临床分离肠球菌属对万古霉素耐药基因的检测及分子流行病学研究

目的 了解临床分离肠球菌属对万古霉素的敏感性,并对糖肽类耐药基因型别及菌株同源性进行研究.方法 琼脂稀释法测定72株肠球菌属对万古霉素敏感性,PCR检测万古霉素中敏肠球菌属中vanA、vanB、vanC1和vanC2基因存在情况,ERIC-PCR进行同源性分析.结果 10株万古霉素中敏肠球菌属对其他临床常用抗菌药物耐药率均>50%,而对替考拉宁、利奈唑胺的耐药率为0;2株vanC2基因阳性,未发现vanA、vanB基因;ERIC-PCR结果显示,10株万古霉素中敏肠球菌属分为8型,其中A型(3株)来自同一所医院.结论 万古霉素不敏感肠球菌属显示多药耐药,但对替考拉宁和利奈唑胺敏感,部分菌株vanC2基因阳性,可能存在菌株间的克隆传播.     

重症监护病房分离铜绿假单胞菌的耐药性及分子流行病学检测

目的 了解重症监护病房(ICU)分离铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药性及分子流行病学特征.方法 采用MicroScan WalkAway-40全自动微生物分析仪对铜绿假单胞菌进行药物敏感性测定,采用随机引物聚合酶链反应(ERIC-PCR)方法进行分子流行病学检测.结果 铜绿假单胞菌对头孢他啶的耐药率最低(27.3%)、其次为头孢吡肟(45.5%);对头孢噻肟的耐药率最高达100.0%、其余抗菌药物耐药率均>60.0%;ERIC-PCR结果显示,有5株铜绿假单胞菌属于同一型别.结论 ICU分离铜绿假单胞菌多药耐药显著,仅对头孢他啶较为敏感,菌株间存在克隆传播、临床应加强检测和监测.     

肠球菌氨基糖苷类高水平耐药机制的研究进展

肠球菌是临床较常见的一类条件致病菌.随着肠球菌院内感染率增加,其对氨基糖苷类药物表现出高度的耐药性,极大地影响了临床用药的选择.掌握肠球菌的生物学特性并从分子水平对耐氨基糖苷类抗生素肠球菌的耐药基因及耐药机制进行研究,可从理论上指导临床采取合理措施对肠球菌感染进行有效治疗和预防.     

建立传染病教学病例资料库的必要性和方法

近30年来传染病的疾病谱发生很大变化,新的治疗方法不断涌现,加之传染病固有的季节性和地域性差异,使得目前教材及参考书的难以满足当前青年医学生的需要,迫切需要建立图文并茂、可模拟、实用性强的教学资料库。该文就此提出相关设想供广大医学教育工作者共同探讨其必要性、可行性和意义。     

2003-2009年血标本分离病原菌分布及其药敏分析

目的了解医院2003-2009年血培养中分离的病原菌分布及耐药性,为临床治疗提供用药依据。方法回顾性分析医院2003年1月-2009年12月血培养标本中分离的菌株,并进行菌株鉴定和药物敏感试验。结果 21 372份血培养标本分离出病原菌1404株,阳性率6.5%;革兰阳性菌768株占54.7%,革兰阴性菌547株占39.0%,真菌89株占6.3%,复数菌感染21例占1.5%;其中凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌分别占31.1%、20.6%、7.9%,葡萄球菌属中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌分别占52.3%和85.4%,耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)显示多药耐药性,对大多数药物的耐药性显著高于甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS),未发现万古霉素耐药株,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的检出率分别为57.8%、36.5%,产ESBLs菌株显示多药耐药性,对大多数药物的耐药性显著高于非产ESBLs菌株;铜绿假单胞菌除对亚胺培南、头孢他啶较为敏感外,对其他抗菌药均有较高的耐药性。结论医院血培养分离的病原菌分布较广,葡萄球菌属、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌是主要分离菌株,且耐药显著。     

鲍曼不动杆菌临床分离株对喹诺酮类耐药表型和质粒耐药基因研究

摘要：目的：调查临床分离的鲍曼不动杆菌的分布和耐药性,了解鲍曼不动杆菌质粒对喹诺酮类抗菌药物的常见耐药基因和分子机制,为临床抗感染治疗提供依据。 方法：用Vitek系统鉴定细菌,用M-H琼脂稀释法药物敏感试验测定菌株对左氧氟沙星、环丙沙星和加替沙星3种喹诺酮类药物的MIC,PCR扩增质粒上的qnrA、B、C、D、S,氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ib及外排泵qepA基因,选取部分PCR扩增产物进行测序分析。 结果：鲍曼不动杆菌对环丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星的耐药率分别为78.3％、58.3％和40.0％。PCR扩增结果显示,aac(6′)-Ib阳性率达29.2%（35/120）,测序发现aac(6′)-Ib基因编码的氨基酸密码子不存在点突变,未检出新氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ib-Cr基因;未检测出质粒上的qnrA、B、C、D、S及外排泵qepA基因产物。 结论：鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物耐药情况严重,耐药机制与aac(6′)-Ib-Cr亚型无关,也没有质粒上的qnrA、B、C、D、S和外排泵qepA基因的因素。     

