RNA干扰抑制EGFR基因表达对子宫内膜癌细胞上皮间质转化的影响

目的 构建针对表皮生长因子受体(EGFR)的shRNA质粒载体,转染人子宫内膜癌Ishikawa细胞株,检测RNA干扰对抑制EGFR基因表达及子宫内膜癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响.方法 体外构建针对EGFR的shRNA质粒(pRNAT-EGFRshRNA),脂质体法转染Ishikawa细胞.实验设阴性对照组(未经任何转染)、pRNAT-EGFRneg组(空白质粒载体)、pRNAT-EGFR1组、pRNAT-EGFR2组和pRNAT-EGFR3组.采用实时荧光定量RT-PCR和Western blotting技术检测EGFR mRNA及蛋白的表达变化,并检测转染前后Ishikawa细胞中EMT相关指标E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达变化.结果 pRNAT-EGFR2组和pRNAT-EGFR3组细胞EGFR mRNA和蛋白的表达量均明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);pRNAT-EGFR1组EGFR mRNA和蛋白的表达量与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).RNA干扰抑制EGFR基因表达后,与阴性对照组比较,pRNAT-EGFR2组和pRNAT-EGFR3组Ishikawa细胞上皮标志物E-eadherin和α-catenin的mRNA及蛋白表达水平均上调(P＜0.05),间叶标志物N-cadherin和Vimentin的mRNA及蛋白表达水平则显著下调(P＜0.01).结论 抑制EGFR基因表达可部分逆转子宫内膜癌细胞EMT相关基因的表达.     

影响子宫内膜癌预后的肿瘤微环境研究进展

子宫内膜癌的手术-病理分期、病理类型、组织学分级、肌层浸润深度、淋巴转移等与预后密切相关。近来研究发现,肿瘤微环境中相关基质细胞的信号表达异常对肿瘤的增殖、侵袭转移具有重要影响,与疾病的预后密切相关。本     

C型凝集素受体和Toll样受体在子前期重度患者胎盘中的表达

目的分析子前期(PE)患者胎盘组织中C型凝集素样受体家族中DC-SIGN和甘露糖受体(MR)以及Toll样受体(TLR)家族中TLR-2和TLR-4的表达情况。方法采集PE重度患者(PE组,n=20)及正常妊娠妇女(NP组,n=20)的新鲜胎盘标本;采用免疫组织化学技术对胎盘组织中DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的表达进行定位分析;采用Western blotting法检测胎盘组织中的DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的蛋白表达。结果两组胎盘组织中均有DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的表达,主要位于胎盘合体滋养层细胞,在细胞滋养层细胞中亦有少量表达。PE组与NP组比较,胎盘组织TLR-4阳性细胞表达率明显升高(P<0.01);DC-SIGN、MR阳性细胞表达率明显降低(P<0.01,P<0.05),TLR-2阳性细胞表达率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论相对于正常晚期妊娠妇女,PE患者胎盘组织中C型凝集素受体DC-SIGN和MR表达减少,TLR-4过度表达;两种受体家族活化平衡失调可能是PE发病机制中的关键环节之一。     

补肾益气方激活ERK通路影响人早孕细胞滋养细胞生长

目的:研究补肾益气方对人早孕细胞滋养细胞增殖和早期凋亡的影响及其可能的信号转导通路。方法:体外分离培养人早孕细胞滋养细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞的增殖活力,流式细胞术增殖细胞核抗原(PCNA)表达检测细胞增殖、AnnexinⅤFITCPI双染色法检测细胞早期凋亡,Western blot法检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化。结果:与20%对照血清组比较,10%及20%补肾益气方含药血清作用48h,上调细胞滋养细胞增殖活力,促进PCNA表达、降低早期凋亡细胞百分率、诱导细胞ERK磷酸化,上述指标均呈量-效关系;ERK通路的特异性抑制剂U0126几乎完全抑制20%含药血清诱导的细胞ERK1/2活化,下调20%含药血清诱导的细胞增殖活力及PCNA蛋白表达、增加早期凋亡细胞百分率。结论:补肾益气方对人早孕细胞滋养细胞的生长具有促进作用,ERK1/2信号通路可能是补肾益气方促进细胞滋养细胞增殖、减少细胞凋亡的主要信号转导通路之一。     

