五味子醇乙促进小鼠肝增大的脂质组学研究

五味子醇乙(schisandrol B, SolB)是传统中药五味子的活性单体之一。前期研究发现SolB在抵抗药源性肝损伤和促进肝再生的过程中,具有促进良性肝增大的作用,但肝增大过程中内源物质的变化尚不清楚。本研究通过脂质组学研究SolB所致肝增大过程的脂质组变化。本动物实验经中山大学动物伦理委员会批准。雄性C57BL/6小鼠腹腔注射SolB (100 mg·kg^-1·d^-1) 5 d后采集血清和肝脏样本进行生化和病理检测,采用基于Q Exactive UHPLCMS/MS系统的脂质组学方法对肝脏样本进行脂质组学检测与分析。结果发现SolB显著促进正常小鼠的良性肝增大(与肝损伤、炎症无关),小鼠肝脏出现脂质累积。脂质组学分析发现35种有显著差异的脂质,其中甘油三酯(triglycerides, TG)变化最为显著,其含量显著升高,提示SolB所致肝增大过程能量合成增加。本研究阐明了SolB所致肝增大的脂质组变化,初步解释了SolB促进肝增大过程对脂质的影响。     

二喹啉甲酸检测法测定Sprague-Dawley大鼠肝微粒体蛋白浓度

目的 建立酶标仪检测大鼠肝微粒体蛋白浓度的方法.方法 大鼠尾静脉连续3 d注射0.9%氯化钠注射液2 ml,第4 d解剖大鼠,取肝脏,应用差速离心法提取大鼠肝微粒体,用二喹啉甲酸检测(BCA)法测定肝微粒体蛋白浓度. 结果蛋白标准曲线范围在0~0.5 mg/ml,回归方程为Y=0.091 9+0.868X,(R=0.998).低、中、高浓度回收率分别为101.33%,110.67%,101.17%,日内和日间精密度分别为6.52%, 0.53%, 1.95%和3.01%,7.23%,0.74%.结论 本实验建立的BCA蛋白测定法准确可靠,重复性和稳定性均良好,相比较传统的蛋白测定方法,更为迅速,具有较强的抗干扰的能力,为研究用药后肝微粒体酶活性的改变提供可靠的检测手段.     

奈韦拉平片在健康人体的药代动力学和生物等效性

目的 研究2种国产奈韦拉平片(抗病毒药)在健康人体内的药代动力学,并评价这2种制剂的生物等效性.方法 20例健康成年男性受试者随机分组,按自身对照单次口服奈韦拉平片200 mg后,采用HPLC法测定奈韦拉平的血浆浓度,非房室模型法计算各主要药代动力学参数,并进行方差分析和生物等效性评价.结果 参比制剂与受试制剂奈韦拉平的tmax分别为(3.5±2.1)、(3.0±1.9)h;Cmax分别为(2.6.±0.5)、(2.6±0.5)mg·L-1;t1/2分别为(57.6±10.4)、(58.6±10.2)h;MRT分别为(55.6±6.5)、(56.8±5.0)h;AUC0-t分别为(167.6±36.1)、(171.8±32.7)mg·L-1·h;AUC0→∞分别为(169.9±36.6)、(174.2±33.1)mg·L-1·h;CL/F分别为(1.2±0.3)、(1.2±0.2)L·h-1;Vd/F分别为(100.3±20.4)、(99.4±20.8)L;受试制剂相对于参比制剂的生物利用度为(103.7±11.6)%.结论 受试制剂与参比制剂具有生物等效性.     

抗肿瘤活性物CH330331在大鼠肝微粒体代谢及对药酶影响作用的研究

目的：体外研究大鼠肝微粒体中CH330331代谢的酶促动力学,并利用＂Cocktail＂探针药物模型,研究CH330331对主要CYP450亚型的体外抑制作用。方法：优化CH330331在大鼠肝微粒体中孵育的条件,并进行酶促动力学研究;探讨体外＂Cocktail＂探针药物模型的组成,并研究CH330331对CYP450亚型的体外抑制作用。结果：CH330331代谢的酶促动力学参数：最大反应速率（Vmax）为2.08μmol/（min.mgpro-tein）,米氏常数（Km）为18.96μmol/L。CH330331对大鼠CYP1A2、CYP2C9和CYP2D6有弱抑制作用,对大鼠CYP2C19、CYP2E1和CYP3A4没有抑制作用。结论：临床使用中CH330331可以增加主要通过CYPCYP1A2,CYP2C9和CYP2D6代谢的药物浓度。     

多元化教学方法在药物毒理学教学中的实践

针对药物毒理学教学现状,在教学中充分应用多媒体技术,引入PBL教学法、双语教学、案例教学法等多元化教学方法。多元化教学法在药物毒理学课程教学过程中激发学生学习兴趣,促进学生的素质和能力的培养和提高,教学相长,获得良好的教学效果。     

