Attractin蛋白和mRNA在不同日龄大鼠睾丸中的表达

目的:已知成熟大鼠睾丸组织中有Attractin蛋白的广泛表达,本文旨在进一步探讨Attractin蛋白和AttractinmRNA在各年龄段大鼠睾丸组织中的分布。方法:取出生第1d(新生鼠)、第5d(青春前期)、第20d(青春中期)、第50d(青春后期)及第70d(成年期)大鼠睾丸和附睾组织固定,采用酶免疫组织化学和原位杂交方法检测Attractin和AttractinmRNA在大鼠睾丸组织中的表达。结果:免疫组化显示各年龄段大鼠睾丸生精小管和间质细胞、管周肌样细胞上均有Attractin蛋白的表达,分布于胞膜和胞质,精子和附睾上未见表达。随着日龄的增加,间质细胞的表达逐渐增强。原位杂交显示各年龄段大鼠睾丸生精小管和间质细胞、管周肌样细胞、支持细胞上也均有AttractinmRNA阳性棕色颗粒杂交信号,主要表达于胞核及胞质。且随着日龄的增加,睾丸生精细胞表达略强于间质细胞。精子和附睾上未见表达。结论:AttractinmRNA和Attractin蛋白在各日龄大鼠睾丸组织中均有广泛的分布,且分布一致。提示各日龄大鼠睾丸组织都具有合成Attractin蛋白的能力。其生理功能和机制尚有待进一步探讨。     

弱精子症、少弱精子症患者血清、精浆和精子锌含量分析

目的:检测弱精子症和少弱精子症患者血清、精浆和精子锌的含量,分析锌含量的变化与精子密度和精子运动之间的关系。方法:按照WHO《人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》第四版的标准进行精液质量分析,随机筛选出90例弱精子症、60例少弱精子症患者以及20例精液质量正常的生育者作为研究对象,利用原子吸收光谱法检测其血清、精浆、精子的锌含量并进行统计学分析。结果:3组间血清锌含量没有显著差异;弱精子症、少弱精子症患者精浆锌含量均显著低于正常生育者(P<0.05);少弱精子症患者精子锌含量显著高于弱精子症患者和正常生育者(P<0.01)。结论:弱精子症、少弱精子症患者精子的发生及运动功能下降可能与精浆锌含量的低下呈正相关;但过高的精子锌含量与精子的发生和运动功能的关系尚不十分明了,有待进一步研究。     

用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA

目的：建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法：用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg^2＋浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果：定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg^2＋浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log（X）＋25.99和Y=-3.409log（X）＋24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论：用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。     

体外rhTNF-α对人精子运动、线粒体功能影响的实验研究

目的:观察重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)在体外对人正常精子运动、线粒体功能的影响.方法:56例健康成年男性手淫法获得精液,符合WHO精液正常标准者40例.Peroll梯度离心法得到的精子为精子模型,将精子密度调整为10×106/ml,与终浓度0.03、0.06、0.09、0.27μg/L的rhTNF-α分别在37℃、5%CO2的环境中孵育,同时设立空白对照组.分别在0.5、1、2、3、4 h取样:①10μl样本用于计算机辅助精液分析(CASA)检查精子运动参数变化.②250μl样本分别用终浓度均为10μg/ml的Rhl23和PI双染色精子,流式细胞仪检测精子线粒体功能的变化.结果:CASA检测结果表明rhTNF-α终浓度为0.06、0.09、0.27μg/L各组精子的活率、直线速度、曲线速度、平均速度、前向运动明显低于对照组(P＜0.01),且各组的线粒体功能良好的精子明显减少.精子运动参数降低的趋势分别与TNF-α浓度和孵育时间呈正相关,r值分别为0.675、0.691、0.762、0.693、0.724和0.571、0.594、0.752、0.791、0.816(P均＜0.01).线粒体功能良好的精子数目减少的趋势分别与TNF-α浓度和孵育时间呈正相关,r值分别为0.615、0.643、0.752、0.691、0.754和0.532、0.567、0.782、0.692、0.854(P均＜0.01).而rhTNF-α终浓度为0.03μg/L组精子的运动参数及线粒体功能与空白对照组相比差异无显著性(P＞0.05).结论:rhTNF-α可以降低人精子运动能力,同时线粒体功能也受一定的影响.提示rhTNF-α有可能通过干扰精子线粒体的能量代谢,而降低精子运动能力.     

西地那非对雄性猕猴性功能的影响

目的 :明确西地那非对雄性猕猴性功能的影响。方法 :将 2 0只雄性猕猴随机均分两组 ,分别记录用药组和溶剂对照组猕猴阴茎长度和直径、阴茎海绵体平滑肌肌电( EMG)、阴茎海绵体腔内压 ( ICP)。结果 :与溶剂对照组相比 ,用药组猕猴阴茎直径和海绵体腔内压显著增加 ,阴茎海绵体平滑肌肌电显著降低。结论 :西地那非对于雄性非灵长类动物阴茎勃起功能具有显著的激发作用 ,为临床治疗勃起功能障碍和动物繁殖技术研究提供参考     

湖北省农村妇女生育状况的现况研究

目的了解湖北省农村妇女生育状况的现况.方法用横断面调查方法分析了湖北省农村妇女的生育状况.结果文化程度低者生育年龄偏早,且生育孩子数较多.没有男孩者较已有男孩者的再生育愿望高.结论计划生育政策已深入人心,广大妇女群众对人口政策的执行已经由不自觉逐步走向自觉,但文化程度还是影响生育观念的重要因素.     

