基孔肯雅病毒全基因组的多序列比对及遗传进化分析

目的 了解基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)毒株的时间、地区及基因型的分布情况,不同时间和地区分离毒株的相似性,核苷酸位点的变异情况以及病毒的遗传进化趋势,为基孔肯雅热的预防和控制奠定基础.方法 对美国国立生物技术信息中心(NCBI)中收录的CHIKV毒株全基因组序列共133条用DNAStar7.1软件进行核苷酸和氨基酸相似性比较及变异分析,用Mega 6.06进行遗传进化分析.结果 CHIKV组内核苷酸序列相似性在97.7％ ～ 100.0％之间,CHIKV组内氨基酸序列相似性在80.3％ ～ 100.0％之间,组内相似性较高,变异率较低;CHIKV碱基间的转换较为常见占碱基突变的81.02％;分离时间、地区相近的毒株遗传距离较近,不同谱系的东/中/南非型毒株已蔓延至欧亚各地区.结论 CHIKV毒株存在一定的变异,但具有较高的遗传稳定性.     

广东省外环境O1/O139群霍乱弧菌毒力基因分型

目的 分析广东省外环境来源O1/O139群霍乱弧菌毒力基因的携带及基因分型特征,为霍乱防控提供依据.方法 选取2008 -2009年广东省O1/O139群霍乱弧菌水体分离株69株,水产品分离株16株和同期病例分离株5株,应用多重聚合酶链反应对ctxA、ace、zot、tcpA、tcpl、hlyA、ompU、toxR等8种毒力基因进行检测和分型分析.结果 90株O1/O139群霍乱弧菌均携带hlyA和toxR基因;5株病例菌株中有3株携带8种毒力基因,另外2株小川型菌株为非产毒株,基因型为hlyA+ toxR+ ompU+ zot+ tcpA+ tcpl+型和hlyA+ toxR+ tcpA+型;水体菌株中,稻叶型菌株以hlyA+ toxR+ ompU+ ace+ zot+ tcpl+型(34.15％)为主,小川型(66.67％)和O139群(70％)以hlyA+ toxR+型为主;水产品菌株中,稻叶型菌株以hlyA+ toxR+ ompU+ tcpl+型(75.00％)为主,小川型菌株各种基因型别均有分布,无明显优势基因型别.结论 广东省外环境来源O1/O139群霍乱弧菌以非产毒株广泛存在,毒力基因型别多样.     

广东省2013年副溶血弧菌暴发与散发菌株的病原学特征

目的 了解2013年广东省副溶血弧菌暴发与散发分离株的血清型别、抗菌药物耐药性、毒力基因携带情况以及分子分型特征.方法 对36株暴发分离株和43株散发分离株进行血清分型、药敏试验以及耐热直接溶血毒素基因(tdh)、耐热相关溶血毒素基因(trh)、GS-PCR和orf8基因的PCR检测,并进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型.结果 36株暴发分离株全部为O3:K6血清型,43株散发分离株的优势血清型为O3:K6型(23株,53.49%).药敏检测结果显示,对氨苄西林(96.20%)和头孢噻吩(40.50%)的耐药率较高;对复方新诺明和氯霉素则高度敏感,敏感性均为100%.多重耐药分析显示,83.33%(30/36)的暴发分离株同时耐受≥3种抗菌药,37.21%(16/43)的散发分离株同时耐受≥3种抗菌药物.毒力基因PCR检测显示,36株暴发分离株均为tdh⁺tdh^-型菌株.86.05%(37/43)的散发分离株为tdh⁺tdh^-型菌株,11.63%(5/43)为tdh^-tdh⁺型菌株,仅1株为tdh⁺tdh⁺型菌株.暴发分离株全部携带GS-PCR和/或orf8基因,51.16%(22/43)的散发分离株携带GS-PCR和/或orf8基因.PFGE显示,79株副溶血弧菌经NotⅠ酶切后的PFGE图谱可分为3个聚类,32种PFGE型别,相似值为59.8%～100.0%.暴发菌株聚集在同一个聚类中,散发菌株散布在各个聚类中.结论 2013年广东省副溶血弧菌优势血清型为O3:K6型,菌株对多数抗菌药物仍然比较敏感,但存在多重耐药现象,多数菌株携带tdh基因,大部分O3:K6型菌株携带GS-PCR和/或orf8基因;PFGE结果提示广东省副溶血弧菌存在遗传多样性.     

2008年广东儿童手足口病流行病学及病原学相关临床特征分析

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)最早在1957年被发现,近年来在儿童中较为流行,2008年我国出现了区域性暴发流行.这次暴发首先发生在安徽,此后广东的病例也不断增加,目前已达1万多例,并导致多名儿童死亡.     