原代肝细胞培养及其在药物代谢和毒理学研究中的应用进展

原代肝细胞培养技术已有四十几年的历史,随着技术水平的不断提高,其培养越来越成熟,并且已广泛用于研究药物对细胞色素P450酶的作用及其机制,药物相互作用,药物毒理学等多方面。因为其很好的维持和保留了肝脏的代谢能力,具有与体内一致的细胞色素P450酶的活性,成为日益重要和可信赖的评价药物和新化学实体的安全与有效的体外模型。该文对原代肝细胞培养技术及其在药物代谢和毒理学研究中的应用进展进行了综述。     

LC-MS/MS法研究黄酮类化合物对人肝微粒体细胞色素P450酶6种亚型的体外抑制作用

目的：建立液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）研究黄酮类化合物对人肝微粒体细胞色素P450酶6种亚型的 体外抑制作用。方法：采用ESI正离子和负离子选择反应检测同时测定扑热息痛、4-羟基甲苯磺丁脲、5-羟基奥美拉唑 、氧去甲基右美沙芬、6-羟基氯唑沙宗和氧化硝苯地平，分别代表CYP1A2，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1， CYP3A4的活性；黄酮类化合物和6种探针底物在人肝微粒体中共同孵育，并计算其IC50值表示对CYP450酶的抑制程度。 结果：黄酮苷类（水飞蓟宾、金丝桃苷、儿茶素、表儿茶素、葛根素、芦丁、甘草苷以及柚皮苷）的IC50 值均大于50 μmol?L-1，对6种亚型没有抑制作用。而黄酮苷元如槲皮素等均能不同程度地抑制CYP1A2，IC50值从0.054 μmol?L-1 到31.91 μmol?L-1不等；有些对其他亚型如 CYP2C9，CYP2C19，CYP2E1，CYP3A4 也有一定的抑制作用。所有的黄酮类 化合物对CYP2D6无抑制活性。黄酮对CYP3A4的活性也有激活作用。结论：建立的LC-MS/MS方法准确、灵敏、可靠。33种 黄酮类化合物对CYP450酶6种亚型有不同的抑制作用，这些信息有助于中药-药物相互作用的预测。     

紫杉醇对大鼠肝微粒体CYP3A1的作用

目的：考察紫杉醇对Sprague Dawley（SD）大鼠肝微粒体细胞色素P450 3A1（CYP3A1）酶活性的影响效应。为该药临床应用中可能与其他药物产生的相互作用提供依据。方法：将9只雄性SD大鼠随机分为空白对照组（尾静脉注射给予生理盐水．每只1mL，qd，连续3d）、地塞米松诱导组（灌胃给予地塞米松，100mg·kg^-1·d^-1，连续3d）、紫杉醇实验组（尾静脉注射给予紫杉醇，6．7mg·kg^-1·d^-1，连续3d）。采用HPLC法检测以睾酮为探针药物经大鼠肝微粒体温孵后转化的代谢产物6β-羟基睾酮的生成速率来反映大鼠CYP3A1酶的活性。结果：空白对照组、地塞米松诱导组和紫杉醇组6β-羟基睾酮的生成速率分别为（643．1±6．0），（2671．1±225．7），（724．8±36．6）pmol·（mg protein）^-1·min^-1。紫杉醇组6β-羟基睾酮的生成速率与地塞米松诱导组相比差异有极显著性（P〈0．01），与空白对照纽相比差异无显著性（P〉0．05）。结论：紫杉醇对大鼠CYP3A1酶的活性无诱导作用。     

五酯片不同给药间隔抵抗扑热息痛所致肝损伤的作用及机制研究

扑热息痛(paracetamol)又称对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP),其导致的药源性肝损伤在世界范围内普遍存在.五酯片(南五味子醇浸膏,Wuzhi Tablet,WZ)是临床上常用的护肝药.作者前期研究表明,WZ预处理三天后与APAP同时给药可抵抗APAP所致肝损伤,但单次给予WZ与APAP不同给...     

丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体酶中的代谢动力学

目的研究丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体酶中的代谢,以及选择性细胞色素P450(CYP)酶抑制剂对其代谢的影响。方法超速离心法制备大鼠肝微粒体,采用高效液相-质谱联用方法测定孵育液中丹参酮ⅡA原形药物的浓度。研究丹参酮ⅡA的酶促动力学,推导出药物米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax);并计算体外酶对药物的清除率(CLint)。同时观察不同浓度和不同种类的CYP酶特异性抑制剂对丹参酮ⅡA代谢的影响。结果丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体酶中的Vmax为(1.20±0.18)nmol/(min·mg);Km为(4.35±0.67)nmol/mL;CLint为(0.28±0.06)mL/(min·mg)。噻氯匹啶和酮康唑能够显著抑制丹参酮ⅡA的代谢,奎尼丁对丹参酮ⅡA的代谢也有一定的抑制作用,而其他CYP酶抑制剂对丹参酮ⅡA的代谢无明显影响。结论CYP2C19和CYP3A1主要参与了丹参酮ⅡA的代谢,CYP2D6也起到了部分代谢作用;这些CYP酶的抑制剂可能使丹参酮ⅡA的代谢受到抑制,造成药物药效或毒性的增加。