McAb共刺激PBLs膜表面分子表达与肝癌细胞凋亡的相关性

目的研究McAb共刺激PBLs前后的表型变化及与肝癌细胞凋亡的相关性。方法采用流式细胞仪分析PBLs被刺激前后的表型,用电镜超微结构和DNA梯子电泳观察肝癌细胞凋亡。结果CD3、CD4分子表达高于刺激前约10%,肝癌细胞出现凋亡,细胞核固缩、边聚、裂解。同时也出现典型的DNA梯子。而肝癌患者用共刺激PBLs后,CD3和CD8增高(P<0.05)。结论共刺激使共刺激信号分子增加,抗原呈递能力增强,也使细胞因子分泌增加,这些因素促使肝癌细胞凋亡,而肿瘤患者T细胞增加时向CD8     

TCR Vβ7基因转染PBLs的表达及抗肝癌的作用

目的 :将TCRVβ7基因转化到淋巴细胞后研究肝癌细胞的生物学作用。 方法 :用RT PCR的方法扩增出TCRVβ7基因 ,克隆到表达载体pLXSN上 ,用脂质体转染的方法 ,将重组载体导入淋巴细胞 ,然后将淋巴细胞作用于肝癌细胞 ,淋巴细胞用流式细胞仪测表型和用激光共聚焦检测TCRVβ7 1基因的表达 ,肝癌细胞作超微结构分析。 结果 :TCRVβ7基因表达的跨膜蛋白显著增多 ,而且淋巴细胞增多 (P <0 0 5 ) ,肝癌细胞出现凋亡。结论 :TCRVβ7亚家族具有识别肝癌抗原的作用并能激活T细胞的杀伤肝癌细胞的功能。     

识别肝癌抗原的TCRVβ7亚家族克隆转基因后的生物学作用

目的研究将TCRVβ7基因转化到淋巴细胞后对肝癌细胞的生物学作用。方法用RT-PCR的方法扩增出TCRVβ7基因,克隆到表达载体pLXSN上,用脂质体转染的方法,将重组载体导入淋巴细胞,然后将淋巴细胞作用于肝癌细胞,淋巴细胞用流式细胞仪测表型,肝癌细胞作超微结构分析。结果具有TCRVβ7基因表达的淋巴细胞显著增多,肝癌细胞出现凋亡。结论TCRVβ7亚家族具有识别肝癌抗原的作用并能激活T细胞的杀伤肝癌细胞的功能。     

识别肝癌抗原在TCRVβ7亚家族克隆转基因后的生物学作用

目的:研究将TCRVβ7基因转化到淋巴细胞后对肝癌细胞的生物学作用。方法：用RT－PCR的方法扩增出TCRVβ7基因,克隆到表达载体pLXSN上,用脂质体转染的方法,将重组载体导入淋巴细胞,然后淋巴细胞作用于肝癌细胞,淋巴细胞用流式细胞仪测表型,肝癌细胞作超微结构分析。结果：具有TCRVβ7基因表达的淋巴细胞显著增多,肝癌细胞出现凋亡。结论：TCRVβ7亚家族具有识别肝癌抗癌抗原的作用并能激活T细胞的杀伤肝癌细胞的功能。     

T细胞免疫调节膜分子表达与抗肝癌作用的研究

目的：研究McAb共刺激PBLs前后的表型变化及与肝癌细胞凋亡的相关性。方法：采用流式细胞仪分析PBLs被刺激前后的表型，用电镜超微结构和DNA梯子电泳观察肝癌细胞凋亡。结果：CD3、CD4分子表达高于刺激前约10％，肝癌细胞出现凋亡，细胞核固缩、边聚、裂解。同时也出现典型的DNA梯子。而肝癌患者用共刺激PBLs后，CD3和CD8增高（P＜0．05）。结论：共刺激使共刺激信号分子增加，抗原呈递能力增强，也使细胞因子分泌增加，这些因素使肝癌细胞凋亡，而肿瘤患者T细胞增加时向CD8^ 分化，结果提示膜分子的表达与凋亡密切相关。     

腹水型单克隆抗体纯化方法的研究

目的：比较不同纯化方法对腹水型抗体的纯化效果,探索出最适合实验室抗体生产的纯化方法。方法制备的 IgG1单克隆抗体腹水（4-D10）分别利用两步硫酸铵沉淀法（AS 法）、辛酸-硫酸铵沉淀法（CA-AS法）、辛酸-硫酸铵沉淀法联合 DEAE 阴离子交换层析法与辛酸-硫酸铵沉淀法联合蛋白 G 亲和层析法纯化处理后,经蛋白纯度、回收率、抗体免疫活性鉴定分析后,比较不同的纯化方法对腹水型抗体的纯化效果。结果① AS 法的蛋白纯度为25%,低于 CA-AS 法（44%）;AS 法回收率为63%,高于 CA-AS 法（41.8%）;比较抗体效价表明,AS 法（1.024×106）与 CA-AS 法（1.024×106）两者相当。②粗提后纯化效果表明,蛋白 G亲和层析法回收率明显降低,DEAE 纯品虽纯度略低,但回收率较高,且效价（5.12×105）高于蛋白 G 亲和层析法（1.28×105）。结论 CA-AS 联合 DEAE 离子交换法是适合实验室生产单抗的低成本、纯化效果和回收效果较佳的方法。     

