阳离子脂质体介导小干扰RNA转染EOMA细胞时转染条件的优化

目的 优化在阳离子脂质体Lipofectamine^TM2000介导下将小鼠NF-κB的小干扰RNA（siRNA）转染入EOMA细胞时的转染条件.方法 将1.0 μl和1.5 μl的Lipofectamine^TM2000与20 pmol、30 pmol、40 pmol、50 pmol 、60 pmol的带荧光标记的siRNA分别组合,制备成相应的转染混合物,转染小鼠血管瘤内皮细胞（EOMA细胞）,于转染24 h后在荧光显微镜下计数阳性细胞率、MTT法检测各转染条件下EOMA的细胞活性.结果 在siRNA量相同的情况下,分别采用1.0 μl和1.5 μl的Lipofectamine^TM2000进行转染其转染效率、细胞毒性无明显差异（P＞0.05）;转染混合物中siRNA浓度为50 pmol时,转染效率最高达到86%,继续增加siRNA的浓度,转染效率提高并不明显;siRNA浓度为60 pmol时转染混合物表现出较高的细胞毒性.结论 以1.0 μl Lipofectamine^TM2000与50 pmol的siRNA组成转染混合物可以实现对EOMA细胞高效转染并保持较高的细胞活性.     

心肺联合移植术1例围术期的监护治疗

心肺联合移植是终末期心肺功能衰竭患者有效的治疗方法，但心肺联合移植术远比单纯心脏移植或肺移植复杂困难，术后并发症较多。围术期的监护治疗是手术成功的关键之一。我们于2004年12月24日为1例先天性心脏病、动脉导管未闭（PDA）、艾森曼格综合征患者进行了心肺联合移植术，现将其围术期的监护治疗分析如下。     

从风邪合脾肾虚损论治糖尿病周围神经病变

糖尿病周围神经病变（DNP）居糖尿病最常见的三大慢性并发症之首。笔者通过10余年的临床实践，认为DNP发病以脾肾虚损为内因，风邪为外因，内外合而发病，现将体会简介如下。     

三种阳离子转染试剂对小鼠血管瘤内皮细胞转染效率及细胞毒性的影响

目的 从三种常用的阳离子转染试剂中筛选出对小鼠血管瘤内皮细胞(EOMA)有较高转染效率和较低细胞毒性的转染试剂.方法 以含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1为报告基因,以阳离子脂质体LipofectamineTM2000、LipofectamineTM PLUS和阳离子聚合物JetPEITM为转染试剂,按照转染试剂盒的说明优化其转染条件,分别转染EOMA细胞,24 h后在荧光显微镜下计数阳性细胞率、MTT法检测各转染条件下对EOMA的细胞毒性.结果 经优化转染条件,LipofectamineTM PLUS和JetPEITM转染的细胞中阳性细胞的最高比例分别为45%和47%,LipofectamineTM2000转染的细胞中荧光蛋白表达的比例最高(＞80%),Lipofecta-mineTM2000试剂在最高转染效率的剂量下仍然保证了80%的细胞存活率.结论 阳离子脂质体LipofectamineTM2000对小鼠EOMA细胞有较高的转染效率和较低的细胞毒作用.     

高血压病胰岛素抵抗的中西医治疗进展

原发性高血压（essential hypertension，EH）又称高血压病，是人类心血管疾病发病率最高的一种疾病，其常伴有胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）rlJ。研究发现，约58％的高血压病患者存在有IR，故对IR的干预在高血压治疗中显得十分重要。现将近年来高血压病胰岛素抵抗的中西医治疗现状概述如下。     

原位心脏移植围手术期的处理(附6例报告)

目的研究原位心脏移植围手术期的处理。方法对6例扩张性心肌病患者行原位心脏移植。结果2例死亡,4例存活。结论通过对心脏移植患者围手术期的处理,表明控制肺动脉高压、维持循环系统的稳定、纠治急性肾功能不全、有效的免疫抑制治疗和预防感染是围手术期的重点工作。     

合并肺动脉高压心脏疾病65例外科临床处理

目的 总结65例合并肺动脉高压心脏疾病的外科治疗经验.方法 术前详细检查肺动脉压力,并给予吸氧、强心、扩血管等治疗,术中注意心肺保护,妥善矫正畸形,并尽量缩短体外转流时间.术后合理应用呼吸支持,监测肺动脉压力,继续强心、扩血管处理.结果 65例患者中,死亡1例（1.54 %）,死因为重度低心排综合征.其余患者恢复情况良好.结论 外科围手术期合理处理可减少合并肺动脉高压心脏疾病患者的手术并发症,提高治疗效果.     

