甲状腺肿瘤原位细胞凋亡检测与脆性组氨酸三联体蛋白表达的临床意义

目的研究原位细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)及抑癌蛋白脆性组氨酸三联体(FHIT)在原发性甲状腺肿瘤中表达及其与病变的关系。方法原发性甲状腺肿瘤78例(腺癌38例,腺瘤40例),分别应用原位细胞凋亡检测(TuNEL)试剂盒测定AI及应用免疫组化方法检测FHIT表达情况。结果AI及FHIT蛋白在各甲状腺肿瘤组织中均有表达,腺癌AI表达显著高于腺瘤(P<0.05),腺瘤FHIT表达高于腺癌(P<0.01),AI及FHIT蛋白表达与肿瘤大小(P<0.05及P<0.01)、腺癌转移(P<0.05及P<0.05)具有相关性。结论AI、FHIT的表达与甲状腺肿瘤显著相关,它们在原发性甲状腺癌病变中高度表达,检测AI及FHIT水平对于鉴别原发性甲状腺肿瘤良恶性具有重要参考意义,其表达水平可能是判断甲状腺癌预后的观测指标。     

特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因siRNA表达载体构建及鉴定

目的:构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体及鉴定。方法:根据Genbank筛选甲状旁腺激素受体1基因3个阳性克隆及1个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至胰岛素-1细胞中,Westernblot观察甲状旁腺激素受体1基因表达,鉴定其转染效率。结果:菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确,并能成功转染到胰岛素-1细胞株中,Western blot筛选最佳抑制基因。结论:成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,为深入探讨大鼠甲状旁腺激素受体1基因的抗凋亡作用奠定了试验基础。     

原发性甲状腺滤泡癌远处转移中病理标记物的诊断价值

原发性甲状腺滤泡癌（thyroid follcular carcinoma,TFC）常见的远处转移,主要由于血行转移到其他器官,少见淋巴转移。TFC临床诊断远处转移多依赖于影像学,而发现时常常是晚期,耽误了相关诊治［1］。既往本课题组进行了系列性TFC的研究,发现了个别病理标记物具有相关远处转移提示作用［2］,因此,我们分析35例 TFC 组织中PTTG等7种病理标记物的表达情况,旨在探讨它们在TFC是否存在远处转移的作用及其意义,寻找在该病变中有诊断意义的客观指标。     

甲状旁腺素受体1表达对高糖状态下INS-1细胞功能影响研究

目的 观察甲状旁腺受体1(PTH1R)的表达对胰岛β细胞胰岛素合成与分泌功能影响.方法 构建出PTH1R基因沉默的细胞模型后,分别应用放射免疫法观察25 mmol/L D-葡萄糖处理后对照组、阴性基因克隆组(siPTH1R-NC)、PTHrP组及阳性基因序列组(siPTH1R)细胞内胰岛素含量、葡萄糖刺激胰岛素分泌能力、应用Fluo-3/AM 检测INS-1细胞内钙离子浓度及应用INS-1细胞2-脱氧-[3H]-葡萄糖摄入率检测INS-1细胞葡萄糖转运能力.结果 PTHrP组胰岛素分泌能力高于其他3组,siPTH1R组则低于对照组及siPTH1R-NC组(均P＜0.01);PTHrP组中细胞内胰岛素含量显著高于对照组、siPTH1R-NC及siPTH1R组(均P＜0.01),其他3组间差异无统计学意义;PTHrP组中钙离子浓度水平高于其他3组,siPTH1R组低于对照组及siPTH1R-NC组.PTHrP组中细胞2-脱氧-[3H]-葡萄糖摄入率高于其他3组.结论 高糖状态下PTH1R表达水平与INS-1细胞胰岛素合成与分泌功能有关,可能为INS-1细胞自我保护的一种作用.

Abstract：

Objective To observe insulin synthesis and secretion in INS-1 under high glucose, and to clarify the effect of PTH1R. Methods After successful construction of recombinant PTH1R-siRNA vectors in INS-1 cell, insulin secretion and intracellular insulin content of control group, siPTH1R-Negative control group, PTHrP group, and siPTH1R group under 25 mmol/L glucose were measured by radioimmunoassay in INS-1 cell. Intracellular calcium were detected by Fluo-3/AM and the capability of glucose transport was calculated by assaying the uptake of [3H]-2-deoxy-D-glucose in cells.Results Compared with control group, and siPTH1R-NC group, PTHrP group showed increased capability of insulin secretion; PTHrP group had higher intracellular insulin levels than others; PTHrP group showed increased intracellular calcium; the uptake of [3H]-2-deoxy-D-glucose under high glucose after 48h of PTHrP group was increased(all P＜0.01). Conclusion There is a close relationship between PTH1R activation and insulin secretion and synthesis, PTH1R activation may be one of the protective mechanisms in maintaining function of β-cell under high glucose.     

