鸡卵黄抗体的制备以及金磁微粒为载体去除人血浆部分高丰度蛋白的研究

目的:以人血浆白蛋白(HSA)和IgG为免疫原,制备特异性鸡卵黄抗体IgY(Egg yolk immunoglobulin),并将其固定于金磁微粒表面,用于HSA和IgG的去除研究.方法:用HSA、IgG以及混合成分分别作免疫原免疫Roman母鸡.制备抗HSA和IgG鸡卵黄抗体IgY,并对IgY的分离提取条件进行优化.SDS-PAGE和间接ELISA检测IgY的纯度和效价.将高效价IgY固定于金磁颗粒表面进行血浆高丰度蛋白去除研究.结果:免疫后60～120 d内,鸡血清抗体效价可达1∶15 000～1∶25 000;收获鸡蛋,提取得到的卵黄抗体IgY效价可达1∶10000～1∶25000,纯度98%以上;采用金磁微粒载体固定IgY,可对血浆中的HSA,IgG进行特异性的去除.结论:人血浆中的高丰度蛋白成分HSA和IgG免疫产蛋母鸡后,可从鸡卵黄中分离提取到高效价、高纯度的卵黄抗体IgY;IgY偶联于金磁微粒表面可特异性的去除人血浆中的HSA和IgG,作为血浆蛋白质组学研究的一种新方法,有较好的应用前景.     

靶向微管解聚蛋白stathmin siRNA对Aβ1-42诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨微管解聚蛋白stathmin siRNA对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法:构建靶向stathmin基因的shRNA真核表达载体;然后用脂质体转染的方法将重组质粒转染至大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,用G418筛选得到稳定转染的细胞;通过RT-PCR和Western印迹方法分析stathmin基因mRNA及蛋白表达水平,筛选表达最低的稳定细胞株。用不同质量浓度的Aβ1-42诱导稳定细胞株,用MTT试验观察筛选稳定细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,转染了重组载体pSilencer4.1-s的细胞中stathmin核酸和蛋白水平的表达均显著下调。与Aβ1-42处理的PC12细胞(63.88±2.36)和PC12-parental细胞(65.78±5.74)比较,Aβ1-42处理的PC12-s细胞(78.57±5.22)的存活率明显增加。用Aβ1-42处理过的PC12细胞(28.31±1.65)和PC12-parental细胞(26.65±3.64)的凋亡比用Aβ1-42处理过的PC12-s细胞(17.77±2.37)的凋亡明显增加。结论:Stathmin基因的下调对Aβ1-42诱导PC12细胞损伤具有保护作用,为阿尔茨海默病的治疗探索了一条新策略。     

七味都气丸中五味子醇甲的含量测定

目的:建立HPLC法七味都气丸中五味子醇甲含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:钻石ODS柱(200 mm×4.6mm,5μm)。流动相:甲醇-水(64:36);流速为1.0ml·min~(-1);检测波长为250 nm;室温。结果:五味子醇甲的线性范围是0.12～1.48μg,r=0.999 9。平均加样回收率为98.2%,RSD=1.0%(n=9)。结论:该法可以用于测定七味都气丸中五味子醇甲的含量。     

高效液相色谱法测定因泼来特注射液中盐酸普鲁卡因和咖啡因的含量

目的 建立因泼来特注射液中盐酸普鲁卡因和咖啡因的含量测定方法。方法 用高效液相色谱（HPLC）法, Hypersil ODS C₁₈色谱柱（250 mm× 4.6 mm,5 μm）,乙腈-水-三乙胺（13：87：0.02）(稀醋酸调节pH值为3.9)为流动相,流速：0.8 mL·min^-1,检测波长：273 nm。结果 盐酸普鲁卡因在5.29 ～52.90 μg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为99.3%,RSD为 1.32%;咖啡因在3.78 ～37.80 μg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为98.8%,RSD为1.26%。结论 该法简洁,快速,准确,可同时测定两物质的含量.     

纤维支气管镜下治疗中量咯血的护理

对36例中等量咯血患者在纤维支气管镜下采用巴曲亭和肾上腺素联合应用于局部进行止血,并结合术前准备、术中配合、术后护理,其结果起效快、疗效好、不良反应少。缩短病程,降低了医疗费用。     

