黑龙江立克次体感染对小鼠脾脏免疫相关基因转录的影响

目的 分析黑龙江立克次体感染小鼠脾脏免疫相关基因的转录变化,筛选影响黑龙江立克次体感染致病进程的关键靶标.方法 取20只雌性C3H/HeN小鼠,随机分为未感染组(0 hpi)、感染3 h组(3 hpi)、感染3 d组(3 dpi)及感染6 d组(6 dpi),每组5只,采用尾静脉注射法感染黑龙江立克次体,在4个时相点解...     

我国Q热立克次体菌株23S rRNA基因插入顺序的分析

目的 对我国伯氏考克斯体分离株的２３Ｓ ｒＲＮＡ基因插入片段（２３Ｓ ＩＶＳ）作核酸序列分析。方法 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增７株Ｃｂ中国分离株和２株外国参考株的２３Ｓ ＩＶＳ，用双脱氧核苷酸法对扩增产物进行测序。3     

查菲埃立克体28kD表面抗原基因的克隆与表达

目的 克隆和高效表达查菲埃立克体（Ehrlichia chaffensis)28kD表面抗原基因。方法 依据书籍的查菲埃立克体28kD表面抗原基因设计引物，用PCR从查菲埃立克体基因组中克隆该基因片段（531bp），再将该基因片段定向插入表达载体（PinPoint^TMXa-3）中，然后将该重组质粒转化E.coli JM109细胞。结果 经SDS-PAGE分析，转化子所产生的融合蛋白分子量为32kD，与预期的结果相一致；在37℃用0.1Mn IPTG诱导转化子12h，融合蛋白量达到细菌总蛋白量的35.8%。结论 查菲埃立克体28～kD表面抗原基因在E.coli JM109细胞内得到高效率表达，从而为该抗原的大量制备奠定了基础。     

临床依赖利福平分支杆菌的初步研究

我们在实验中发现有的分支杆菌在含利福平 (Ｒ)培养基中菌落生长粗大旺盛 ,没有Ｒ反而生长不良。即此类分支杆菌不但不能被Ｒ杀死 ,Ｒ反而促进其生长。我们把这类菌称为依赖利福平分支杆菌[1] (依Ｒ菌 )。为了进一步阐明该类菌的特点 ,我们就其菌株的依Ｒ程度、菌落及菌体的形态特点等进行了研究 ,以期为依Ｒ菌的定义和鉴定提供依据。材料与方法　实验菌株从我院肺结核病人的痰标本分离。质控菌株 (ＷＨＯ980 6敏感株、980 9耐Ｒ株 )和Ｒ原药粉由卫生部结核病控制中心参比实验室提供 ,噻吩 2 羧酸肼(ＴＣＨ)药粉由北京结核病控制研究所中…     

我国埃立克体的研究进展

埃立克体(Ehrlichiae)是一类严格细胞内寄生的革兰氏阴性菌,主要寄生在单核细胞、粒细胞、或血小板内,引起动物和人的感染——埃立克体病(Ehrlichiosis)。埃立克体分为3个基因群,除腺热埃立克体群外,犬埃立克体群和嗜吞噬埃立克体群均是由蜱传播。长期以来人们认为蜱传埃立克体仅感染动物,而不感染人。然而1987年美国首次报     

普氏立克次体120kDa表面抗原N段基因的克隆与表达

目的　克隆和表达普氏立克次体 (Rickettsiaprowazekii) 12 0kDa外膜蛋白N段基因。 方法　采用PCR方法 ,从普氏立克次体基因组中扩增其 12 0kDa表面抗原N段基因片段 ,将其与原核表达载体 pQE30连接 ,构建重组质粒 pQE30 /2 6kDa,将重组质粒转入大肠杆菌 ,用IPTG诱导大肠杆菌内的目的基因表达。结果　获得长为 717bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知普氏立克次体 12 0kDa表面抗原基因一致 ;SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 2 6 .3kDa处有一表达带 ;免疫印迹分析证明它能与普氏立克次体免疫兔血清反应 ;经双波长薄层扫描分析 ,目的蛋白占全菌体蛋白的 2 0 % ;提取表达菌体包涵体检查 ,证明目的蛋白主要存在于包涵体中。结论　普氏立克次体 12 0kDa表面抗原N段基因在大肠杆菌中获得了高效表达 ,该重组蛋白具有良好的免疫反应性。     

氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗的免疫保护性评价

目的动物实验评价采用国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗(CMRV)的免疫保护性。方法将三批小量制备的CMRV和灭活贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)分别用1μg、10μg、100μg三个剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,4周后用初次免疫的一半剂量腹腔注射加强免疫1次,2周后用107的贝氏柯克斯体强毒株腹腔注射感染免疫小鼠,感染第7d活杀小鼠、摘取小鼠脾脏,用荧光定量PCR检测小鼠脾脏组织的贝氏柯克斯体。结果所有Q热疫苗免疫组的小鼠脾脏荷菌量均显著少于非免疫组,100μg免疫组的荷菌量显著低于10μg免疫组,10μg疫苗组显著低于1μg免疫组。每批CMRV免疫组与相同剂量WCV免疫组之间的贝氏柯克斯体含量无显著差异。结论国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗具有与灭活Q热疫苗一样良好的抗贝氏柯克斯体感染的免疫保护性。     

贝氏柯克斯体5种重组表面蛋白抗原包被酶联免疫吸附试验的特异性和敏感性分析

目的 使用贝氏柯克斯体5种重组表面蛋白作为包被抗原的酶联免疫吸附试验用于血清学检测的特异性和敏感性分析。方法 本研究建立由贝氏柯克斯体的Com1、GroEL、Mip、OmpH、RplL重组表面蛋白抗原分别包被的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,然后分别检测贝氏柯克斯体实验感染小鼠血清和Q热患者血清中IgG特异性抗体。结果 8份贝氏柯克斯体感染小鼠血清中除1份血清与RplL反应为阴性外其它均为阳性;11份Q热患者血清中除1份血清与RplL、1份血清与OmpH反应为阴性外,其它血清反应均为阳性。将这5种重组蛋白分别与莫氏立克次体、黑龙江立克次体、恙虫病东方体实验感染小鼠血清反应,除1份黑龙江立克次体感染小鼠血清与GroEL反应为阳性外,其它血清反应均为阴性。另外,Com1对斑疹伤寒、斑点热、恙虫病患者血清的阳性反应率平均为22.2%,GroEL为25.0%,Mip为25.0%,OmpH为25.0%,RplL为13.9%。结论 这些结果证明这5种重组蛋白抗原均可被贝氏柯克斯体感染血清所识别。所建立的ELISA方法具有良好特异性和敏感性,可用作Q热血清学诊断。     

实时荧光定量PCR检测汉赛巴通体

目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测汉赛巴通体的实时荧光定量PCR方法。方法根据汉赛巴通体特异的16S-23S rRNA间隔区序列设计引物和探针,以克隆的16S～23S rRNA间隔区基因片段作DNA模板,在荧光定量PCR检测仪(ABI 7900HT)上建立实时荧光定量检测方法,对所建立的方法分别进行敏感性、特异性及重复性分析,并且对模拟标本进行检测。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(C_(?))与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.997);与普通PCR相比较,荧光定量PCR检测的灵敏度是其1000倍。用荧光定量PCR检测其他相关立克次体和细菌DNA样本,除军团菌检出微弱信号(2个拷贝)外,其余检出结果均为0;对重复性进行了评价,批内和批间的变异系数在0.2%～1.9%之间。用荧光定量PCR检测汉赛巴通体感染的小鼠血标本,在感染后第2天、第3天、第5天,检出少量的汉赛巴通体,在感染后的第1天和第2天从脾脏样本中检出大量的汉赛巴通体。结论检测汉赛巴通体实时荧光定量PCR方法具有高度特异性和高敏感性以及良好的重复性,可用于快速检测各种样本中的微量汉赛巴通体以及作为汉赛巴通体感染的实验室诊断。     

立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立

目的采用TaqMan-MGB探针建立立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测方法.方法依据立氏立克次体外膜蛋白B基因序列设计引物和探针,以克隆的ompB基因片段为DNA模板,在ABI 7900型荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量PCR检测方法.结果建立的定量标准曲线Ct值与模板拷贝数呈线性关系（R2=0.996）,最低检测浓度为5拷贝/μl;用荧光定量PCR方法检测其他相关立克次体和常见非立克次体病原菌,检出结果均为阴性.用该方法检测立氏立克次体感染的豚鼠血液标本、小鼠脾脏标本及细胞培养标本,检测的结果与立氏立克次体感染相关.结论研究建立的检测立氏立克次体实时荧光定量PCR方法具有高特异性和高敏感性,适用于快速检测各种样本中的立氏立克次体和立氏立克次体感染早期的实验室诊断.