TNF-α对大鼠Leydig细胞的作用及机制研究

目的观察TNF-α对睾丸细胞功能的影响并探讨其可能机制。方法通过Percoll不连续密度梯度分离获取大鼠Leydig细胞进行原代培养。HE染色进行细胞形态学观察。Leydig细胞培养48h后在培养液中分别加入不同浓度的大鼠TNF-α,使其终浓度达到0.1、1、10、100ng/ml,分别在培养的第1、2、3、4天取上清,通过放免法测定上清液中睾酮的含量,应用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞术与丫啶橙(AO)染色检测及观察Leydig细胞凋亡情况。结果原代细胞通过提纯后的细胞纯度可达70%~80%。HE染色后可见细胞胞质含量丰富,含有分泌颗粒,胞核圆。TNF-α在0.1~100ng/ml浓度范围内能呈剂量依赖的方式抑制Leydig细胞睾酮的基础分泌。0.1、1、10、100ng/mlTNF-α作用24h后,对Leydig细胞睾酮分泌量的抑制率分别为22.03%、34.98%、52.95%、74.83%。各组Leydig细胞睾酮的分泌量随时间延长呈减少的趋势,但除100ng/ml组外,其他各组各时间点比较差异无统计学意义。高浓度TNF-α(10、100ng/ml)组具有抑制Leydig细胞增殖和促进其凋亡作用,其增殖抑制率分别达到38.35%±4.17%、76.35%±8.65%,而凋亡率分别为13.23%±1.11%、26.43%±5.82%,与对照组比较有统计学意义(P<0.01)。AO染色见高浓度TNF-α(10、100ng/ml)组出现明显的细胞凋亡。结论TNF-α对Leydig细胞睾酮的基础分泌具有抑制作用,在较高浓度时该作用可能与其抑制Leydig细胞增殖并促进细胞凋亡有相关。     

云平台建设在眼科专科联盟中的作用及影响因素分析

目的了解眼科专科联盟内医务人员使用信息化云平台的意愿及满意度情况,并探讨其影响因素。方法于2018年10月-12月,采用随机抽样方法,选取156名眼科专科联盟内医务人员进行问卷调查;采用主成分分析法进行多重线性回归分析。结果2016年-2018年,5家医院的各运行指标呈上升趋势。在调查人群里,医务人员使用云平台进行转诊与远程会诊的意愿均较高。医务人员对“促进优质医疗资源合理流动”一项认可度最高,对其影响最大的是“提高医疗水平”。多重线性回归分析结果显示,对主观意愿产生影响的因素为“资源涌动维”“工作过程维”和学历。结论应建立更加有效的转诊医保支付方式及报销政策,完善绩效考核制度,健全培训制度,加大转诊制度宣传力度,提高基层医务人员云平台使用率,从而进一步实现分级诊疗。     

紧急医学救援人员胜任力评价指标体系的构建研究

目的 建立一套适合评价紧急医学救援人员胜任力的指标体系。方法:通过文献检索、半结构访谈、专家问卷调查等方法,初步建立紧急医学救援人员胜任力指标评价体系,采用德尔菲专家咨询法对20位专家进行两轮咨询,评价验证指标体系,并采用层次分析法及专家重要性赋值平均分配法计算指标权重。结果:两轮专家咨询问卷的有效回收率均是100%;专家权威系数分别为0.73与0.84;变异系数分别为0.18与0.16;协调系数分别为0.28与0.31。最终保留的救援人员胜任力评价指标体系包括一级指标4个,二级指标10个,三级指标54个。结论:专家函询的可信度及代表性较高,探索构建的胜任力指标评价体系综合考虑了应急救援的特点及救援人员所需的素质能力,具有一定的合理性和科学性。     

