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目的:血管重建手术在多数情况下以自体血管作为替代品,但来源有限。胚胎干细胞具有发育全能性,目前其定向诱导机制尚不明确。通过选择适当的诱导剂,探讨胚胎干细胞体外向血管平滑肌细胞分化的趋势。
方法:实验于2006-08/2007-02在南昌大学第二附属医院血液病研究所完成。①动物及细胞系:清洁级孕12.5 d昆明小白鼠1只,由南昌大学医学院动物中心提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。小鼠胚胎干细胞系129X/SvJ编号为SCRC-1018,由American Type Culture Collection提供。②实验方法:取孕12.5 d鼠胚胎,去除头部、内脏及四肢,将组织块剪碎,胰酶消化,分离培养胚胎成纤维细胞,传至3~5代时更换为含体积分数为0.15胎牛血清的DMEM高糖培养基,24 h后收集培养液,加入2.0 mmol/L L-谷氨酰胺,1×非必需氨基酸,0.1 mmol/L β-巯基乙醇,1 000 U/mL白血病抑制因子,此即为条件培养基。常规复苏小鼠胚胎干细胞系129X/SvJ,以1×106密度接种,传代时用差速贴壁法分离去除已分化的胚胎干细胞,加入条件培养基5 mL,经过悬滴-悬浮培养,构建拟胚体分化模型。设立3组,各组均置于明胶包被的T25培养瓶中,每瓶加入50个拟胚体,使其均匀分布于培养瓶底。诱导组7~10 d加入10-9 mol/L全反式维甲酸和3μg/L转化生长因子β1,10~21d加入 20μg/L血小板源性生长因子。血清对照组仅加入去生长因子胎牛血清,全反式维甲酸组仅加入全反式维甲酸。诱导21d的拟胚体,用胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ联合消化为单个细胞,再加入20μg/L血小板源性生长因子继续诱导7d。③实验评估:应用RT-PCR法检测诱导细胞血管平滑肌肌动蛋白、血管平滑肌肌球蛋白重链基因的表达。通过免疫细胞化学技术检测血管平滑肌肌动蛋白的表达来鉴定细胞性质。
结果:①胚胎干细胞生长及拟胚体诱导分化:胚胎干细胞在体外能自发形成拟胚体,经过不同生长因子的分阶段联合诱导,拟胚体贴壁后球体略摊开,周围出现大量的梭形细胞。②RT-PCR检测:拟胚体血管平滑肌肌动蛋白和血管平滑肌肌球蛋白重链基因均呈强阳性表达。③免疫细胞化学检测:荧光显微镜下,罗丹明染色细胞浆呈红色荧光,并可见肌丝结构;DAPI染色细胞核呈蓝色荧光。诱导组血管平滑肌肌动蛋白阳性率明显高于血清对照组、全反式维甲酸组(P < 0.05)。
结论:胚胎干细胞经维甲酸、转化生长因子β1以及血小板源性生长因子分阶段联合诱导后,可分化为血管平滑肌细胞且纯度较高。随着细胞纯度和活性等问题的进一步解决,胚胎干细胞将有可能成为血管组织工程的种子细胞。 相似文献
63.