错配修复基因与子宫内膜癌研究进展

错配修复（mismatch repair,MMR）基因在DNAMMR中发挥重要作用,其完整性对确保DNA复制的精确度和高保真度具有重要意义。MMR基因缺陷导致基因遗传不稳定,增加自发突变,造成广泛的肿瘤易感性,并促进肿瘤的形成。MMR基因缺陷增加子宫内膜癌的发病风险,与子宫内膜癌的发生发展、肿瘤耐药及其不良预后有关系。综述MMR基因及其在子宫内膜癌中的研究进展。     

血浆CMPF水平诊断妊娠期糖尿病的临床价值

目的探讨血浆3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)水平诊断妊娠期糖尿病(GDM)的临床价值。 方法选取2016年1月至2017年6月,于上海交通大学附属第六人民医院就诊的60例孕妇为研究对象,按照是否合并GDM,将其分为GDM组(n＝ 40)和对照组(n＝20)。所有孕妇于中孕期(孕龄为13～18孕周),进行生化指标检测;于孕龄为24～28孕周时,进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)检查,同时利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用技术,检测孕妇血浆CMPF水平。采用成组t检验,对2组孕妇孕龄为28孕周及新生儿足月时人体质量指数(BMI),以及高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、总蛋白、白蛋白、尿素、尿酸水平等指标进行比较。采用Mann-Whitney U检验,对2组孕妇的孕龄、孕次、产次、血浆CMPF水平、孕龄为18孕周时BMI及糖化血红蛋白(HbA1c)、糖化白蛋白(GA)、肌酐水平等指标进行比较。采用多因素非条件logistic回归分析,对孕妇发生GDM的影响因素进行分析。绘制血浆CMPF水平及孕龄为18、28孕周时BMI诊断GDM的受试者工作特征(ROC)曲线,以及这3个指标联合诊断与OGTT 0、1、2 h血糖浓度联合诊断GDM的ROC,并计算ROC曲线下面积(ROC-AUC)。本研究遵循的程序符合上海交通大学附属第六人民医院人体试验委员会制定的伦理学标准,并经过该伦理委员会批准(审批文号：2017-012),分组征得2组受试者知情同意,并与之签署临床研究知情同意书。 结果①2组孕妇的孕龄、孕次和产次等一般临床资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。②GDM组血浆CMPF值为522.0 ng/mL(326.9～989.3 ng/mL),显著高于对照组的280.2 ng/mL(177.8～466.6 ng/mL),2组比较,差异有统计学意义(U＝576.000,P＝0.006)。③GDM组孕妇孕龄为18、28孕周及新生儿足月时BMI与HbA1c分别为24.6 kg/m² (22.0～25.9 kg/m²)、(26.1±2.8) kg/m²、(27.6±2.9) kg/m²、5.4%(5.3%～5.6%),均显著高于对照组的22.8 kg/m² (20.1～23.6 kg/m²)、(24.5±2.6) kg/m²、(25.5±2.6) kg/m²、5.2%(5.0%～5.3%),并且差异均有统计学意义(U＝568.000,P＝0.002;t＝2.150,P＝0.001;t＝1.180,P＝0.036;U＝226.000,P<0.001)。GDM组孕妇GA值为11.6%(10.8%～12.8%),低于对照组的12.6%(12.2%～13.2%),并且差异亦有统计学意义(U＝248.000,P＝0.017)。④对孕妇发生GDM影响因素进行多因素非条件logistic回归分析的结果显示,血浆CMPF水平及孕龄为18、28孕周时BMI,均为孕妇发生GDM的独立影响因素(OR＝1.003,95%CI：1.000～1.005,P＝0.023;OR＝4.393,95%CI：1.675～11.525,P＝0.003;OR＝0.322,95%CI：0.130～0.798,P＝0.014)。⑤通过ROC曲线分析结果显示,血浆CMPF水平及孕龄为18、28孕周时BMI诊断GDM的ROC-AUC分别为0.703(95%CI：0.554～0.852,P＝0.014),0.741(95%CI：0.605～0.876,P＝0.004)及0.672(95%CI：0.523～0.821,P＝0.039)。这3个指标联合诊断GDM的ROC-AUC为0.847(95%CI：0.741～0.952,P<0.001),与OGTT 0、1、2 h血糖浓度联合诊断GDM的ROC-AUC[0.983(95%CI：0.957～1.000,P<0.001)]比较,差异无统计学意义(U＝9.000,P＝0.100)。根据约登指数最大原则,血浆CMPF水平及孕龄为18、28孕周时BMI诊断GDM的最佳临界值分别为397.2 ng/mL、23.9 kg/m²、26.2 kg/m²,此时其诊断GDM的敏感度分别为65.6%、59.4%、53.1%,特异度分别为75.0%、90.0%、80.0%。 结论GDM孕妇孕龄为24～28孕周时血浆CMPF水平联合孕龄为18、28孕周时BMI,对GDM诊断具有较好临床价值。     

