shRNA表达载体的构建及对HBV复制和表达的抑制

目的:构建shRNA的表达载体,检测针对乙型肝炎病毒(HBV)的shRNA的稳定表达质粒对HBV复制和表达的影响。方法:扩增U6启动子构建shRNA表达载体pU6。针对HBV基因组序列设计并化学合成双链核苷酸克隆到pU6载体得到质粒pU6B/HBVi,脂质体介导转染带有HBV基因组的2.2.15细胞,定量PCR和ELISA法检测pU6B/HBVi对HBV复制和表达的影响。结果:成功构建了shRNA的真核表达载体;针对HBV的pU6B/HBVi质粒对HBV的复制和表达有明显的抑制作用。结论:稳定表达shRNA的pU6B/HBVi质粒可以抑制HBV在2.2.15细胞中的复制和表达。     

血管内皮生长因子受体KDR的靶向制剂的制备

目的：研究从噬菌体肽库中筛选到的与血管内皮生长因子受体Ⅱ(KDR)有特异结合活性的小肽，做为KDR靶向药物的先导物质的应用。方法：从噬菌体肽库中筛选能特异结合KDR的噬菌体克隆，挑选结合力最强的克隆测序并化学合成小肽P5，梯度ELISA、阻断实验和竞争结合实验测定小肽在体外与KDR的结合活性。将P5与生物素(NHS-d-Biotin)、BSA化学偶联，ELISA法和细胞免疫组化实验检测偶联物与KDR的结合活性。结果：化学合成的小肽P5在体外能特异结合KDR，Kd=168．6nmol／L，约是KDR与配体血管内皮生长因子(VEGF165)亲和力的1／30，P5能阻断VEGF165与KDR的结合活性，但不能竞争VEGF165与KDR的结合活性。将P5作为导向物质化学合成的P5-BSA-Biotin，在体外同样具有与KDR和细胞表面KDR分子结合的特性。结论：化学合成的小肽P5有望作为先导分子，在以KDR为靶点的肿瘤靶向治疗中得到应用。     

流感病毒空气传播和扩散的研究进展

流感病毒是现今世界上传播较为迅速的呼吸道病毒之一,主要以飞沫传播和气溶胶传播为主。目前针对流感病毒空气传播的研究主要以病毒学领域的病毒稳定性研究和工程学领域的呼吸飞沫的运动和扩散研究为主。然而,流感病毒的空气传播需要满足人体呼出携带病毒颗粒的飞沫或气溶胶,其次是载体颗粒中的病毒到达易感宿主发生感染之前必须具有感染性,单靠病毒学或工程学某一领域难以全面系统地了解流感病毒在空气中传播扩散机制。本研究将总结和分析当前流感病毒室内传播和扩散的研究情况,并为今后相关领域的深入研究提供思路。     

2009-2011年广东省甲型H1N1流感病毒血凝素基因的进化特征

目的 了解2009-2011年广东甲型H1N1流感病毒血凝素基因的HA1进化特征。方法 选取广东甲型H1N1流感病毒83株,提取病毒RNA,经RT-PCR反应扩增HA1并测序,测定的序列用生物信息软件分析,与GenBank中相关序列比较,并对推导的编码氨基酸序列进行进化分析。结果 2009-2011年广东甲型H1N1流感病毒HA1基因的进化速率是5.2× 10-3,高于人季节性H1N1病毒;变异氨基酸多数位于HA蛋白表面,其中部分位于抗原决定簇;在两例死亡病例分离株HA1的第222位氨基酸发生D222G/D222N变异。结论 遗传进化分析表明,甲型H1N1流感病毒发生了一定程度的变异,造成2011年初在广东的再次流行。HA1的第222位氨基酸变异可能与疾病的严重程度有关。     

应用护理程序对急性闭角型青光眼实施健康教育的效果分析

急性闭角型青光眼是属病理性眼压增高,并伴有视功能障碍的致盲性眼病,为提高病人对疾病的认识水平和自我护理能力,我科对2009年6月至2009年12月住院的病人进行系统的健康教育,取得良好的效果.     

从随机肽库中筛选抗入ANG抗体的模拟小肽

目的从随机噬菌体十二肽库中寻找抗重组人 ANG抗体的模拟肽。方法以重组人 ANG为目标分子 ,对随机十二肽库进行亲合筛选 ,用噬菌体 EL ISA及竞争抑制实验鉴定阳性克隆的结合性和特异性。结果经过 3轮亲和筛选 ,噬菌体的回收率从 2 .0× 10 - 4 %增加到 9.3× 10 - 2 % ,阳性克隆得到富集 ;EL ISA和竞争抑制实验证明 :有 9个噬菌体克隆与靶分子有较强的结合活性 ,其中 6个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制抗人重组 ANG单抗与 ANG的结合。结论该小肽可能是抗人ANG抗体的模拟小肽 ,可作为 ANG的拮抗剂     

噬菌体肽库研究进展

噬菌体肽库是将一段编码外源短肽的寡聚核苷酸整合到噬菌体基因中 ,以融合蛋白的形式在噬菌体表面表达 ,从而构建成序列不同的特定长度的小肽集合。一般采用生物亲合选择系统淘选噬菌体肽库。随着此项技术的不断完善和发展 ,噬菌体肽库已在许多领域得到了广泛的运用     

2013-2017年广州市住院儿童呼吸道合胞病毒流行特征及分子生物学分析

目的分析广州人呼吸道合胞病毒(HRSV)的流行特征及遗传变异特征。方法2013—2017年在广州两家哨点医院(广东省妇幼保健院和中山大学孙逸仙纪念医院)采集0~6岁急性呼吸道感染住院儿童的鼻咽拭子作为标本。采用逆转录PCR和巢式PCR方法进行HRSV的检测和分型,通过MEGA 6.0、NetNGlyc 1.0等软件对HRSV序列进行基因亲缘性分析以及N?糖基化位点的预测。结果共收集鼻咽试子标本1225份,其中男性783份,女性442份;月龄M(P25,P75)为8(3,24)月。共检出HRSV儿童感染者209例(17.06%),其中HRSV?A为117例(55.98%),HRSV?B为92例(44.02%)。2岁以下儿童HRSV检出率为18.83%(196例),占总阳性标本的93.78%。209例检出HRSV儿童中,32例(15.31%)还感染了至少1种其他呼吸道病毒。进化树分析显示,62株HRSV?A属于ON1基因型,2株属于NA1基因型,53株HRSV?B全部属于BA基因型。G蛋白的第二高变区在氨基酸替换,终止密码子的使用以及糖基化位点方面均具有多态性。结论广州2岁以下儿童是感染HRSV的高发人群,ON1为HRSV?A主导基因型,BA为HRSV?B的主导基因型。多样化的氨基酸替换,某些糖基化位点的缺失与插入,体现了G蛋白作为主要保护性抗原的多样性。     

急性超容血液稀释在脊柱后路手术中的应用与研究

目的:探讨急性超容血液稀释(AHHD)在脊柱后路减压植骨内固定手术中应用的可行性.方法:将52例ASAⅠ -Ⅱ级择期行脊柱后路减压植骨内固定手术的患者随机分为AHHD组与对照组,实验组在术前应用AHHD,观察Hot、Hb、术中出血量和异体输血量.结果:AHHD组的术中输血量和异体血输注比例少于对照组.结论:急性超容血液稀释用于脊柱后路减压植骨内固定手术可减少异体输血及输血量