减轻,线粒体内 ROS 水平降低(P < 0.05),Mn-SOD 活性升高(P ≤ 0.05)?结论:As-Ⅳ可以通过增强线粒体Mn-SOD 活性,降低线粒体内 ROS 水平,进一步减轻线粒体结构损伤并提高线粒体 OCRs 和 ATP 含量,从而逆转Ang Ⅱ引起的线粒体功能障碍?     

采用活体成像技术监测肿瘤生长及转移模型的建立

目的 采用活体成像技术监测稳定高表达荧光素酶报告基因的肿瘤细胞在小鼠体内生长及转移情况,为肿瘤治疗的药物研发提供新的有用工具.方法 采用lipofectamine2000介导的基因转染方法,将pcDNA3.1/Luc载体转染小鼠高转移乳腺癌细胞株4T1、EMT-6及结肠癌细胞株CT26,经G418抗性筛选及有限稀释法获得可稳定高表达荧光素酶的单克隆细胞;MTT法测定各转染细胞对不同化疗药物的抗性,并采用活体成像的方法检测各转染细胞在小鼠体内的成瘤和转移.结果 获得了可稳定高表达荧光素酶基因的单克隆细胞株,该单克隆细胞株具有与亲本细胞系相同的对化疗药物的敏感性;将单克隆细胞株植入小鼠皮下,可采用活体成像技术准确监测肿瘤细胞体内生长及转移.结论 采用活体成像技术构建的肿瘤动物模型是拓展肿瘤体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型.     

VEGF及CD105在结直肠癌中的表达及其意义

目的探讨在结直肠癌中血管内皮生长因子（VEGF）的表达及CD105标记的微血管密度（MVD）的计数，及两者与病理参数的关系。方法应用免疫组织化学方法检测60例结直肠癌及60例正常结肠组织中VEGF及CD105的表达。结果结直肠癌中VEGF表达的阳性率为68．3％，MVD值为36．50±9．43，与正常结肠组织中VEGF表达的阳性率（O）及MVD值（16．68±7．65）比较差异有统计学意义（均P〈0．01）。VEGF的表达及MVD与浸润深度、Dukes分期及有无淋巴结转移密切相关。结论VEGF参与结直肠癌的血管生成，且与预后有一定关系。