丙肝病毒非结构蛋白基因NS5A的克隆化

目的克隆化非结构蛋白基因NS5A。方法根据NCBI的Genbank上公布的HCV-1b型基因序列,设计PCR产物为NS5A的特异性引物,以HCV-1b型RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增出1341 bp片段,连接至pGEM-T载体并送测序,测序结果表明NS5A已克隆成功。结果成功克隆了丙肝病毒非结构蛋白基因NS5A。结论NS5A是一种典型的病毒基因组编码的多功能蛋白,NS5A的克隆化为进一步研究NS5A的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础。     

丙型肝炎病毒核心蛋白core与其结合蛋白HCBP6在哺乳动物细胞中的相互作用

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白core与其结合蛋白HCBP6在哺乳动物细胞中的相互作用。方法分别扩增HCV核心蛋白core及其结合蛋白HCBP6的cDNA片段,克隆入pGEM-T载体。测序正确后应用双杂交技术把目的片段分别插入哺乳动物细胞双杂交系统的表达质粒pBIND和pACT中构建重组载体。将构建的pBIND-core和pACT-HCBP6重组载体和报告质粒pG5luc共转染HepG2细胞,并设背景对照组(pBIND pACT)、阳性对照组(pBIND-Myod pACT-Id)、2个阴性对照组(pBIND-core pACT、pBIND pACT-HCBP6)和空白对照组。采用Dual-荧光检测系统和TurnerBiosystemsVeritas微孔板化学发光检测仪检测荧虫素酶活性。结果成功构建重组载体pBIND-core和pACT-HCBP6,共转染HepG2细胞之后,其荧虫素酶活性与海肾素酶活性的比值与各对照组相比有统计学差异(P≤0·05)。结论HCV核心蛋白core与其结合蛋白HCBP6在肝癌细胞系中确有一定的相互作用,为进一步阐明HCV核心蛋白在细胞凋亡及细胞恶变中的作用机制提供了新的思路。