宫内节育器材料与应用研究进展

宫内节育器经过近100年特别是最近半个世纪的发展,已经形成了一个比较完善的系统。现就宫内节育器在材料方面所取得的进展做一个回顾,并针对其现存的一些问题,如出血、感染、腹痛、脱落、月经失调、带器妊娠、子宫穿孔、异位等临床副反应及并发症,从材料与应用角度对宫内节育器的发展进行讨论。     

Clinicopathological features and prognosis of small cell carcinoma of the cervix

Small cell carcinoma of cervix (SCCC) is a rare disease with highly aggressive behaviour and is pathologically hard to diagnose.In this study, the clinicopathological features, diagnosis, treatment and prognosis of the condition were examined.Clinical records and follow-up data of 7 cases of SCCC were retrospectively studied.Our results showed that five non-recurrent cases initially presented irregular vaginal bleeding or increased apocenosis of varying degrees.Pathological examination revealed that the stroma was diffusely infiltrated with small monomorphous cells ranging from round to oval shape.Three cases were immunohistochemically confirmed.One case was accompanied with squamous cell cancer.Of the 7 cases, one case was classified as stage Ⅰb 1, two stageⅠ b2, one stage Ⅱ a, one stage Ⅱb , and one stage Ⅲ b.On the basis of their stages of condition, one subject with stage III b underwent chemotherapy, and one with stage Ib2 received extensive hysterectomy plus pelvic lymphadenectomy, while the other 5 cases were treated by extensive hysterectomy and pelvic lymphadenectomy in combination with pre-and/or post-operative adjuvant chemotherapy and radiotherapy.Of the 7 patients, 4 had relapse-free survival of 14, 14, 16 and 28 months respectively.It is concluded that SCCC is an aggressive tumor with propensity for early pelvis lymph node metastases.Early-stage patients should be treated by extensive hysterectomy and pelvic lymphadenectomy in combination with pre-and/or post-operative adjuvant chemotherapy and radiotherapy.     

大鼠睾丸生精细胞共培养系统的建立

目的 建立生精细胞体外分化(如减数分裂、精子变态)培养体系,为研究精子发生中各种调控因素的作用提供一个良好的细胞模型.方法 取20～22日龄的SD雄性大鼠睾丸,放在预冷的Hanks液中洗2次,用1 mg/mL胶原酶32 ℃消化15～20 min.然后将睾丸剪碎,重复用1 mg/mL胶原酶消化5～10 min.细胞用含10%胎牛血清及各种营养因子的HamF12/DMEM培养液悬浮,按约2×106 /cm2密度分别接种于双室培养槽(双室培养)或放有盖玻片的6孔板(单室培养)中,在32 ℃、95%空气、5%CO2条件下培养.每日在相差显微镜下观察共培养支持细胞/生精细胞的生长状态,定期进行苏木精-伊红染色、BrdU染色.结果 在双室培养2周后,部分生精细胞可见鞭毛出现,培养4周后,培养体系中仍有一定数量的生精细胞附着在支持细胞上,部分生精细胞上可见鞭毛.单室培养的生精细胞在培养第4～5天开始出现明显脱落,培养1周后大多数生精细胞发生脱落死亡,生精细胞上未见鞭毛出现,但在培养体系中可见次级精母细胞及精子细胞.结论 应用双室培养,生精细胞可存活达1月之久,而且部分生精细胞尾部出现鞭毛,从形态上发生了减数分裂及精子变态过程.     

MCMV M83基因mRNA在小鼠感染睾丸中的表达及与睾丸病变的相关性研究

目的:探讨鼠巨细胞病毒(MCMV)感染的不同时期MCMV M83基因mRNA在小鼠睾丸中的表达及与睾丸病变程度的相关性。方法:采用地高辛标记的MCMV M83mRNA寡核苷酸探针对接种MCMV后不同时期的小鼠睾丸组织进行原位杂交(ISH)检测。将ISH阳性杂交信号的平均光吸度(A)值表示睾丸的MCMV负荷量,分析MCMV M83mRNA在感染睾丸中的表达及其负荷量与睾丸病变程度的关系。结果:接种病毒后各时期的睾丸组织中均有MCMV M83mRNA表达,ISH阳性杂交信号主要定位在间质细胞胞浆内。感染d9的平均A值最高(实验组组间比较,P<0．001)。感染不同时期的生精上皮及间质细胞呈现不同程度的病理性炎性改变,d6-9最为严重。结论:睾丸MCMV感染时,MCMV M83基因的mRNA水平与睾丸感染病变程度相关;提示:对MCMV M83mRNA动态检测可估计感染组织的预后。