重组pAd/CMV/V5-DEST-p16载体的构建及其对人肝癌细胞的抑制作用

目的构建pAd/CMV/V5-DEST-p16重组腺病毒载体,并观察野生型p16基因对人肝癌细胞SMMC7721株的抑制作用。方法合成人p16-INK4表达基因。构建pENTR 1A-p16质粒。通过LR反应,入口克隆pENTR 1A-p16质粒的外源性合成的修饰后的p16 cDNA,取代目的载体pAd/CMV/V5-DEST中的ccdB基因,形成表达克隆pAd/CMV/V5-DEST-p16。测序证实质粒含有目的基因。PacI酶切后的重组腺病毒载体,通过脂质体2000介导,转染293A细胞,产生缺陷性的重组腺病毒。W estern blot分析显示在由重组腺病毒介导的野生型p16基因在肝癌细胞SMMC7721中能够表达蛋白。被感染的细胞的生长受抑制。结果构建了重组p16腺病毒载体,产生缺陷性的重组腺病毒,野生型p16基因对人肝癌细胞SMMC7721株有抑制作用。结论用通路克隆系统构建重组p16腺病毒载体稳定、可靠、方便,腺病毒能够介导野生型p16基因在肝癌细胞中表达,并抑制细胞的生长。     

TEM型β内酰胺酶新亚型TEM-166编码基因的克隆表达

目的了解临床分离大肠埃希菌Ayfy2926中TEM型β内酰胺酶的基因型。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增大肠埃希菌Ayfy2926中TEM型β内酰胺酶的全编码基因并对PCR产物进行序列分析;PCR产物克隆入pHSG398质粒并在感受态细胞大肠埃希菌JM109中进行表达,琼脂稀释法测定转化子菌株对β内酰胺类抗菌药的敏感性。结果大肠埃希菌Ayfy2926中TEM型β内酰胺酶的基因型为一种新亚型,TEM-166(GenBank注册号FJ197316);与TEM-1相比,仅有1个氨基酸差异(Arg120→Gly);与TEM-1转化子菌株相同,TEM-166转化子菌株对哌拉西林高度耐药,对第三代头孢菌素、亚胺培南敏感,β内酰胺酶抑制剂可显著降低克隆表达菌株的耐药性。结论TEM-166为TEM型β内酰胺酶的新亚型,是一种非超广谱β内酰胺酶。     

腹腔和胆道分离产ESBLs大肠埃希菌的酶基因型及分子流行病学检测

目的了解腹腔和胆道分离的大肠埃希菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型及产酶菌株的流行情况。方法采用聚合酶链反应扩增TEM、SHV、CTX-M型ESBLs基因并测序,用ERIC-PCR方法进行分子流行病学研究。结果产ESBLs大肠埃细菌中,TEM-1+CTX-M-1组+CTX-M-8组、CTX-M-2组+CTX-M-9组各3株,CTX-M-8组+CTX-M-9组2株,TEM-1型为5株,TEM-1+CTX-M-1组、TEM-1+CTX-M-8组、TEM-1+CTX-M-9组、CTX-M-2组+CTX-M-9组、CTX-M-8组、SHV-5+TEM-1、SHV-1、TEM-1+CTX-M-2组+CTX-M-8组+CTX-M-9组各1株,4株细菌PCR检测为阴性,3株产CTX-M-2组+CTX-M-9菌株中,两株ERIC-PCR谱型相近。结论腹腔和胆道分离的大肠埃希菌中,ESBLs基因型以CTX-M型为主;少数产酶菌株间存在克隆传播现象。     

嗜麦芽窄食单胞菌的耐药性监测

目的 了解临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌的耐药情况。方法 采用MicroScan WalkAWay-40全自动微生物分析仪对2000年1月1日～2003年12月31日安徽医科大学第一附属医院临床分离的74株嗜麦芽窄食单胞菌的耐药性进行测定。结果 嗜麦芽窄食单胞菌对亚胺培南、氨曲南、头孢曲松、庆大霉素、妥布霉素、头孢噻肟、阿米卡星、哌拉西林、头孢他啶、环丙沙星的耐药率均在50％以上，复方新诺明的耐药率最低，为5．3％～19．2％；痰标本来源菌株所占比例最高，为67．6％；分离患者中60岁以上的占70．3％；干部病房、重症监护病房（intensive care unit，ICU）和血液内科占43．2％。结论 嗜麦芽窄食单胞菌为多重耐药菌株，临床上应加强耐药性监测和合理用药。