骨髓增殖性肿瘤发病机制及风险分层研究进展:第56届美国血液学会年会报道

近年,关于bcr-abl阴性的骨髓增殖性肿瘤(MPN),无论在发病机制、诊断、风险分层还是靶向治疗等方面,都有了长足进步.文章就2014年第56届美国血液学会年会上展示的关于bcr-abl阴性MPN的发病机制、诊断及风险分层研究进展进行介绍.     

多发性骨髓瘤患者血清血管生成素水平的测定及意义

目的研究血管生成素（Angs）与多发性骨髓瘤（MM）的关系并探讨其临床意义。方法用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法检测60例MM患者不同时期的Angs血清浓度,观察其与MM临床分期、肿瘤量分级和治疗效果的关系。结果MM患者血清中Ang-2较正常对照组明显升高;血清Ang-1含量与正常对照组差异无统计学意义。MM患者Ⅱ期的Ang-2血清水平显著低于Ⅲ期。不同肿瘤量分级的MM患者血清Ang-2含量差异有统计学意义。MM治疗有效者,血清Ang-2水平比治疗前明显降低,血清Ang-1水平与治疗前差异无统计学意义;治疗无效者,其血清Ang-1、Ang-2含量与治疗前比较差异均无统计学意义。结论MM患者血清Ang-2水平测定对MM的发病机制研究、病情评价、疗效监测、预后预测有一定意义。     

PTEN基因转染对白血病细胞VEGF调控作用的影响

目的:探讨在白血病细胞中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology deleted on chromosome ten gene,PTEN)对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor 1,VEGFR1)调控作用的影响.方法:将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562,实时荧光定量PCR法检测不同转染组细胞中PTEN、VEGF和VEGF1 mRNA表达水平,Western印迹法检测PTEN、VEGF、Akt和磷酸化Akt蛋白的表达水平,并采用Transwell小室侵袭实验检测不同转染组细胞的侵袭性.通过MTT实验及FCM法检测PTEN基因对脐静脉内皮细胞株ECV304增殖和凋亡的影响.通过鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)体内血管生长实验检测PTEN基因对鸡胚血管生成的影响.结果:与空载体腺病毒(Ad-GFP)相比,Ad-PTEN-GFP 转染人白血病细胞K562后,VEGF及其受体的表达被明显抑制,并呈剂量依赖性负相关;同时,Ad-PTEN-GFP 转染后K562细胞侵袭能力明显减弱.PTEN基因转染能够抑制血管内皮细胞ECV304增殖,并促进其细胞凋亡,细胞周期阻滞在S期.PTEN基因转染可明显抑制CAM血管生长.结论:肿瘤抑制基因PTEN能够抑制内皮细胞增殖和白血病细胞侵袭,其作用机制可能是负调控白血病细胞VEGF表达以及抑制肿瘤血管新生.     

KLF4基因表达与JAK2 V617F点突变的关联性研究

目的 检测骨髓增殖性疾病(MPDs)中JAK2 V617F点突变与锌指蛋白转录因子(KLF4 mRNA)表达,探讨JAK2 V617F点突变与KLF4 mRNA表达水平与BCR/ABL阴性的MPDs的关系.方法 用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)技术检测4组JAK2 V617F点突变,根据结果分为阴性、阳性.反转录特异性聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测4组KLF4 mRNA的表达水平.结果 BCR/ABL阴性的MPDs的62例患者中JAK2 V617F 基因突变慢性特发性骨髓纤维化(IMF)中有5例,阳性率55.56%(5/9), 原发性血小板增多症(ET)中有15例,阳性率57.69%(15/26),真性红细胞增多症(PV)中有23例,阳性率88.46%(23/26),慢性嗜中性白血病1例.慢性粒细胞性白血病(CML)、急性白血病(AL)、对照组均没有阳性病例.KLF4 mRNA在每例样本中均有表达.KLF4 mRNA表达水平在PV组显著高于其他3组(P＜0.05).结论 BCR/ABL融合基因阴性的MPDs患者存在高频率JAK2 V617F点突变,KLF4 mRNA在PV患者中高表达.JAK2 V617F突变导致了KLF4基因表达的增高.JAK2 V617F突变阳性的ET患者,易出现并发症.AS-PCR是一种简单、有效检测JAK2 V617F突变方法.     