shRNA沉默eIF4E基因表达对人喉癌细胞Hep-2生物学行为的影响

目的构建靶向真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）的shRNA表达载体，观察eIF4E表达抑制对喉癌细胞生物学行为的影响。方法根据人eIF4EmRNA序列设计并构建2个靶向人eIF4E基因的shRNA真核表达载体（pSilencer 4．1-sl和pSileneer4．1-s2）；然后以脂质体转染的方法将shRNA表达质粒转染至人喉癌细胞系Hep-2，经G418筛选出稳定转染的阳性细胞；分别通过反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blotting技术对构建成功的2个shRNA干扰质粒进行有效性筛选，分析其eIF4E mRNA及蛋白表达水平，并筛选出表达抑制最强的稳定转染喉癌细胞系（Hep-2-s2）。通过噻唑蓝（MTT）试验检测Hep-2-s2细胞的体外增殖活性，流式细胞仪技术（FCM）检测其细胞周期和凋亡变化情况。结果经双酶切证实转录shRNA的目的基因片段已成功克隆入pSileneer4.1-CMVneo真核表达载体中，经测序证明插入序列完全正确；eIF4E—shRNA2可以显著下调eIF4EmRNA及蛋白表达水平；eIF4E基因的表达下调明显抑制Hep-2细胞的体外增殖（P〈0．05）；Hep-2-s2细胞的G0／G1期细胞比例显著增加了（14．7±1、1）％，而S期细胞比例减少了（13.2±1．6）％（P〈0．05）；Hep-2-s2的细胞凋亡率显著增加到（18．3±1．7）％（P〈0．051。结论shRNA介导的eIF4E基因表达下调可显著降低喉癌细胞的增殖活性，同时诱导其细胞周期阻滞和凋亡率增加．为喉癌基因治疗筛选出了新的靶点。     

高血压病患者药物治疗依从性影响因素的研究

[目的]了解高血压患者的药物治疗依从性的影响因素。[方法]采用问卷调查法询问了149名高血压病患者的药物治疗依从性及其相关因素。[结果]149例高血压患者中有64人药物治疗依从性差,具体情况表现为不能长期坚持服药、不能按照医嘱要求的每天服药次数进行服药、不能按照医嘱的服药量进行服药、以及不能按照医嘱定时服药。多因素Logistic回归分析结果:病人有意中止服药的OR值为7.56,主观健康评估OR值为2.96、工作忙OR值为14.46、就医不方便OR值为12.94,非医务卫生工作OR值为4.71。[结论]高血压患者药物治疗依从性差以不能长期服药多见,其影响因素是多方面的,有必要加强对病人的健康教育。以提高治疗的依次性。     

诱骗寡核苷酸下调MKN-45细胞OP18基因表达及对细胞增殖的影响

目的：探讨转录因子E2F哑铃形诱骗寡核苷酸（Decoy ODNs）对MKN-45细胞中opl8基因转录调控的影响及对细胞增殖的抑制作用．方法：设计合成针对opl8启动子上E2F的结合位点序列的哑铃形DecoyODNs，然后将合成的序列进行退火、连接，使其形成哑铃形的结构，再应用阳离子脂质体Lipofectamine^TM2000将哑铃形Decoy ODNs转染MKN-45细胞中．TRIzol法提取细胞总RNA，用RT-PCR方法检测细胞中opl8 mRNA表达水平的变化．通过MTT实验监测细胞的生长增殖状况并绘制生长曲线，最后用TUNEL法观察细胞的凋亡的情况．结果：哑铃形Decoy ODNs被成功转染MKN-45细胞，并成功提取了细胞总RNA．RT-PCR检测发现哑铃形Decoy ODNs转染后的MKN-45细胞中opl8 mRNA表达水平明显低于空白对照组，MTT实验所作的生长曲线显示转染细胞增殖速度与空白对照组相比较明显减慢，TUNEL凋亡染色可见凋亡细胞．结论：哑铃形Decoy ODNs能特异性抑制E2F转录因子对op18基因的转录调控，进而抑制opl8基因表达冠MKN45缃晌增碚．     

B超介入宫腔镜输卵管插管在不孕症诊治中的应用

目的:探讨B超介入宫腔镜输卵管插管在不孕症诊治中的价值。方法:对105例不孕妇女进行输卵管通液、碘油造影、B超介入宫腔镜输卵管插管检查。结果:以B超介入宫腔镜输卵管插管为对照组,输卵管通液符合率为44.77%、碘油造影符合率为70.48%,输卵管通液与B超介入宫腔镜输卵管插管比较有显著性差异,子宫输卵管碘油造影(HSG)与B超介入宫腔镜输卵管插管比较无显著性差异。结论:输卵管因素是不孕的一个重要因素,B超介入输卵管插管是理想的检查诊断方法。     

SLED与CVVH血液动力学比较

目的比较持续缓慢低效血液透析(SLED)与持续静脉静脉血液滤过(CVVH)在重症肾衰竭患者治疗中的血液动力学变化。方法采用前瞻开放设计,交叉对照方法,以清洗期12～24h,20例重症肾衰竭患者分别被随机施以SLED和CVVH治疗10h,治疗全程每小时记录平均动脉压、心率、超滤率,记录一过性低血压的发生情况、血管活性药和胶体的使用情况。结果CVVH组平均超滤率(0.262±0.296)L/h,总超滤平均每例(3.296±1.953)L,平均动脉压(102.760±19.494)mmHg,平均心率(89.550±21.203)次/min,一过性低血压发生率16/20;SLED组平均超滤率(0.420±0.333)h,总超滤平均每例(5.403±2.956)L,平均动脉压101.438±19.331,平均心率97.705±21.799,一过性低血压发生率15/20;SNK方差分析显示SLED组每小时超滤率、总超滤率、心率比CVVH组显著增高(P<0.01);但两组治疗之间MAP无差异(P>0.01)。结论SLED在重症肾衰竭患者治疗中血液动力学像CVVH一样稳定,甚至在总超滤量明显大于CVVH时也未明显增多低血压的发生。