急性脑梗塞患者血清肿瘤坏死因子水平变化的观察 总被引:7,自引:0,他引:7
采用双抗体夹心ELISA法对30例正常对照和36例急性脑梗塞患者血清肿瘤坏死因子(TNF)水平进行了检测。结果显示:急性脑梗塞组血清TNF水平显著高于正常对照组,血清TNF水平变化与脑梗塞容积大小密切相关,恢复期血清TNF水平显著降低。结果提示,TNF参与了脑梗塞发生后病理变化过程,检测血清TNF对判定脑梗塞容积大小有一定的临床意义。 相似文献
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目的评价磁共振相位对比电影成像(PC-MRI)技术在脑积水诊断中的临床应用价值。方法使用GE3.0 T磁共振扫描仪,采用PC-MRI程序检查,对我院收治的20例交通性脑积水及25例梗阻性脑积水患者及48名同期在我院体检的志愿者的中脑导水管水平脑脊液流速、流量进行检测,比较2组脑脊液相关力学数据基本情况。结果 交通性脑积水中脑导水管水平脑脊液在不同阶段所引起的反应存在着一定的差异,其中在收缩期与舒张期分别表现为向下、向上峰速,而且均大幅增加了其流量;梗阻性脑积水中脑导水管水平脑脊液在不同阶段所引起的反应也存在一定的差异,其中在收缩期与舒张期分别表现为向下、向上峰速,而且在流量方面都出现大幅降低的现象。相较于健康人进行统计有明显差异(P<0.05),健康人(对照组)脑脊液流动曲线呈U形、倒U形,正弦波形,曲线光滑,而脑积水组脑脊液流动曲线呈锯齿状,无规则,或呈直线。结论 磁共振相位对比电影成像能无创检测脑脊液流速、流量和方向,可鉴别脑积水类型,为临床治疗提供方向。 相似文献
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苄吲酸L-赖氨酸盐(BZL)是抗白内障新药, 本文研究了BZL的致畸性。选用Wistar孕鼠,随机分为四组:以敌枯双作阳性对照;以羧甲基纤维素作阴性对照;BZL分高、低剂量组,分别为小鼠LD_(50)(1099mg/kg)的1/3和1/50。结果表明,阳性对照药敌枯双对大鼠具体非常显著的生殖毒性,对胎鼠的外观、内脏和骨骼均 相似文献
68.
良性阵发性位置性眩晕(benign paroxysmal positional vertigo,BPPV)是临床最常见的前庭外周性眩晕,少数患者症状持续不愈或反复发作,此类称之为难治性BPPV.近年来,随着对BPPV的发病因素、临床表现和手法复位研究报道的增多和深入,日益受到学者和临床医师的关注和重视.本文就难治性BPPV的发病机制及其临床评价方法和意义做一综述. 相似文献
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王瑞玲韩冬韩魏巍邓灵福袁永泽熊丽刘德立耿辉 《中国免疫学杂志》2015,(11):1465-1471
目的:鉴定RA相关自身抗原COMP的一株特异性单克隆抗体15A11的表位特征。方法:选用随机十二肽噬菌体库对m Ab 15A11进行三轮筛选,随机挑取40个单噬菌斑,提取DNA,测序;ELISA检测每个噬菌体克隆与m Ab 15A11结合的特异性;通过Clustal W2对特异性结合的噬菌体展示的十二肽和COMP进行氨基酸序列比对,Py MOL分析一致氨基酸所在肽链的二级结构及表位氨基酸之间的距离,初步确定m Ab 15A11的表位;变性和非变性Western blot、EDTA螯合Ca2+后ELISA分析以及合成多肽的ELISA实验进一步确定表位序列。结果:得到的40个测序噬菌体中,共有5个噬菌体克隆,ELISA确定克隆1和克隆2与m Ab 15A11特异性结合,其他克隆均为非特异性结合的噬菌体;氨基酸序列比对,在COMP上未发现与克隆1和克隆2噬菌体相同的连续氨基酸序列,提示m Ab 15A11的抗原表位可能为非线性表位;Py MOL分析表位氨基酸在COMP上的定位及距离,显示构象表位的合理性;变性Western blot分析为阴性,而非变性Western blot条件下为阳性;EDTA螯合Ca2+破坏COMP的构象后不能与m Ab 15A11结合,而未经处理的与m Ab 15A11结合,均说明m Ab 15A11表位是构象表位;合成多肽与m Ab 15A11的ELISA结果进一步确定了m Ab 15A11的构象表位序列。结论:鉴定了m Ab 15A11的表位是构象表位序列,且确定了该构象表位的氨基酸组成,为研究COMP抗体与抗原反应机制具有重要理论价值,并对类风湿性关节炎的检测有重要应用意义。 相似文献
70.
腹腔镜在妇科恶性肿瘤诊治中的应用与规范化问题 总被引:2,自引:0,他引:2
腹腔镜在妇科恶性肿瘤诊治中的应用日益广泛,除肿瘤细胞减灭术外,几乎所有妇科恶性肿瘤开腹手术都有相对应的腹腔镜手术。腹腔镜技术与经阴道手术等其他的手术技术相结合,产生了一些新的手术方式。严格遵循妇科恶性肿瘤手术治疗原则的腹腔镜手术效果与相应的开腹手术相当或者更佳。机器人腹腔镜手术可能是妇科恶性肿瘤手术未来的发展方向。 相似文献