丙型肝炎病毒与PKR信号转导系统

0引言在病毒感染真核细胞的过程中,干扰素(IFN)诱导细胞的抗病毒机制是机体防御感染的第一道防线.在病毒感染过程中,分泌的干扰素主要用于保护邻近细胞免受感染,限制病毒扩散.Ⅰ型IFN由IFN-α、IFN-β两种亚型组成,IFN-α主要由白细胞分泌产生,IFN-β     

乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活基因5的筛选克隆与重组蛋白诱导表达

目的 克隆人类乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白(pre-S1)反式激活新型靶基因PS1TP5.构建其原核表达载体,并诱导其在大肠埃希菌中表达.方法 以HBV前-S1表达质粒pcDNA3.1(-)-preS1转染HepG2细胞,空载体pcDNA3.1(-)作为平行对照,提取mRNA进行抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)技术分析,结合生物信息学(bioinformatics)技术筛选得到人类新基因PS1TP5.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以提取的HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得PS1TP5基因片段,选用pGEM-T载体进行TA克隆,通过PCR、限制性酶切分析及测序进行鉴定,再将其亚克隆到原核表达载体pET-32a( )中,转化进BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导获得了PS1TP5重组蛋白的表达,表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分析,考马斯亮蓝染色,以抗-His的单克隆抗体进行Western blotting免疫印迹分析证实表达蛋白的特异性.结果 成功扩增出PS1TP5基因.并将其插入pET-32a( )原核表达载体,经BL21(DE3)受体菌转化、IPTG诱导、SDS-PAGE分析获得了PS1TP5重组蛋白的表达,Western blotting证实了重组蛋白表达的特异性.结论 应用SSH、RT-PCR与生物信息学技术筛选克隆出PS1TP5基因,构建了pET-32a( )-PS1TP5原核表达载体,并利用大肠埃希菌原核表达系统成功获得了pET-32a( )-PS1TP5重组蛋白的表达.为进一步研究PS1TP5免疫原性及慢性乙型肝炎发病机制创造了条件.     

桐庐县2020年全科医生对慢性阻塞性肺疾病防治及管理水平的调查

目的 了解桐庐县全科医生对慢性阻塞性肺疾病（COPD）防治知识认知现状,为精准化提升全科医生COPD防治能力提供理论依据。方法 2020年10月1—5日采用问卷调查形式,对浙江桐庐县4家县级医院和13家乡镇卫生院、社区卫生服务中心全科医生112人进行COPD防治知识调查。结果 全科医生中,接受过COPD相关知识培训者占78.3%(83/112),知道COPD诊治指南者占50.9%(54/112),知道COPD的诊断标准者占74.5%(79/112),知道COPD分为稳定期和急性发作期者仅占19.8%(21/112),知道稳定期COPD患者需要长期治疗者占81.1%(86/112),会开长处方者占81.1%(86/112),认为治疗COPD的理论知识够用者占26.4%(28/112),知道家庭氧疗患者每天吸氧时间需要15小时以上者8.5%(9/112)。结论 桐庐县全科医生对COPD的诊治认知、管理水平仍需进一步加强,建议采用“全专联合-上下联动”新模式、基层医院逐步配齐相应药物等。     

辽宁省部分地区人、犬、鼠弓形体感染调查

1988年我们对本省部分地区人群、动物弓形体病感染情况进行了血清学调查,现将调查结果报告如下。     

精氨琥珀酸裂解酶上调乙型肝炎病毒表面抗原启动子Ⅰ的研究

目的了解精氨琥珀酸裂解酶(ASL)与乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原启动子-Ⅰ(SpⅠ)的关系，研究精氨琥珀酸裂解酶与SPⅠ在HBV致病的分子生物学机制中的作用。方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增精氨琥珀酸裂解酶编码基因。以T-A克隆法，将ASL基因片段连人载体pGEM—T。将获得的质粒pGEM-T-ASL，与报告质粒pcDNA3．1(-)分别用KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后构建ASL表达载体pcDNA3．1(-)-ASL，将重组表达载体pcDNA3．1(-)-ASL和pCAT3-SpⅠ瞬时转染HepG2细胞，同时转染pCAT3-basic入HepG2细胞，作为阴性对照，48h后收获细胞。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性，以了解ASL对SpⅠ转录活性的调节作用。结果构建的真核表达载体pcDNA3．1(-)-ASL经过酶切鉴定和测序证实正确。在真核表达载体pcDNA3．1(-)-ASL和pCAT3-SpⅠ共转染的HepG2细胞中，CAT表达活性是CAT3空载体的3．3倍，是pCAT3-SpⅠ的1．45倍。结论精氨琥珀酸裂解酶可以上调SpⅠ启动子的活性，促进表面抗原基因的表达。     

泼尼松联合阿奇霉素序贯疗法治疗儿童重症肺炎支原体肺炎的疗效及对血清TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白和下游炎性因子水平的影响

目的 探讨泼尼松联合阿奇霉素序贯疗法治疗儿童重症肺炎支原体肺炎的疗效及对血清Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白和下游炎性因子水平的影响。方法 招募2019年1月至2022年6月唐山市妇幼保健院收治的儿童重症肺炎支原体肺炎患者120例,采用随机数字表法将其分为对照组(采用阿奇霉素治疗,60例)和观察组(采用泼尼松联合阿奇霉素治疗,60例)。治疗4周后,比较两组治疗效果、临床肺部感染量表(CIPS)评分、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白以及下游炎性因子的水平。结果 观察组患者的体温恢复时间、咳嗽缓解时间、咳痰缓解时间、喘息缓解时间、肺部啰音消失时间较对照组更快,住院时间更短,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组的体温、白细胞计数、气道分泌物、氧合情况、胸部X射线、痰培养等CIPS项目评分以及总分均较治疗前降低,且观察组评分较对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组TLR4、MyD88、NF-κB、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)水...     

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2抗原模拟表位的筛选和鉴定

目的：筛选丙肝病毒（HCV）包膜蛋白（E2）特异性噬菌体模拟表位。方法：以抗－HCV E2的单克隆抗体作为固相筛选分子，对噬菌体同七肽库进行5轮“吸附－洗脱－扩增“的筛选过程，随机挑取50个克隆，经酶联免疫吸附法（ELISA）鉴定、交叉反应以及竞争抑制性实验，最后对所选克隆进行DNA序列分析，以确定HCV E2抗原的模拟表位。结果：经噬菌体富集后，得到12个阳性克隆，确定氨基酸序列XXPXYXW为HCV E2的模拟表位。结论：用噬菌体七肽库成功筛选得到HCV E2的模拟表位，为开展用HCV模拟表位探索HCV的防治研究创造了条件。     

乙型肝炎病毒基因组准种与变异特点的研究

探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因组异质性及其生物学意义。以已知HBV基因序列为依据，设计特异性多聚酶链反应（PCR）引物，自2例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBV基因组序列，克隆入pGEM Teasy质粒，随机挑选克隆进行DNA测序并加以比较。测序结果发现，来源不同的5株HBV全基因组核苷酸序列的一致率为93．6％，不同克隆的4个开放读码框架长度有明显区别，氨基酸序列中存有移框、缺失、替换等多种变异类型。说明来源于同一患者的HBV基因组序列之间存在有较明显的变异现象，在患者体内构成了准种群。