新型冠状病毒肺炎疫情防控面临的挑战

2019年12月湖北省武汉市报告的不明原因重症肺炎聚集性病例事件被确定为新型冠状病毒感染。WHO于2020年2月11日将该病命名为COVID-19。截至3月10日,新型冠状病毒肺炎已造成包括我国在内的114个国家和地区出现了11.8万病例。3月11日WHO评估认为,新型冠状病毒肺炎疫情已呈现大流行特征。当前新型冠状病毒肺炎防控工作面临巨大挑战,主要是由于病原溯源困难、传染源分布广泛、传播途径多样、易感人群免疫水平较低、传染性较强和疫苗研发尚需时日等因素的影响。     

山东省2013年致猩红热及无症状携带者A群链球菌分子分型研究

目的 描述2013年山东省致猩红热及无症状携带者A群链球菌(GAS)分子分型特征,探讨各分型方法与emm型别的关联.方法 自猩红热、无症状携带者咽拭分离获得GAS 72株,利用emm、多位点序列分型(MLST)、超抗原(SAg)基因(speA、speC、speG、speH、speI、speJ、smeZ、ssa、speK、speM、speL)检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)对其进行分型检测.结果 72株GAS中,以emm1型(41.67%)和emm12型(56.94%)为主;共检出两种ST型别,其中ST28型31株(43.06%),ST36型41株(56.94%);ST28型与emm1相关(P<0.05),而ST36型与emm12相关(P<0.05);speA、speC、speG、speH、speI、speJ、smeZ、ssa的检出率分别为38.89%、95.83%、97.22%、38.89%、54.17%、41.67%、100.00%、100.00%,speK、speM、speL未检出;emm1型菌株倾向于含有speA、speJ,不含有speH、speI(P<0.05);emm12恰好相反,倾向于含有speH、speI,不含有speA、speJ(P<0.05);PFGE共检出20种型别.结论 2013年山东省致猩红热和无症状携带者中GAS型别分布较为单一,emm型别以emm1和emm12为主;ST型别主要为ST28和ST36,超抗原基因携带以speC、speG、smeZ、ssa为主.各分型方法间存在一定关联.     

O157血清群大肠杆菌分子亚型的研究

目的：了解山东和福建两省不同来源的O157血清群大肠杆菌分子亚型和菌株间的相关性。方法：对1993－1996年间分离到菌株进行脉冲场电泳（PFGE），图象经计算机处理后进行聚类分析。结果：O157大肠杆菌染色体DNA用XbaI酶切后，经PFGE可生15－20条带，以90％的同源性作为界值，可将11株菌分成9个PFGE亚型，其中山东分离到的6株菌分成4个亚型，福建的5株菌分属5个亚型。结论：山东、福建的O157血清群大肠杆菌均存在多个克隆系。     

嗜水气单胞菌TaqMan实时PCR检测方法的建立

目的 建立嗜水气单胞菌TaqMan实时PCR实验室检测方法.方法 根据嗜水气单胞菌主要黏附素基因(aeromonas hydrophila major adhesion gene,ahe)的保守序列设计引物和TaqMan探针.引物选取200～700 nmol/L 6个浓度梯度,探针选取100～400 nmol/L 4个浓度梯度,以完全随机设计资料的方差分析分别优化引物和探针的浓度.以45株霍乱弧菌、20株副溶血弧菌、10株河流弧菌、4株拟态弧菌、5株创伤弧菌、1株溶藻弧菌、1株弗尼斯弧菌、5株沙门菌属细菌、10株志贺菌属细菌和2株类志贺邻单胞菌为对照,评价该方法的特异性.对所建立的方法进行菌液灵敏度检测和DNA灵敏度检测,并将嗜水气单胞菌人工污染健康人的粪便,实验室内评价该方法从粪便中检测嗜水气单胞菌的能力.结果 6组引物浓度所得的循环阈值(cycle threshold,Ct)分别为(x±s):20.69±0.33、20.72±0.21、20.81±0.12、20.74±0.12、20.51±0.16和20.69±0.11,选择上下游引物的浓度为200 nmol/L(F=1.33,P=0.28),4组探针浓度所得的Ct值分别为(x±s):20.56±0.08、20.82±0.05、20.82±0.11和20.9±0.09,选择探针的浓度为100 nmol/L(F=5.26,P=0.01).该方法DNA的榆测下限为100 fs/μl,纯菌液的检测下限为80 CFU/ml,粪便中嗜水气单胞菌的检测下限为8×103CFU/ml,人工粪便标本增菌8 h后的检测下限为8 CFU/ml.该方法对其他细菌的染色体无扩增.结论 以aha基因为目标检测片段建立的嗜水气单胞菌实时PCR方法灵敏度高、特异度强,可用于纯菌和粪便标本中嗜水气单胞菌的快速检测.     

