肿瘤标志物SP70在宣威肺癌中的临床应用研究

目的肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,在中国,云南省宣威地区人群以肺癌高发、恶性程度高、预后极差等特点引起了广泛的关注和研究。在对于宣威肺癌的研究中,一直缺乏特异性高、与病情变化相关性高、检测方法简便快速的肿瘤标志物。肿瘤特异性蛋白70(tumor specific protein 70,SP70)是单克隆抗体NJ001识别的特异性抗原,在非小细胞肺癌组织上的表达率为80%~90%,在肿瘤细胞的恶性增殖和侵袭转移中发挥着极其重要的作用。探索肿瘤标志物SP70与宣威肺癌相关性,有助于此类癌症的早期诊断、动态监测以辅助判断病情进展或治疗效果。因此本文就肿瘤标志物SP70在宣威肺癌诊断中的应用现状,对其特点进行分析,从宣威肺癌的疾病背景、肿瘤标志物SP70与宣威肺癌的相关性及检测方法等方面出发,探究肿瘤标志物SP70在宣威肺癌诊断和治疗中的应用,以期为宣威肺癌的早期诊断和预后判断提供新的思路。     

丙型肝炎病毒F蛋白反式激活基因2的表达纯化及多克隆抗体制备

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白反式激活基因2(FTP2)的原核表达载体并诱导其表达,制备多克隆抗体并探讨其在临床病理组织中表达的意义。方法通过PCR获得HCVFTP2基因,将其克隆至原核表达载体pET32a( )上,构建重组表达载体,在大肠埃希菌BL21中诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blotting验证后进行大量表达并纯化。将纯化的重组蛋白免疫家兔获得多克隆抗体,并将此抗体作为诊断试剂观察其在正常肝组织和临床病理组织中的表达情况。结果以pET32a( )-FTP2表达载体转化BL21菌后,经IPTG诱导,成功获得大量重组蛋白,分子量约为25kD。将此重组蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体,经抗体间接ELISA检测证明,多克隆抗体效价>1:128000,免疫组化显示多克隆抗体能够与丙型肝炎、肝硬化、肝细胞癌等临床病理组织产生FTP2抗原反应。结论成功表达了HCV的FTP2蛋白并制备了其多克隆抗体,证实FTP2与丙型肝炎、肝硬化的发病机制密切相关。     

微小RNA技术与病毒性肝炎研究

病毒性肝炎严重危害人民的健康,尤其乙型和丙型病毒性肝炎,相当比例感染者可发生慢性化,严重可发展为肝硬化、肝癌.免疫损伤是慢性乙型和丙型病毒性肝炎的主要发病机制,但具体机制尚不十分清楚,至今尚未完全阐明.由于微小RNA(microRNA)是普遍存在的转录后调节微小RNA,又由于慢性乙型和丙型肝炎病毒感染后在细胞内长期存在,这就为机体和病毒本身产生microRNAs提供有力条件,这样宿主与病毒microRNAs,病毒与宿主microRNAs之间必然会存在相互的联系,推测对病毒性肝炎的慢性化,肝癌的发生等都会起到一定的作用.     

护士的心理素质

在护理工作中,护士除了必须具备良好的政治素质、职业素质和科学素质外,还必须具备良好的心理素质可直接影响着病人的心身健康和心身护理的效应,它对心身疾病的效果起着重要的作用。 一、护士必须具备的心理素质 随着当前社会的医学模式——生物、心理、社会的转变,要求护士不但完成功能制护理工作外,还要根据病人的生理、心理和疾病     

丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白2在大肠埃希菌中表达及生物信息学分析

目的:构建丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白2(NS5ATP2)原核表达载体并诱导其在大肠埃希菌中表达.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以从HepG2细胞提取的mRNA为模板,扩增NS5ATP2目的基因片段,T-A克隆连接到pGEM-T载体,测序正确后将目的片段插入原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导NS5ATP2融合蛋白的表达,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot免疫印迹分析和证实融合蛋白的表达;以生物信息学方法对蛋白结构和功能进行预测.结果:利用RT-PCR 扩增获得NS5ATP2基因片段,IPTG诱导BL21宿主菌成功表达了NS5ATP2,经SDS-PAGE和 Western blot分析得到证实;生物信息学预测结果显示此蛋白富含螺旋结构,为非跨膜蛋白,无信号肽.结论:利用大肠埃希菌BL21(DE3)能够成功表达NS5ATP2蛋白,为今后研究NS5ATP2蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了的基础.     