多发性骨髓瘤患者PTEN、FAK的表达及其与临床分期、髓外浸润的关系

目的 检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓瘤细胞中PTEN及FAK mRNA及其蛋白水平变化,分析两者的关系及与MM临床分期、髓外浸润的关系,以探讨二者在MM发病中的可能作用.方法 收集55例MM患者与20个缺铁性贫血患者骨髓单个核细胞,应用CD138抗体将MM细胞进行纯化.实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测PTEN、FAK mRNA表达,Western印迹法测定其蛋白表达水平.结果 ①55例MM患者PTEN和FAK mRNA表达水平分别为0.723±0.059和1.072±0.626,对照组分别为0.984±0.359和0.433±0.240,二组相比有显著差异(P ＜0.05,P＜0.01).Spearman双变量相关分析结果显示,MM患者中PTEN mRNA与FAK mRNA表达水平呈显著性负相关(r=-0.560,P＜0.01).②按DurieSalmon分期将MM患者分为两组.Ⅰ+Ⅱ期MM患者组15例,PTEN和FAK mRNA表达水平分别为0.909±0.429和0.726±0.317.Ⅲ期MM患者组40例,PTEN和FAK mRNA表达水平分别为0.653 ±0.347和1.224±0.667,二组比较有显著差异(P ＜0.05,P＜0.01).③按是否伴有髓外浸润将所有MM患者分为两组.伴髓外浸润组12例,PTEN mRNA表达水平为0.656±0.296,伴髓外浸润患者共43例,PTEN mRNA表达水平为(0.742±0.407),二组相比差异不显著(P＞0.05).伴有髓外浸润组FAK mRNA表达水平为1.791±0.618,无髓外浸润组为0.878±0.468,二组相比差异显著(P＜0.01).④选择12例Ⅲ期MM患者和6例对照患者行Western印迹检测,其中无髓外浸润MM患者6例,伴髓外浸润患者6例.12例MM患者PTEN蛋白平均表达水平为0.081±0.087,与对照组(0.332±0.119)相比差异显著(P＜0.01);T-FAK蛋白平均表达水平为0.257±0.119,与对照组(0.106±0.090)比较差异显著(0.01 ＜P＜0.05);p-FAK蛋白在6份对照骨髓中均未测出,11例患者均有不同程度的表达,平均水平为0.082±0.040.二组阳性率比较差异显著(x2=14.14,P＜0.01).⑤无髓外浸润的6例MM患者和伴髓外浸润的6例MM患者PTEN蛋白平均表达水平分别为0.093±0.091和0.069±0.089,T-FAK蛋白平均表达水平分别为0.257±0.126和0.257±0.123,p-FAK蛋白的平均表达水平分别为0.053±0.142和0.097±0.038,p-FAK蛋白平均表达水平在两组之间有显著差异(P＜0.05),PTEN和T-FAK在两组之间无明显差异(P＞0.05).结论 PTEN和FAK mRNA以及蛋白表达水平与MM疾病的发生、进展密切相关.PTEN表达减少是引起p-FAK表达增高的关键因素之一.     