激光微孔猪脱细胞真皮基质制备及创面移植的观察

目的 制备激光微孔猪脱细胞真皮基质（PADM），寻找其与自体刃厚皮复合移植的最佳孔间距。方法 采用胰蛋白酶法制备PADM，用激光加工机打孔，制备孔间距为0．8、1．0、1．2、1．5mm的激光微孔PADM。在144只SD大鼠背部制作全层皮肤缺损创面，分为微孔Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组，依次采用前述4种孔间距的激光微孔 PADM＋自体刃厚皮移植；网状组采用网状PADM＋自体刃厚皮移植；对照组单纯移植自体刃厚皮。每组24只大鼠。观察移植后2、4、6周各组创面愈合情况，计算移植物成活率和创面收缩率，并行组织学观察。结果 移植后2、4周，微孔Ⅰ、Ⅱ组移植物成活率均低于对照组（P〈0．05），但与网状组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；移植后6周，微孔Ⅰ、Ⅱ组成活率明显高于网状组（P〈0．05）。移植后4、6周微孔Ⅰ、Ⅱ组创面收缩率较对照组显著降低（P〈0．05），移植后6周[（16．0±2．6）％、（15．1±2．4）％]明显低于网状组[（19．3±2．4）％，P〈0．05]。组织学观察见各微孔组上皮化良好，胶原纤维排列整齐，基底膜结构完整。结论 孔间距为0．8mm或1．0mm的激光微孔PADM与自体刃厚皮复合移植可提高创面修复质量，其中孔间距1．0mm效果最佳。     

Ca2+对角质形成细胞增殖与分化调控的作用研究

目的：探讨胞外Ca^2＋对人角质形成细胞（HKC）的增殖与分化的调控作用，为组织工程皮肤的研制提供依据。方法：HKC体外培养，应用形态学、免疫细胞化学、MTT等方法检测胞外Ca^2＋对HKC增殖与分化的影响，并利用钙通道阻滞剂SK＆F 96365来研究其作用的可能途径。结果：Ca^2＋为0.5mmol/L时，HKC呈单层生长，免疫细胞化学显示HKC呈低分化状态，当Ca^2＋为1mmol/L与1.5mmol/L时，细胞在3天后出现复层生长，免疫细胞化学显示细胞K19角蛋白表达减少，Ca^2＋为2.0mmol/L时表现出一定的细胞毒性作用，SK＆F 96365可逆转Ca^2＋的促增殖与分化作用。结论：胞外Ca^2＋在一定范围内具有促HKC分化与增殖的作用，并且该作用可以被SK＆F 96365所阻滞。     

胰岛素强化治疗对严重烫伤大鼠血清凋亡配体的作用

目的 了解大鼠严重烫伤后血清凋亡相关配体的变化及胰岛素强化治疗的作用.方法 将150只Wistar大鼠随机分为假伤组、烫伤组和治疗组.烫伤组和治疗组烫伤后立即腹腔注射等渗盐水40 mL/kg复苏;治疗组伤后24 h皮下注射胰岛素0.25 U/100 g,以后每12小时注射1次,共注射5 d.第1～5天的剂量分别为0.25、0.50、0.75、1.00、1.25 U/100 g,将大鼠血糖控制在3～6 mmol/L.假伤组浸入37℃温水假伤后不进行液体复苏.于伤后1、4、7、10、14 d抽取各组大鼠腹主动脉血,采用酶联免疫吸附测定法检测血清TNF-α、可溶性Fas配体(sFasL)、可溶性Fas受体(sFas);放射免疫法检测血清胰岛素水平.结果 烫伤组大鼠伤后1 d血清TNF-α水平[(30.9±8.7)ng/L]即达高峰,与假伤组[(12.7±2.8)ng/L]和治疗组[(16.8±4.7)ng/L]比较,差异有统计学意义(P<0.01),以后逐渐下降;治疗组大鼠伤后血清TNF-α水平虽然有所上升,但在伤后7 d内明显低于烫伤组(P<0.01).烫伤组、治疗组大鼠血清sFasL分别在伤后7～14 d和4～10 d高于假伤组(P<0.05),此后逐渐恢复至正常水平.伤后4～10 d治疗组sFas水平明显高于烫伤组及假伤组(P<0.05).伤后7、10 d烫伤组大鼠血清sFasL与sFas比值高于假伤组,而治疗组则在伤后7 d低于烫伤组(P<0.05),伤后14 d 2组均接近正常水平.烫伤组大鼠血清胰岛素水平在伤后4～10d低于假伤组(P<0.05).治疗组从伤后第1天起血清胰岛素水平即显著升高,伤后4 d[(327±15)μU/mL]达高峰,并显著高于假伤组[(42±15)μU/mL,P<0.01]和烫伤组[(28±10)μU/mL,P<0.01],随着治疗的进行,该指标逐渐恢复到正常水平.结论 胰岛素可能通过调节凋亡配体的分泌而抑制烧伤后细胞凋亡.     