绝经后宫腔积液的临床探讨

目的探讨宫腔镜在诊断和治疗绝经后宫腔积液方面的作用。方法收集经彩色阴道多普勒超声（transvaginal ultrasonography）提示为宫腔积液而无阴道流血的302例患者,同期另17例因绝经后取环等原因而超声未提示宫腔积液的患者的临床资料,比较超声检查及宫腔镜检查结果与术后病理诊断,分析宫腔积液、内膜厚度与宫腔疾病的关系。结果 TVS对宫腔积液检查的敏感性为97.69%（296/303）,特异性为62.5%（10/16）。阳性预测值98.01%（296/302）,阴性预测值58.82%（10/17）,漏诊率为41.18%（7/17）;宫腔积液量的多少与病理的良恶性无关（P=0.53）;子宫内膜的厚度与病理的良恶性有关,子宫内膜越厚,病理为恶性的几率就越高（P〈0.001）。结论绝经后宫腔积液,主要是子宫内膜炎造成。应该根据患者临床症状,结合超声检查,根据内膜厚度全面综合考虑,必要时宫腔镜检查,排除子宫内膜病变,提高早期子宫内膜癌的诊断率。     

LARVH与RAH治疗妇科恶性肿瘤临床疗效的Meta分析

目的:通过Meta分析综合评价腹腔镜辅助阴式根治性子宫切除术(LARVH)与经腹根治性子宫切除术(RAH)治疗妇科恶性肿瘤的临床疗效.方法:电子检索Cochrane Library、PubMed、Ovid、EMBASE、中国知网数据库(CNKI)、万方全文数据库、维普中文科技期刊数据库、中国生物医学文献数据库,并辅以手工检索.检索时间截至2012年6月,收集LARVH与RAH临床疗效比较的随机对照试验(RCT)或设计良好的回顾性临床对照试验(CCT).由两名研究者按Cochrane系统评价方法提取有效数据进行Meta分析.结果:共纳入7篇RCT,11篇CCT,共计4046例患者,其中LARVH组2280例,RAH组1766例.结果显示:LARVH与RAH相比,其术中失血量少(MD=-186.00,95％ CI-292.48～-79.52,P=0.0006)、住院天数短(MD=-3.37,95％ CI-4.23～-2.50,P=0.0000)、术后并发症发生率低(RR =0.60,95％CI0.46—0.79,P=0.0003),但术中并发症发生率高(RR =1.45,95％CI 1.15 ～ 1.82,P=0.0010);而在手术时间、淋巴结活检数、术后总体复发率方面比较,差异均无统计学意义(P＞0.01).结论:运用LARVH治疗妇科恶性肿瘤在减少住院时间、降低手术失血量和术后并发症方面比RAH具有一定优势,但应注意降低术中并发症的发生.     

壳聚糖挂膜修饰聚丙烯网片与兔脂肪源性间充质细胞的黏附性研究

目的 研究壳聚糖挂膜修饰聚丙烯网片的技术参数及其与兔脂肪源性间充质细胞(ADSCs)的黏附性.方法 分别称取1、1.25和1.5g壳聚糖加2％的乙酸溶液、5％的戊二醛和50％的正庚烷溶解后,得到质量分数分别为2.0％、2.5％和3.0％的壳聚精铸膜液.将聚丙烯网片在壳聚糖铸膜液中反复浸泡、晾干后得到壳聚糖挂膜修饰的聚丙烯网片.将兔ADSCs接种于壳聚糖挂膜的聚丙烯网片上,培养24 h后观察细胞与材料的黏附性.结果 三种浓度的壳聚糖铸膜液挂膜修饰的聚丙烯网片柔软性均较挂膜前下降,壳聚糖铸膜液浓度越高,聚丙烯网片柔软性越低,而且3.0％铸膜液修饰的聚丙烯网片出现涂敷效果不均匀的现象.兔ADSCs在壳聚糖挂膜修饰的聚丙烯网片材料上生长良好.兔ADSCs与未挂膜的聚丙烯网片共培养24h后,表面未见细胞生长.结论 2.5％壳聚糖铸膜液为挂膜修饰聚丙烯网片的理想浓度.壳聚糖挂膜修饰的聚丙烯网片与兔ADSCs有良好的黏附性.