嗜水气单胞菌TaqMan实时PCR检测方法的建立

Objective To develop a TaqMan real-time PCR for the detection of aeromonas hydrophila. Methods The conserved region of major adhesion gene of aeromonas hydrophila (aha) was used to design primers and TaqMan probe. A total of six concentration gradients for forward and reverse primers ranging from 200 -700 nmol/L were chosen, and four concentration gradients for probe ranging from I00 -400 nmol/L were chosen. And then the concentration of primers and probe were optimized by ANOVA of completely randomized design respectively. The specificity of the established method was evaluated by using bacteria as contrast, including 45 strains Vibrio cholerae,20 strains Vibrio parahemolyticus, 10 strains Vibrio fluvialis,4 strains Vibrio mimicus,5 strains Vibrio vulnificus, 1 strain Vibrio aiginoayticns, 1 strain Vibrio furnissii, 5 strains Salmonella, 10 strains Shigella and 2 strains Piesiomonas shigelloides. The sensitivity, bacterial sensitivity and DNA sensitivity included,were evaluated. The stool of healthy people was contaminated by aeromonas hydrephila artificially, and the ability of the established TaqMan real-time PCR system for detection of aeromonas hydrophila was also evaluated. Results The cycle threshold (Ct) value deserved from 6 groups of primers concentration gradient was (x±s) :20.69±0.33,20.72±0.21,20.81±0. 12,20.74±0.12,20.51±0. 16 and 20.69±0. 11, respectively, and the concentration of forward primer and reverse primer was determined to be 200 nmol/L (F=1.33, P=0. 28). The Ct value deserved from 4 groups of probe concentration gradient was (x±s) : 20.56±0. 08,20.82±0.05,20. 82±0. 11 and 20.93±0.09,respectively,and the concentration of probe was determined to be 100 nmol/L(F =5.26,P =O. 01 ). The bacterial sensitivity and DNA sensitivity were 80 CFU/ml and 100 fg/μl respectively,and the sensitivity to detect aeromonas hydrophila from stool was 8 × 103 CFU/ml, which might be 8 CFU/ml after 8 hours' enrichment. No amplification was observed in the templates of other bacterial. Conclusion The TaqMan real-time PCR method targeting the aha gene of aeromonas hydrophila had a high sensitivity and specificity and might be used to detect aeromonas hydrophila from pure bacterial and stool rapidly.     

山东省食品中单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型

目的了解山东省2007~2009年不同食品来源的单核细胞增生李斯特菌(LM)各菌株之间的遗传相关性和流行病学意义,建立分子分型数据库。方法采用PulseNet标准方法对分离到的100株单核细胞增生李斯特菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE),不同菌株产生的电泳图谱经BioNumerics软件进行比对,分析菌株间的相关性。结果单核细胞增生李斯特菌DNA用AscⅠ酶切后,经PFGE得到10~15个条带,可将100株菌分为31个PFGE型别,其中以4型为主。结论山东省食品中的LM来源于不同的克隆株,但部分LM有不同程度的相关性;PFGE是分析LM同源性的有效方法,对LM的流行趋势、分布特点和分子流行病学研究具有重要的意义。     