IL-10基因单核苷酸多态性与急性淋巴细胞白血病易感性的相关性研究

目的 探讨IL-10基因单核苷酸多态性与ALL发病易感性的关系.方法 选取2007年1月至2009年12月北京大学第一医院、北京市道培医院115例ALL缓解患者,同时选取323名体检健康者作为对照组.采集ALL患者的骨髓以及健康对照者的外周血标本,提取DNA.设计IL-10启动子区-819C/T、-592A/C引物做PCR,应用限制性内切酶Msl Ⅰ、HpyCH4Ⅲ分析其限制性片段长度多态性,并测序验证;同时分析IL-10基因-819位点、-592位点各基因型构成及等位基因在ALL患者组和健康对照组间的差异.用实时定量PCR检测ALL患者EB病毒DNA和BCR/ABL融合基因,分析IL-10基因-819位点、-592位点各基因型构成及等位基因在EB病毒阳性和阴性组间、BCR/ABL融合基因阳性和阴性组间的差异.结果 ALL患者组IL-10基因-819位点的-819CC、-819TT、-819CT基因型比例分别为14.8%(17/115)、45.2%(52/115)、40.0%(46/115),-592位点的-592AA、-592CC、-592AC基因型比例分别为43.5%(50/115)、16.5%(19/115)、40.0%(46/115);健康对照组-819位点的-819CC、-819TT、-819CT基因型比例分别为9.9%(32/323)、16.4%(53/323)、73.7%(238/323),-592位点的-592AA、-592CC、-592AC基因型比例分别为11.8%(38/323)、15.5%(50/323)、72.8%(235/323),ALL患者组与健康对照组间-819和-592位点基因型构成差异均有统计学意义(x2值分别为46.000和54.550,P均＜0.05＝.ALL患者组-819T等位基因比例为65.2%(150/230),-592A等位基因比例为63.5%(146/230),而健康对照组分别为53.5%(344/646)和48.1%(311/646),差异均有统计学意义(x2值分别为9.877和15.986,P均＜0.05＝.ALL患者中42例检测了EB病毒DNA,其中EB病毒阳性22例,EB病毒阴性20例.EB病毒阳性组-819位点的-819CC、-819TT、-819CT基因型比例分别为9.1%(2/22)、40.9%(9/22)、50.0%(11/22),-592位点的-592AA、-592CC、-592AC基因型比例分别为31.8%(7/22)、13.6%(3/22)、54.5%(12/22),EB病毒阴性组分别为35.0%(7/20)、45.0%(9/20)、20.0%(4/20)和35.0%(7/20)、45.0%(9/20)、20.0%(4/20),2组基因型构成差异均无统计学意义(P均＞0.05).ALL患者中36例进行了BCR/ABL融合基因检测,其中阳性20例,阴性16例.BCR/ABL融合基因阳性组-819位点的-819CC、-819TT、-819CT基因型比例分别为0%(0/20)、45.0%(9/20)、55.0%(11/20),-592位点的-592AA、-592CC、-592AC基因型比例分别为45.0%(9/20)、5.0%(1/20)、50.0%(10/20),BCR/ABL融合基因阴性组分别为18.8%(3/16)、50.0%(8/16)、31.3%(5/16)和50.0%(8/16)、18.8%(3/16)、31.3%(5/16),2组基因型构成差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 IL-10基因-819位点TT基因型和-592位点AA基因型人群易患ALL.

Abstract：

Objective To observe the relationship of IL-10 gene single nucleotide polymorphism and the susceptibility to ALL. Methods The bone marrow and peripheral blood samples from 115 ALL patients and 323 healthy controls were collected in Peking University First Hospital and Beijing Dao-pei Hospital from January 2007 to December 2009. The DNA were extracted from all samples. The primers of -819C/T and -592A/C in the promoter region of IL-10 gene were designed for the PCR. The restrictive fragment length polymorphism of IL-10 gene was analyzed by using restrictive enzyme Msl Ⅰ and HpyCH4 Ⅲ.Sequencing was done in part of these samples to confirm the results of PCR. The differences of genotypes and allele ratio of -819 and -592 sites were analyzed between the ALL patients and healthy controls. Real-time quantitative PCR was performed to detect the EB virus (EBV) infection and the expression of BCR/ABL fusion gene. The differences of genotypes and allele ratio of -819 and -592 sites were analyzed between the positive and negative group. Results The genotype ratios of -819CC, -819TT, - 819CT, -592AA,- 592CC and - 592AC were 14. 8% ( 17/115 ), 45.2% ( 52/115 ), 40. 0% ( 46/115 ), 43.5% ( 50/115 ),16. 5% ( 19/115 ), 40. 0% ( 46/115 ) in ALL patients, and were 9. 9% ( 32/323 ), 16. 4% ( 53/323 ),73.7% ( 238/323 ), 11.8% ( 38/323 ), 15.5% ( 50/323 ), 72. 8% ( 235/323 ) in the healthy controls,respectively. The genotypes of -819 and -592 sites had statistically significant differences between the two groups(x2 values were 46.000 and 54.550, all P ＜ 0. 05 ). The allele ratio of -819T and -592A were (65.2%, 150/230) and (63.5%, 146/230) in ALL patients, while they were 53.5% (344/646) and 48. 1% (311/646)in the healthy controls. There were statistically significant differences between the two groups (x2 values were 9. 877 and 15.986, all P ＜ 0. 05 ). The EBV DNA were detected in 42 ALL patients,among which 22 were positive and 20 were negative. The genotype ratios of -819CC, -819TT, -819CT,-592AA, - 592CC, - 592AC in EBV positive group were 9. 1% ( 2/22 ), 40. 9% ( 9/22 ), 50. 0%(11/22) ,31.8% ( 7/22 ), 13.6% ( 3/22 ), 54. 5% ( 12/22 ), while they were 35.0% ( 7/20 ), 45.0%(9/20) ,20. 0% (4/20) ,35.0% (7/20) ,45.0% (9/20) ,20. 0% (4/20) in the EBV negative group. The genotypes of -819 and -592 sites showed no statistical differences between the two groups( all P ＞ 0. 05 ).The BCR/ABL fusion gene were detected in 36 ALL patients, among which 20 were positive and 16 were negative. The genotype ratios of - 819CC, - 819TT, - 819CT, - 592AA, - 592CC, - 592AC in BCR/ABL positive group were 0% (0/20) ,45.0% (9/20) ,55.0% ( 11/20), 45. 0% (9/20) ,5.0% (1/20) ,50. 0%( 10/20), while they were 18. 8% ( 3/16 ), 50. 0% ( 8/16), 31.3% ( 5/16 ), 50. 0% ( 8/16 ), 18. 8%(3/16), 31.3 % (5/16)in the BCR/ABL negative group. The genotypes of -819 and -592 sites showed no statistical differences between the two groups ( all P ＞ 0. 05 ). Conclusion The population with - 819TT and - 592AA genotype of IL-10 gene shows susceptibility to ALL.     