广东省1996年AFP病例及其密切接触者病原学监测分析

1996年广东省报告的急性驰缓性麻痹(AFP)病例263例，报告率为1．39／十万。其中216例采集了合格双份粪便标本，合格率为82．13％。有218例AFP病例采集了密切接触粪便标本1031份。以上标本均进行了病毒分离。现将1996年263例AFP病例及密切接触的粪标本的病原学监测结果分析如下：     

多重RT-PCR同时检测8种呼吸道病毒方法的建立

呼吸道病毒分别在2组多重RT-PCR体系中被成功扩增,评估结果显示呼吸道合胞病毒、鼻病毒和冠状病毒229E第一轮多重RT-PCR与普通RT-PCR结果的一致性分别为97.9%、95.8%和95.8%;第二轮多重半巢氏PCR与普通PCR扩增结果一致性分别为48/48、47/48和48/48;其他5种病毒的2轮扩增的结果一致性均为100%.结论 2组多重RT-PCR与普通RT-PCR扩增结果均具有较高的一致性,一种可以同时检测8种常见呼吸道病毒的多重RT-PCR检测方法被初步构建.     

脊髓灰质炎病毒型内鉴别及毒力分析的新方法

脊髓灰质炎(下称脊灰)的实验室诊断是世界卫生组织(WHO)关于全球消灭脊灰活动的重要部分.最近建立了临床标本中脊灰病毒检测、型内鉴定,脊灰病毒神经毒力分析及脊灰抗体检测的新方法.本文对脊灰病毒型内鉴定及神经毒力分析的新方法作一介绍。     

Hep-2细胞在严重急性呼吸综合征病原学检测中的应用研究

目的 应用人咽喉上皮癌细胞(Hep-2)对严重急性呼吸综合征(SARS)病例标本进行病原体检测与研究，为该病的预防与控制提供依据。方法 采用Hep-2细胞培养法，对2003年l～2月广东省收集的SARS病例的咽拭子等标本分离致病病原体，并应用电镜形态学、逆转录．多聚酶链反应(RT-PCR)扩增部分基因进行序列分析，并对分离的病原体进行研究。结果 132例SARS病例的3l份咽拭子、100份痰液和l份尸检肺组织标本中有73份标本致单层细胞出现“蚀斑病变”，细胞病变阳性率为55．3％，其中48h阳性率为36．4％。采用巢式PCR(Nested-PCR)对其中25份出现“蚀斑病变”细胞培养物进行检测，能扩增出冠状病毒的特异片段；对中2-18、中2-19等6份Nested-PCR产物进行基因序列分析，结果 显示其核苷酸序列与国内外公布的结果一致，氨基酸序列与已知的人或动物冠状病毒的同源性在58％～76％之间。通过电镜在SARS病例标本(中2-10)病变细胞及l份尸检肺组织标本中观察到衣原体样颗粒和病毒样颗粒。结论 从接种SARS病例标本的Hep-2细胞病变培养物中证实有冠状病毒。     

寨卡病毒感染人神经母细胞瘤细胞所诱导的细胞因子表达水平变化

目的 研究寨卡病毒（ZIKV）感染人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）所导致的细胞因子分泌的变化,探讨ZIKV影响神经系统功能紊乱的机制。方法 建立ZIKV感染SH-SY5Y细胞模型,采用噻唑蓝（MTT）分析法检测细胞活力,采用悬浮芯片系统（Bio-Plex^® 200）Luminex多重检测技术同时定量检测24、48、72 h细胞培养上清液中细胞因子IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-13、IL-18、IFN-γ、TNF-α、IL-12P70、GM-CSF的浓度。结果 病毒感染组24、48、72 h细胞存活率均低于正常对照组（均P<0.01）。病毒感染组（24~72 h）分泌IL-1β、IL-5、IFN-γ、TNF-α、IL-12P70、GM-CSF的浓度水平均高于对照组（均P<0.01）。病毒感染组（48 h）分泌的IL-1β、IL-12P70、GM-CSF浓度水平均高于对照组（48 h）,病毒感染组（72 h）分泌TNF-α高于对照组（72h）（P<0.05或P<0.01）。结论 ZIKV感染SH-SY5Y细胞后致其细胞存活率降低,并以时间依赖的方式分泌浓度水平相对较高的促炎性细胞因子。     

一起由3型腺病毒引起的咽结膜热病原学研究

目的　探讨2 0 0 4年7月上旬广州市某幼儿园暴发的一起咽结膜热的病原学。方法　采集急性咽结膜热患儿急性期眼或咽拭子标本用Hep 2细胞进行病毒分离,并对原始标本及病毒分离物使用PCR方法及序列测定进行检测鉴定。用分离鉴定的毒株作为抗原,测定7例患儿及2名健康儿童(阴性对照)双份血清中病毒的中和抗体。结果　2 2份患儿的咽拭子和眼拭子标本用PCR测定显示12份为腺病毒阳性,2 2份标本中只分离出9株毒株,经鉴定所有病毒株均为3型腺病毒,且与朝鲜分离的3型腺病毒同源性高达97%。以分离到的1株毒株与7例患儿自身急性期和恢复期血清的中和试验显示恢复期中和抗体较急性期有4倍或4倍以上增长,2例阴性对照中和抗体无增长。结论　该起急性咽结膜热暴发是由3型腺病毒引起的