2013年山东省四地市儿童A群链球菌耐药特征及其表型、基因型分析

目的了解2013年山东省四地市A群链球菌(GAS)耐药特征及其耐药表型和基因型,为临床治疗GAS感染提供依据。方法从济南、青岛、淄博、潍坊四地市的猩红热、无症状GAS携带者咽拭子中分离获得72株GAS,采用K-B纸片扩散法检测青霉素、红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、四环素、氯霉素、万古霉素、头孢噻肟8种抗生素的耐药情况;提取DNA,PCR扩增erm A、erm B、mef A、tet M、tet O共5种耐药基因,毛细管电泳检测基因阳性率;利用D-抑菌圈试验确定耐药表型。结果 72株GAS中,青霉素、左氧氟沙星、氯霉素、万古霉素、头孢噻肟敏感率均为100%,红霉素、克林霉素、四环素耐药率为100%、100%、94.44%。共检出erm B、tet M两种耐药基因,其阳性率均为100%,未检出erm A、mef A、tet O。仅检出一种耐药表型:固有型耐药表型(c MLS)检出率100%,未发现诱导型耐药表型(i MLS)和主动外排型耐药表型(M)。结论 2013年山东省GAS菌株中,耐药模式以红霉素-克林霉素-四环素共同耐药为主,耐药表型以c MLS为主,耐药基因型以erm B、tet M共同携带为主。     

汉坦病毒包膜糖蛋白G2的基因克隆与序列分析

目的 建立汉坦病毒(HV)包膜糖蛋白G2的克隆载体;进行系统发生树分析,研究G2基因的变异情况.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增山东省HV G2基因片段,克隆于PMD-18T载体,经氨卞西林筛选,酶切鉴定后,进行序列测定,应用DNASTAR软件将其与世界范围内的病毒株基因序列进行分析.结果 扩增得到山东省高密、淄川、莒南、荣成四地G2基因.序列同源性分析表明,四地G2基因都属于SEO型HV,与Z37株核苷酸同源性最高,与其他SEO型各株的同源性为82.3%～99.8%;绘出了G2基因及氨基酸的系统发生树.结论 成功地建立了山东省四地HV G2基因克隆载体;四地HV G2基因同源性高,为山东省SEO型HV的遗传与变异、分子流行病学研究,以及制备有效的亚单位疫苗提供了依据.     

硫酸庆大霉素喷雾剂(GMA)体外抗菌作用的研究

ＧＭＡ为某单位研制的治疗上呼吸道感染的口腔喷雾剂，主要成分为硫酸庆大霉素，本文报告了它与硫酸庆大霉素注射液 ＧＭ对常见上呼吸道感染致病菌的体外抑菌活性，并比较了与临床常用口腔喷雾剂金喉健不同浓度下的时间杀菌率。１　材料与方法１．１　药物　测试药物ＧＭＡ，某     

2009-2012年山东省流感样病例流行病学及病原学特征分析

目的掌握2009-2012年山东省流行性感冒流行规律,病毒型别及其活动水平,为流感的监测预警提供信息。方法收集2009-2012年山东省流感监测系统流感样病例(ILI)监测资料和ILI鼻咽拭子标本的流感病毒检测结果资料进行分析。结果 2009-2012年4个年度,哨点医院内科(儿内科)门诊患者合计19 877 694例,其中ILI 446 406例,占2.25%。4个年度ILI%分别为3.16%、1.98%、2.11%和2.01%,4个年度ILI%差异有统计学意义(P0.05);74.0%的ILI集中在5岁以下年龄组。合计检测ILI标本40 257份,检出流感阳性标本8 960份,阳性率为22.39%。4个年度流感病毒检测阳性率分别为48.67%、17.28%、8.90%和14.04%。对ILI%与病毒分离率两条序列进行等级相关分析,相关系数为0.874(P0.05),为正相关关系。结论 2009年流感病毒活动较为活跃,4个年度中流感优势病毒亚型之间呈交替变化并有一定的规律,ILI流行趋势与流感病毒活动趋势高度一致。