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0引言在病毒感染真核细胞的过程中,干扰素(IFN)诱导细胞的抗病毒机制是机体防御感染的第一道防线.在病毒感染过程中,分泌的干扰素主要用于保护邻近细胞免受感染,限制病毒扩散.Ⅰ型IFN由IFN-α、IFN-β两种亚型组成,IFN-α主要由白细胞分泌产生,IFN-β 相似文献
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目的 克隆人类乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白(pre-S1)反式激活新型靶基因PS1TP5.构建其原核表达载体,并诱导其在大肠埃希菌中表达.方法 以HBV前-S1表达质粒pcDNA3.1(-)-preS1转染HepG2细胞,空载体pcDNA3.1(-)作为平行对照,提取mRNA进行抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)技术分析,结合生物信息学(bioinformatics)技术筛选得到人类新基因PS1TP5.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以提取的HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得PS1TP5基因片段,选用pGEM-T载体进行TA克隆,通过PCR、限制性酶切分析及测序进行鉴定,再将其亚克隆到原核表达载体pET-32a( )中,转化进BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导获得了PS1TP5重组蛋白的表达,表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分析,考马斯亮蓝染色,以抗-His的单克隆抗体进行Western blotting免疫印迹分析证实表达蛋白的特异性.结果 成功扩增出PS1TP5基因.并将其插入pET-32a( )原核表达载体,经BL21(DE3)受体菌转化、IPTG诱导、SDS-PAGE分析获得了PS1TP5重组蛋白的表达,Western blotting证实了重组蛋白表达的特异性.结论 应用SSH、RT-PCR与生物信息学技术筛选克隆出PS1TP5基因,构建了pET-32a( )-PS1TP5原核表达载体,并利用大肠埃希菌原核表达系统成功获得了pET-32a( )-PS1TP5重组蛋白的表达.为进一步研究PS1TP5免疫原性及慢性乙型肝炎发病机制创造了条件. 相似文献
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目的 了解桐庐县全科医生对慢性阻塞性肺疾病(COPD)防治知识认知现状,为精准化提升全科医生COPD防治能力提供理论依据。方法 2020年10月1—5日采用问卷调查形式,对浙江桐庐县4家县级医院和13家乡镇卫生院、社区卫生服务中心全科医生112人进行COPD防治知识调查。结果 全科医生中,接受过COPD相关知识培训者占78.3%(83/112),知道COPD诊治指南者占50.9%(54/112),知道COPD的诊断标准者占74.5%(79/112),知道COPD分为稳定期和急性发作期者仅占19.8%(21/112),知道稳定期COPD患者需要长期治疗者占81.1%(86/112),会开长处方者占81.1%(86/112),认为治疗COPD的理论知识够用者占26.4%(28/112),知道家庭氧疗患者每天吸氧时间需要15小时以上者8.5%(9/112)。结论 桐庐县全科医生对COPD的诊治认知、管理水平仍需进一步加强,建议采用“全专联合-上下联动”新模式、基层医院逐步配齐相应药物等。 相似文献
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丙型肝炎病毒包膜蛋白E2抗原模拟表位的筛选和鉴定 总被引:2,自引:2,他引:0
目的:筛选丙肝病毒(HCV)包膜蛋白(E2)特异性噬菌体模拟表位。方法:以抗-HCV E2的单克隆抗体作为固相筛选分子,对噬菌体同七肽库进行5轮“吸附-洗脱-扩增“的筛选过程,随机挑取50个克隆,经酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定、交叉反应以及竞争抑制性实验,最后对所选克隆进行DNA序列分析,以确定HCV E2抗原的模拟表位。结果:经噬菌体富集后,得到12个阳性克隆,确定氨基酸序列XXPXYXW为HCV E2的模拟表位。结论:用噬菌体七肽库成功筛选得到HCV E2的模拟表位,为开展用HCV模拟表位探索HCV的防治研究创造了条件。 相似文献
78.
乙型肝炎病毒基因组准种与变异特点的研究 总被引:49,自引:7,他引:42
探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因组异质性及其生物学意义。以已知HBV基因序列为依据,设计特异性多聚酶链反应(PCR)引物,自2例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBV基因组序列,克隆入pGEM Teasy质粒,随机挑选克隆进行DNA测序并加以比较。测序结果发现,来源不同的5株HBV全基因组核苷酸序列的一致率为93.6%,不同克隆的4个开放读码框架长度有明显区别,氨基酸序列中存有移框、缺失、替换等多种变异类型。说明来源于同一患者的HBV基因组序列之间存在有较明显的变异现象,在患者体内构成了准种群。 相似文献
79.
乙型肝炎病毒序列准种个体化特征的研究 总被引:14,自引:2,他引:12
以乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶(P)逆转录酶(RT)区及表面抗原(HBsAg)主蛋白、e抗原(HBeAg)氨基酸序列异质性来探讨HBV准种群在感染个体中的变异特点。应用多聚酶链反应(PCR)方法自8例慢性HBV患者血清中扩增靶基因,克隆入T载体,随机挑选27株克隆测序,将获得基因的推断氨基酸序列进行比较后发现:病毒结构/非结构蛋白氨基酸序列存在广泛的变异现象,替换突变表现出一定的个体特异性,其结果是导致HBV在特定的患者体内可能存在特征性的变异。本研究提示HBV在患者体内的蛋白序列多样性是乙型肝炎慢性化的一个重要原因。 相似文献
80.
丙型肝炎病毒转基因小鼠模型的研究 总被引:9,自引:9,他引:0
0引言丙型肝炎病毒(HCV)是1989年美国Chooetal[1]利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分离鉴定的一种新型肝炎病毒,属黄病毒科丙型肝炎病毒属.其基因组为单股正链RNA,长9.4kb左右,两侧分别为5’和3’非编码区(NCR),中间为单一的开放读码框(ORF),可分为核壳蛋白区(C区)、包膜蛋白区(E区)和非结构蛋白区(NS区).其中,5’NCR区变异较小,内含内部核糖体进入位点(IRES),在病毒蛋白的翻译中有重要的调控功能.C区与E1/E2区构成结构基因,分别编码衣壳蛋白和包膜糖蛋白,内含重要的中和抗原表位与细胞免疫抗原表位,与HCV的免疫致病及防… 相似文献