低分子肝素对大面积深度烧伤患者高凝状态的改善作用

目的 观察低分子肝素治疗大面积深度烧伤患者血液高凝状态的临床效果.方法 烧伤患者9例,均为男性,年龄26.3±6.5(19～40)岁,烧伤面积50.0%±33.4%(20%～97%)TBSA,为深Ⅱ～Ⅳ度烧伤,均伴有中度或重度吸入性损伤,列入肝素治疗组,予低分子肝素注射液5 000U皮下注射,每12h或6h 1次,连用3～4天.同时期入院的12例患者为治疗对照组,年龄、烧伤面积与治疗组无显著差异,治疗措施亦基本相同,但不给予低分子肝素.另设整形患者10例为正常对照组.观察治疗前后血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶原国际标准化比值(INR)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原浓度(Fib)及血小板计数(PLT)的变化.结果 治疗前肝素治疗组、治疗对照组的INR、APTT、PLT水平显著低于正常对照组,Fib水平显著高于正常对照组;治疗后肝素治疗组Fib显著降低(5.89±1.13g/L vs 2.89±0.90g/L),PLT显著升高[(91±11)×109/L vs (264±30)×109/L],未见明显出血性副作用;治疗对照组治疗前后各项指标无显著改变.结论 低分子肝素可有效改善烧伤后的血液高凝状态.     

烧伤病房空气消毒的研究

目的:探讨天然中草药空气清菌片在烧伤病房空气消毒中的实用价值.方法:选择5个烧伤病房,使用天然中草药空气清菌片益于电热驱蚊器上以电热散香方式进行空气消毒,消毒前后对空气采样送细菌培养,同时观察患者对气味反应.结果:消毒后空气自然菌及葡萄球菌数量较消毒前明显减少;66.7%的患者表示乐于接受空气清菌片的气味.结论:清菌片空气消毒方法杀菌效果明显、无毒无害、价格便宜、操作简单,且消毒不受时间、人员流动限制,其特有的芳香可以冲淡因烧伤腐皮和创面感染造成的异味,缓解病人对医院的各种气味的不适感,值得在烧伤病房推广.但不同面积病房使用剂量、有效消毒时间、每日消毒频次等内容有待进一步研究.     

小面积全层皮肤制备皮片的改良与应用

目的:介绍一种小面积全层皮肤制备皮片的改良方法。方法:36只SD大鼠随机分为2组,自背部切取4 cm×4 cm大小全层皮肤组织,实验组使用鼓式取皮机及双面胶纸将其反削成中厚皮片,对照组采用眼科剪将其修剪成中厚皮片。将皮片原位移植于大鼠背部创面,术后8 d观察创面愈合情况,计算皮片成活率。并将该方法应用于手术患者21例。结果:实验组皮片完整无缺损,厚度均匀一致;对照组皮片厚薄不一,部分皮片有剪破痕。实验组制备时间明显短于对照组(P<0.01),而皮片成活率高于对照组(P<0.05)。手术患者术后皮片成活良好。结论:小面积全层皮肤组织制备皮片的改良方法能够有效提高皮片质量,缩短手术时间。     

大肠杆菌脂多糖对皮肤成纤维细胞数量及增殖周期的影响

目的:观察大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后,皮肤成纤维细胞数量和增殖周期的变化规律。方法:体外培养正常人皮肤成纤维细胞,加入不同浓度(0.005~1.0μg/m l)的大肠杆菌LPS(E.coli055:B5),通过细胞计数法连续观察1~9 d细胞数量的变化;于LPS加入后第6天细胞处于对数生长期时,采用流式细胞术观察细胞增殖周期。结果:LPS刺激浓度在0.005~0.1μg/m l时,细胞数量和S期细胞比例随着刺激浓度增加而增高,且呈浓度依赖性;当LPS浓度为0.5μg/m l时,上述作用开始降低,但仍高于对照组;当浓度达到1.0μg/m l时,细胞数量和S期细胞比例均低于对照组。结论:在一定浓度范围内LPS促进皮肤成纤维细胞增殖,而过高浓度LPS则呈现抑制效应。