蚤休水提液抗内皮细胞损伤条件培养基诱导脐动脉平滑肌细胞增殖作用的研究

目的观察蚤休对氧化型低密度脂蛋白致内皮细胞损伤后，其培养基损伤诱导人脐动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法①分离制备氧化型低密度脂蛋白。②培养人脐静脉内皮细胞与动脉平滑肌细胞。③制备蚤休（Parispolyphyllavar．yunnanensis）水提液（本实验室提取）。④应用氧化型低密度脂蛋白刺激内皮细胞损伤建立致平滑肌细胞增殖条件培养基，实验分为5组，空白对照组，条件培养基组，条件培养基＋10μmol／L蚤休组，条件培养基＋30μmol／L蚤休组；条件培养基＋100μmol／L蚤休组。经不同浓度蚤休处理后，采用细胞计数以及氚-胸腺嘧啶核苷掺入法检测药物效应。结果①条件培养基组与对照组相比，人脐动脉平滑肌细胞数目增加，氚-胸腺嘧啶核苷掺入率增加。②条件培养基与不同浓度的蚤休同时处理组与条件培养基组相比，细胞数目减少，氚-胸腺嘧啶核苷掺入率也降低，DNA合成下降（r=0．9423，P〈0．05）。③随蚤休浓度增加对脐动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用递增。结论①致内皮细胞损伤后培养基可有促平滑肌细胞增殖作用，蚤休表现为剂量依赖性地抑制平滑肌细胞计数及氚-胸腺嘧啶核苷掺入量。（多可初步认为蚤休降血压作用可能与其抑制人脐动脉平滑肌细胞增殖有关。     

解毒通胰汤保留灌肠联合常规疗法治疗高脂血症性重症急性胰腺炎临床研究

目的：观察解毒通胰汤保留灌肠联合常规疗法治疗高脂血症性重症急性胰腺炎的临床疗效。方 法：选取88 例高脂血症性重症急性胰腺炎瘀毒互结证患者,随机分为对照组和观察组。2 组均予常规治疗方 案,观察组加用解毒通胰汤保留灌肠。2 组均治疗10 d。治疗前后评定2 组患者的急性生理与慢性健康评分 表（APACHEⅡ） 评分、序贯器官衰竭（SOFA） 评分,检测血清淀粉酶（AMS）、肠黏膜屏障功能指标［内毒 素、D-乳酸、二胺氧化酶（DAO）］、炎症因子指标［细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、白细胞介素-6（IL-6）、 降钙素原（PCT）］,比较2 组临床疗效,观察患者症状、体征的变化情况及不良反应的发生情况。结果：治 疗后,观察组总有效率92.86%,对照组总有效率76.19%,2 组总有效率比较,差异有统计学意义（P＜ 0.05）。观察组腹胀持续时间、腹痛持续时间均较对照组缩短,首次排气排便时间较对照组提早,差异均有统 计学意义（P＜0.05）。2 组APACHEⅡ评分、SOFA 评分及内毒素、D-乳酸、DAO、AMS、SAA、ICAM-1、 PCT、IL-6 水平均较治疗前降低（P＜0.05）;观察组以上指标值均低于对照组（P＜0.05）。治疗期间,2 组患 者均无明显不良反应发生。结论：采用解毒通胰汤保留灌肠联合常规疗法治疗高脂血症性重症急性胰腺炎具有 良好临床疗效,可有效改善患者的临床症状和体征,维护肠黏膜屏障功能,抑制炎症反应,安全性高。     

CUDC-907诱导胶质瘤细胞DNA损伤与自噬的实验研究

目的:探讨新型组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidyl-inositol 3-kinase,PI3K)双靶点抑制剂CUDC-907对人胶质瘤U251细胞DNA损伤、细胞周期及自噬的影响。方法:采用不同浓度的CUDC-907处理U251细胞24 h,MTT法检测细胞活力的变化;激光共聚焦显微镜观察DNA损伤标志物γ-H2AX在细胞内的分布;流式细胞术分析CUDC-907对细胞周期的影响;Western blot实验检测细胞内相关蛋白表达水平的变化。结果:CUDC-907能够抑制U251细胞活力。在CUDC-907处理的细胞中,蛋白激酶B(PKB)/Akt和p70核糖体蛋白S6激酶(p70s6K)的磷酸化水平降低,γ-H2AX的焦点数量与蛋白表达显著升高(P 0.05);U251细胞经CUDC-907作用后,G2/M期细胞数量增多;Western blot实验结果表明,CUDC-907促进p21的表达,同时抑制细胞周期素B1(cyclin B1)的蛋白表达和细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)的磷酸化水平(P 0.05);另外,CUDC-907能够诱导细胞自噬,抑制自噬可促进CUDC-907诱导的DNA损伤。结论:CUDC-907能够显著抑制PI3K/Akt信号通路,诱导胶质瘤细胞发生DNA损伤,并阻滞细胞于G_2/M期,同时可诱导胶质瘤细胞发生保护性自噬。