应用基因表达谱芯片技术筛选HCV p7蛋白反式调节基因

目的应用基因芯片技术对pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)-p7分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析,筛选能被HCV p7蛋白反式调节的靶基因,研究p7蛋白的生物学功能。方法以含有HCV全基因组的pBRTM质粒作为模板,应用聚合酶链反应(PCR)扩增p7蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)-p7。以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较。结果构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误,提取高质量的总mRNA并逆转录成cDNA,进行DNA芯片技术分析。在1152个基因表达谱的筛选中,有1个基因表达水平显著上调,22个基因表达水平显著下调。结论 HCV p7蛋白是一种反式调节因子,p7基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响。     

乙型肝炎病毒B和C基因型全基因组的克隆与真核细胞表达

目的 构建B和C基因型重组HBV表达载体,检测其在Huh7细胞内的DNA复制和HBsAg、HBeAg的表达.方法 扩增B和C基因型HBV全基因组,并将其连接于真核表达载体pHY106,将这2个载体分别转染Huh7细胞,以pHY106空载体转染作对照.Southern印迹法检测转染72 h后HBV DNA的复制,实时定量PCR检测转染后24、48、72、96和120 h Huh7细胞内HBV DNA水平,ELISA检测转染后24、48、72、96和120 h细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg的表达.结果 成功构建了B和C基因型HBV表达载体.转染Huh7细胞后72 h,Southern印迹法检测到细胞内HBV核心颗粒内的HBV复制中间体,包括松弛环状DNA、双链DNA和单链DNA.实时定量PCR检测发现病毒DNA复制水平可达8 lg拷贝/mL、ELISA结果显示HBsAg和HBeAg的表达于转染后72 h达高峰,然后逐渐下降.结论 成功构建B和C基因型重组HBV真核表达载体,并能在Huh7细胞内高水平复制和表达,为进一步研究HBV的结构与功能、基因表达与调控,以及抗HBV药物的筛选等提供了良好的平台.     

老年急性胆囊炎治疗体会

老年急性胆囊炎治疗体会黑河市第二人民医院（黑龙江１６４３００）鲍春明，于洪源我院外科近几年来应用中西医结合非手术治疗老年人急性胆囊炎７７例，疗效满意，现分析讨论如下。１临床资料１．１性别与年龄本组７８例，男４５例，女３３例，年龄在６０～６５岁４６例，...     

丙型肝炎病毒核心蛋白与其结合蛋白HCBP12在HepG2细胞中的相互作用

目的：使用哺乳动物双杂交系统探讨HCV—core与HCBP12在人肝癌细胞HepG2细胞中的相互作用．方法：PCR分别扩增含HCV core及HCBP12的cDNA片段，克隆人pGEM—T载体，经测序正确后再分别克隆入哺乳动物双杂交的表达质粒PBIND和PACT中，并转染HepG2细胞，48h后检测细胞中报告基因luciferase activity的表达水平．结果：Dual-Luciferase Activety系统检测显示PBIND-core与PACT-HCBP12实验组萤火虫荧光与海肾素荧光的比值明显高于其他阴性对照组，但低于阳性对照组．结论：哺乳动物双杂交系统证实HCV核心蛋白与其结合蛋白HCBP12在人肝癌细胞系中HepG2中有一定的相互作用，为进一步研究HCV-core和HCBP12的功能奠定基础．