识别肿瘤相关抗原TCR Vβ基因亚家族表达特征的研究

目的：探讨特异性识别肝癌和不同组织肿瘤相关抗原（TAA）的TCR Vβ基因亚家族的表达特征。方法：用McAb共激活的健康人PBLs，作用于肝癌细胞系BEL－7402和HepG2-2215，以及将不同肿瘤患者PBLs，用RT－PCR、Southern印迹分析TCR Vβ基因亚家族识别癌抗原的优势取用。结果：不同的肝癌细胞系和不同的肝癌患者TCR Vβ、Vβ15表达较高，而另外两例非肝癌患者TCR Vβ7表达而Vβ15不表达。结论：TCR Vβ7可能是TAA的识别基因，而Vβ15可能为肝癌抗原的识别基因。     

hTCR Vβ8.4基因修饰T细胞对SCID荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

目的探讨经hTCR Vβ8.4基因修饰的人外周血淋巴细胞(PBMC)转输给SCID小鼠的抑瘤作用.方法建立荷人肝癌细胞BEL-7402的SCID小鼠模型;用脂质体包裹hTCR Vβ8.4基因并转染健康人PBMC,将此PBMC回输入SCID小鼠体内,通过检测瘤重、肿瘤体积大小,并计算肿瘤抑制率来观察hTCR Vβ8.4基因的抑瘤作用.结果回输hTCR vβ8.4修饰的PBMC组(即实验组)SCID小鼠的瘤重(1.402±0.812)g,瘤体大小(2.218±1.518)cm3;未经hTCR Vβ8.4基因修饰的PBMC组鼠瘤重(2.940±1.441)g,瘤体大小(3.591±1.546)cm3;注射等体积的生理盐水组鼠瘤重(4.010±1.777)g,瘤体大小(4.927±4.535)cm3;基因修饰组与PBMC组比较,瘤重抑制率52.31%.结论hTCR Vβ8.4基因能增强PBMC的抑瘤作用,为该基因用于肿瘤的临床基因免疫治疗提供可靠的实验数据.     

以基因表达评价肉仔鸡实用饲粮中锰的适宜水平

目的寻找快速、敏感、恒定的评价肉仔鸡饲粮Mn适宜水平的指标。方法给0～3w龄肉仔鸡饲以不同水平无机锰(Mn)饲粮,检测生长性能、组织Mn含量、心肌细胞线粒体中MnSOD活性及基因表达水平,分析各指标随饲粮Mn水平的线性或曲线反应,并拟合相应的数学模型估测肉仔鸡饲粮中Mn的适宜水平。结果各处理组间生长性能均无显著差异;组织Mn含量、心肌MnSOD活性及其MnSODmRNA水平有显著差异;除7d龄肝脏中Mn含量呈线性上升,其它各日龄组织Mn含量、心肌MnSOD活性及其mRNA水平均可与饲粮Mn含量拟合成相应的渐近线或二次曲线模式(P<0.01)。结论1.实用饲粮条件下体增重、采食量、料重比和腿病发生率等表观生长指标均不是评价肉仔鸡饲粮Mn需要量的敏感指标。2.心肌细胞线粒体中MnSODmRNA水平指标评价肉仔鸡体内的Mn营养状况能比其酶活性等其它指标更快、更敏感、更恒定,且可缩短实验期,减少实验动物数,节省费用,是评价肉仔鸡饲粮Mn营养需要量的最敏感指标,根据该指标所得肉仔鸡饲粮Mn适宜水平为130mg/kg。     

基于ITS条形码及机器学习的黄檀属物种分子鉴别研究

目的 提高黄檀属的物种鉴别成功率,并将机器学习方法与传统的基于距离/系统发育树的方法进行比较,筛选最优的ITS条形码分析方法。方法 所使用的黄檀属物种ITS序列来自实验获得的3条以及从NCBI下载的399条共96个物种。以条形码ITS作为分子标记,对比距离法、系统发育树法及机器学习方法在黄檀属物种的鉴别成功率。结果 在基于机器学习方法的分析中,黄檀属物种的平均鉴别成功率为39.59%,其中BLOG能识别出42个黄檀属物种,其正确序列分类占比为95.75%。另外,SMO、Naïve Bayes、JRip、J48能够识别出34个物种,分别获得了79.10%、58.71%、72.64%、76.37%的正确序列分类占比。基于系统发育树法与距离法的分析分别获得28.13%和36.46%的鉴别成功率。结论 基于机器学习的黄檀属ITS条形码基原识别比距离法/系统发育树法拥有更高的鉴别成功率和社会经济效率。建议优先利用基于ITS条形码的机器学习方法对黄檀属物种进行基原识别。