ABCG2在白血病细胞中的表达及其意义

目的探讨三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)在白血病细胞膜上的表达规律及其意义.方法应用CD45SSC参数设门多色流式细胞术分析61例白血病患者白血病细胞膜ABCG2及其他白血病细胞相关抗原的表达情况.结果61例急慢性白血病患者的白血病细胞ABCG2表达阳性率为36.07%.ABCG2表达阳性率,急性白血病(AL)患者[34.48%(20/58)]与慢性白血病(CL)患者[66.67%(2/3)];儿童患者[26.09%(6/23)]与成人患者[42.11%(16/38)]差别均无显著性意义(均P＞0.05);急性髓细胞性白血病(AML)患者[46.67%(14/30)]高于急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者[16.67%(4/24)(P＜0.05)];AML患儿[55.56%(5/9)]也高于ALL患儿[7.14%(1/14)(P＜0.05)].ABCG2与另一耐药蛋白P糖蛋白(P-gp)及其他细胞表面抗原的表达均无关(r=0.152、-0.075、-0.063、0.026、-0.149,均P＞0.05),与髓系标志CD13的表达有关(r=0.307,P＜0.05).结论ABCG2在AML患儿中的表达较高,其高表达可能导致AML患儿临床耐药.ABCG2和P-gp可能参与了不同的白血病耐药机制.     

针灸治疗紧张型头痛重在宁心安神

紧张性头痛是神经内科针灸门诊中最为常见的疾病,其临床表现为慢性头部紧束样式压迫性疼痛,通常为双侧头痛,起病时可能与心理应激有关,转为慢性形式后常没有明显的心理因素。关于其命名过去一直比较混乱,曾将其称为肌肉收缩性头痛     

流式细胞术检测PP65抗原血症在巨细胞病毒性肝炎诊断中的意义

目的:探讨流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测PP65抗原血症对巨细胞病毒(human cytomegalovirus,CMV)肝炎的诊断价值.方法:采用流式细胞仪对41例CMV肝炎患儿进行血PP65抗原检测,同时用PCR方法测定尿CMV-DNA并用ELISA法检测血清CMV-IgM,比较3种方法的检测结果,对部分患儿进行短期随访,分析PP65的临床应用价值.结果:41例CMV肝炎中36例检出PP65抗原阳性,阳性率达87.8%,CMV-DNA及IgM的阳性率分别为92.6%及36.6%.全身性感染伴高水平抗原血症,单纯肝炎抗原水平相对较低(P＜0.01).PP65在肝炎恢复期转为阴性或低水平,病情恶化时明显增高.结论:PP65抗原血症检测是诊断活动性CMV感染的有效手段,量化结果有助于监测病情.     

鼠抗人CD14单链抗体ScFv2F9原核表达载体的构建和表达

目的:构建ZCH-7-2F9(简称2F9)单链抗体(ScFv2F9)原核表达载体,获得活性目的蛋白,为2F9免疫毒素及其它类型的基因工程抗体的研究奠定基础。方法:根据VH2F9、VL2F9、(G4S)3基因序列以及pIVEX2.3-MCS空载体多克隆位点内切酶位点NdeI和SmaI的核酸序列设计引物,采用高保真的Taq酶,通过重叠延伸拚接法(splicing by overlap extension,SOE)扩增克隆到ScFv2F9基因,T-A克隆、测序核实后克隆到pIVEX2.3-MCS空载体中,阳性重组质粒转化大肠杆菌菌株E.coli BL21star(DE3)plysS,IPTG诱导目的蛋白表达,镍树脂纯化后体外复性浓缩,流式细胞术观察其识别和结合CD14的能力。结果:成功构建ScFv2F9的原核表达载体pIVEX2.3-MCS/ScFv2F9;对大肠杆菌的包涵体进行纯化复性,其复性率为32.6%;通过流式细胞术观察到复性ScFv2F9对亲本单抗2F9-FITC有部分的阻滞效果,复性ScFv2F9阻滞1次后阳性细胞百分数、平均荧光强度(MFI)和高峰频道(peakCh)分别下降了11.73%、11.96%和31.57%,阻滞2次后分别下降了26.44%、21.75%和42.11%。结论:ScFv2F9在原核细胞中获得成功表达,复性后目的蛋白对人CD14有一定的识别和结合能力,为2F9单抗的进一步改造打下了坚实的基础。     

神经母细胞瘤细胞系血细胞分化抗原的表达

神经母细胞瘤(NB)是儿童最常见的颅外实体瘤，预后相对较差。NB细胞系是由形态和生化特性多样的细胞群组成。NB细胞系从形态可分为三种类型的细胞：神经母细胞型(N型)、许旺细胞型(S型)和中间型(I型)。     

直标鼠抗人CD14单克隆抗体2F9-FITC的研制及鉴定

目的:研制异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的直标单克隆抗体2F9-FITC,用于白血病的免疫分型诊断.方法:2F9杂交瘤细胞的亚克隆,2F9腹水的制备、纯化、纯度鉴定按照常规方法进行;参考改良Marsshall氏法,制备FITC标记的2F9-FITC单抗;通过流式细胞术鉴定单抗亚型,比较2F9-FITC和标准CD14-FITC在不同类型白血病细胞上的表达情况.结果:制备了大量高纯度的IgG1κ亚型2F9单抗,成功研制了直标单抗2F9-FITC,A495/A280比值为0.44;2F9-FITC与CD14-FITC在单核细胞上反应的阳性细胞百分数分别为84.50%及90.08%,而在淋巴细胞仅为0.52%和1.01%;2F9-FITC与标准CD14-FITC在各类白血病细胞上的阳性细胞百分数的差异不显著(n=23,t=0.922,P=0.367).结论:研制的2F9-FITC能够替代进口的同类高质量单抗试剂,用于单核细胞相关性白血病的免疫诊断.     