青蒿琥酯对SP2/0骨髓瘤细胞的强效增殖抑制及促凋亡作用

青蒿素是从传统中草药黄花蒿中分离得到的高效、低毒的抗疟药物，为一种含过氧化基团的倍半萜内酯化合物，其衍生物包括蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿琥酯、双氢青蒿素等。邓安定等首次报道了青篙素衍生物对白血病P388细胞有选择性杀伤活性。此后的研究发现，青蒿素衍生物对肝癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌、宫颈癌等多种肿瘤均具有抗癌活性，且作用广泛。本研究就青蒿琥酯（Artesunate，ART）对于SP2／0骨髓瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用进行了观察。     

青蒿素及其衍生物抗肿瘤机制研究进展

青蒿素(artemisinin)是从传统中草药黄花蒿中分离得到的高效、低毒的抗疟药物,为一种含过氧化基团的倍半萜内酯化合物,其衍生物包括蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿琥酯、双氢青蒿素等。1991年,我国学者邓安定[1]等首次报道了青蒿素衍生物对白血病P388细胞有选择性杀伤活性。此后的研究发     

PCR技术在B-淋巴细胞白血病研究中的应用

用PCR方法对B-淋巴细胞白血病患者的免疫球蛋白(Ig)重链基因进行扩增。发现急、慢性B-淋巴细胞白血病、慢粒急淋变的Ig重链基因重排出现异常。有的患者出现两种基因扩增产物。即使在骨髓抑制期和完全缓解期白血病细胞少于4％时,也可以检出异常重排的Ig重链基因。本研究对B-淋巴细胞白血病的诊断和治疗具有重要意义。     

急性髓系白血病表观遗传学的靶向治疗:第56届美国血液学会年会报道

急性髓系白血病(AML)是一组基因改变导致的造血干细胞克隆性增殖失调的异质性疾病.尽管根据细胞遗传学、分子遗传学和临床表现等特征进行分层治疗可以提高年轻AML患者的治疗效果,但是老年AML患者的总体生存率仍然较差.最近几年,新一代测序技术已经证实在大部分AML患者中编码参与转录表观调节蛋白的基因频发突变,这促使人们对AML患者的表观基因组有了新的认识,并使针对表观突变基因的靶向治疗成为可能.文章介绍第56届美国血液学会(ASH)年会关于AML常见的表观遗传学基因突变及其重要作用、表观突变基因潜在的治疗靶点和去甲基化药物的临床运用等.