人类端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白在嗜铬细胞瘤中的表达及其意义

目的研究人类端粒酶逆转录酶（hTERT）在嗜铬细胞瘤中的表达及其作为预测生物学行为标志物的价值。方法采用原位杂交方法测定hTERT mRNA在45例嗜铬细胞瘤和副神经节瘤和9例正常肾上腺髓质中的表达；免疫组织化学方法检测hTERT蛋白的表达水平。结果hTERT mRNA在5例恶性（5／7）和5例可疑恶性（5／7）肿瘤中表达，表达均高于良性肿瘤（3／31），差异有统计学意义（P〈0．01）；hTERT蛋白的表达在良性（3／31）和可疑恶性（6／7）以及恶性（5／7）差异有统计学意义（P〈0．01）；9例正常肾上腺髓质细胞中未发现hTERT mRNA和蛋白的表达；肿瘤组织hTERT蛋白和mRNA的表达存在正相关性（r=0．951，P〈0．01）；hTERT蛋白和mRNA的表达与临床因素，如性别、肿瘤大小和血压无关联。结论hTERT mRNA和蛋白检测对良、恶性嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的鉴别诊断有重要临床意义。     

甲状腺乳头状癌组织PTTG及PTTGmRNA表达研究

目的:检测PTTG在甲状腺乳头状癌组织中的表达,探讨其与甲状腺乳头状癌的关系.方法:在52例甲状腺乳头状癌组织及其癌旁组织中分别应用原位细胞凋亡检测(TuNEL)试剂盒测定原位细胞凋亡指数(apoptosis index,AI),应用免疫组化方法检测PTTG,应用原位杂交方法检测PTTG mRNA表达.结果: PTTG及PTTG mRNA在甲状腺乳头状癌组织中表达比相应癌旁组织显著升高(P＝0.0091,P＝0.0012):PTTG及PTTG mRNA灰度值与AI正相关(r＝0.447,P＝0.003;r＝0.564,P＝0.000).结论: PTTG及PTTG mRNA表达升高可能参与甲状腺乳头状癌的发生发展,检测PTTG及PTTG mRNA对于甲状腺乳头状癌与良性组织鉴别诊断具有临床参考意义.     

高糖状态下甲状旁腺素受体1对乳腺癌的作用机制研究

目的 阐明高糖状态下甲状旁腺受体1(PTH1R)对乳腺癌细胞株SHZ-88的作用机制.方法 应用实时(real time) PCR分别检测0(对照组)、5、15、25 mmol/L葡萄糖浓度下PTH1R mRNA水平;构建出PTH1R基因沉默(siPTH1R)的细胞模型后,分别应用MTT法、TUNEL-FITC/Hoechst33258及Western blot法检测对照组、25 mmol/L葡萄糖处理组(高糖组)、25 mmol/L葡萄糖处理的阴性PTH1R基因序列组(高糖siPTH1R NC组)及高糖阳性PTH1R基因序列组(高糖siPTH1R组)细胞活力、细胞凋亡情况及Bax、Bcb2蛋白的表达.结果 随着葡萄糖浓度升高,PTH1R mRNA水平增高,其中25 mmol/L葡萄糖处理后PTH1R mRNA水平最高(均P＜0.01);高糖siPTH1R组细胞活力(P＜0.05,P＜0.01及P＜0.01)及Bcl-2表达(均P＜0.01)低于对照组、高糖组及高糖siPTH1R-NC组;高糖siPTH1R组中细胞凋亡水平及Bax表达高于对照组、高糖组及高糖siPTH1R-NC组(均P＜0.01);与对照组比较,高糖组细胞活力(P＜0.01)及Bcl-2表达(P＜0.01)增高,而Bax表达(P＜0.01)降低.结论 高糖状态下PTH1R表达水平与SHZ-88细胞增殖能力有关,抑制PTH1R表达可能为糖尿病合并乳腺癌治疗有效靶点之一.     

PPARγ与内分泌肿瘤关系的研究进展

核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome Proliferator—Activated Receptorγ，PPART）与内分泌肿瘤的相关性研究是目前研究热点，PPAR7在内分泌肿瘤调节中具有重要作用。现将PPAR7与内分泌肿瘤相关进展综述如下。     

核内蛋白P8与内分泌肿瘤的研究进展

核内蛋白P8是一种应激蛋白,其分子结构及生化功能与羟甲戊二酸单酰CoA（HMG）-I／Y蛋白类似,参与甲状腺癌、垂体瘤等的发生、发展及转移。P8可通过上调转化生长因子（TcF）β1、下调P27蛋白等作用促进肿瘤生长,同时促进肿瘤种植、转移。对于P8的深入研究,有助于阐明内分泌肿瘤发病机理及抗肿瘤新药的研发。     

特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因SiRNA表达载体的构建、鉴定及对高糖状态下INS-1细胞周期的影响

目的 构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因(PTH1R)的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体以及鉴定及观测高糖下对INS-1细胞周期的影响.方法 根据Genbank筛选PTH1R三个阳性克隆及一个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至INS-1细胞中,Westernblotting观察PTH1R表达,鉴定其转染效率,筛选出最佳抑制基因后,应用流式细胞仪检测25mmol/LD-葡萄糖处理INS-1细胞周期.结果 菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确.并能成功转染到INS-1细胞株中,Westernblot筛选最佳抑制基因.细胞周期检测提示PTHIR沉默后抑制INS-1细胞从G0/G1期进入S期.结论 成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,高糖状态下PTH1R表达可能为INS-1细胞自我保护的一种作用.