抗末端脱氧核苷酰转移酶单克隆抗体的制备及其生物学特性的初步鉴定

本文用提纯的小牛胸腺末端脱氧核苷酰转移酶（ＴｄＴ）为免疫原，经一次融合，建立了３株能稳定分泌抗小牛胸腺ＴｄＴ单克隆抗体（单抗）的杂交瘤细胞株（命名为抗ＴｄＴ１、ＴｄＴ２和ＴｄＴ３）。３株单抗均为ＩｇＧ１抗体；抗体相加试验证明抗ＴｄＴ２和抗ＴｄＴ３识别ＴｄＴ的同一表位，而抗ＴｄＴ１则识别另一表位；３株单抗识别的抗原分子量均为５８．８ｋＤ；与人白血病细胞株及各型白血病细胞的反应谱３株单抗和进口抗ＴｄＴ单抗基本一致。提示这３株单抗有可能替代进口抗ＴｄＴ单抗，供国内使用。     

多参数流式细胞术检测急性白血病患儿CDl4表达的意义

为了探讨CDl4在小儿白血病中的表达及其在白血病诊断和鉴别诊断中的意义，本文采用CD45／SSC多参数散点图设门多色流式细胞术分析158例小儿急性白血病(AL)患儿白血病细胞的CDl4及其它白血病相关抗原的表达情况。结果：158例中有9例(5.7％)表达CDl4，且均为急性髓系白血病(AML)。CDl4在M4／M5患儿中的阳性率明显高于非M4／M5患儿(P＜0.01)；M4和M5b患儿CDl4的阳性率明显高于M2及M5a(P均＜0．01)；CD11b在M2的阳性率(6／20例，30％)明显低于M5(7／9例，77.8％，P＜0.05)；CDl5在M5a的阳性率明显低于M5b(P＜0．05)、M2(P＜0.01)及M4(P＜0．05)。在AML组中，CDl4的表达与CD11b、CDl5呈正相关(P均＜0．01)。提示CDl4有助于淋巴系白血病、髓系白血病及单核细胞相关性白血病(MLIL)的诊断与鉴别诊断，其对单核细胞相关性白血病免疫分型诊断中的特异性为100％，敏感性为64.3％。CDl4和CDl5有助于M5亚型的区分及M2与M5a、M2与M4的鉴别诊断，CDl4和CDllb则有助于M2与M5的鉴别诊断。     

针灸治痛在奥地利

笔者在奥地利克拉根福州立医院用针灸治疗欧洲人的各种疼痛1 252例.其中有腰腿痛、头痛、颈项痛等7大类,均采用传统针灸治疗,并形成相对固定处方,手法以平补平泻为主,每周2次,10次为一疗程.治疗前后由当地医学专家进行疼痛指数评估.结果:各类痛证治疗后疼痛指数平均下降了70.08%.提示针灸治痛在欧洲人群中具有优势.     

白细胞新单克隆抗体ZCH-2B8a的表达谱分析及其意义

ZCH-2B8a(IgG2a)是作者研究室最近采用髓细胞性白血病细胞系KG1a作为免疫原自行研制的鼠抗人造血细胞分化抗原的单克隆抗体,已提交第8届国际人类白细胞分化抗原协作组会议(HLDA8)鉴定.根据HL-DA8总部反馈信息表明,该抗体识别的抗原性质不明,后者属国际上尚未认识的血细胞膜新的分化抗原.本研究旨在分析ZCH-2B8a单克隆抗体与正常人外周血细胞成分、骨髓及G-CSF动员的外周血CD34+造血干/祖细胞和血液肿瘤细胞系的反应规律及其意义.采用多参数流式细胞术分析2B8a抗体与正常及恶性肿瘤细胞表面的反应性,每种细胞成分重复实验3次,以阳性细胞数≥20%为阳性.结果表明:2B8a抗原在外周血B细胞上表达(3/3例,平均阳性细胞数为26.29%),而在T淋巴细胞和NK细胞上不表达(0/3例);在粒细胞和单核细胞上阳性表达均为2/3例,平均阳性细胞数分别是23.72%和59.84%;在DC细胞、红细胞和血小板上均不表达(0/3例).2B8a抗原在骨髓CD34+细胞上的阳性表达是3/3例,平均阳性细胞数39.33%,而在G-CSF动员的外周血CD34+细胞上的阳性表达仅1/3例,平均阳性细胞数为1.25%.2B8a抗原在B系细胞系Raji、SMS-SB、Nalm-6和Nall-1上的平均阳性细胞数分别为98.78%、98.61%、94.93%和5.68%;在T系细胞系Molt-3上的平均阳性细胞数为31.40%,而在Molt-4、JM和CCRF-CEM细胞上不表达;在髓系细胞系U937、Meg-01、HL-60、K562、KG1a和HEL92.1.7上的平均阳性细胞数分别为67.78%、33.40%、29.70%、28.19%、16.23%和8.02%;在神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH、KCNR、BE、LAN-1和SK-N-AS细胞以及结肠癌细胞系HR8348细胞上均不表达,而在羊膜细胞系FL细胞上呈一定的阳性表达,平均阳性细胞数为45.03%.结论:在正常外周血,2B8a抗体主要与B淋巴细胞和单核巨噬细胞反应,在骨髓和外周血CD34+造血干/祖细胞中也有不同程度的反应性;在细胞系上,2B8a抗体主要与B系细胞系、单核巨噬细胞系及上皮性肿瘤细胞系反应,提示该抗体有可能用于上述肿瘤的免疫学诊断与治疗.