氢醌诱导下肝细胞XPV基因mRNA表达规律的研究

目的研究氢醌(HQ)对L-02肝细胞XPV基因mRNA表达的影响及其规律,探讨XPV基因在HQ所致肝细胞毒性过程中分子作用机制。方法体外培养的L-02肝细胞经40μmol/L的HQ诱导后,采用实时荧光定量PCR法检测不同时间点(6、12、24和48h)XPV基因mRNA的表达;并检测不同剂量(0、5、10、20、40、80和160μmol/L)HQ诱导24h后,各浓度组XPV基因mRNA的表达。结果在24h的时间范围内,XPV基因在mRNA水平上的表达无论是染毒组(40μmol/L)还是正常对照组,均具有随时间的延长而增加的趋势;到24h时,相对表达量达到最大值,当培养时间达到48h时,该基因的表达则有所下降;此外,在各时间处理组(6h、12h、24h和48h)中,染毒组L-02肝细胞内XPV基因在mRNA水平上的表达均高于正常对照组。各剂量HQ作用24h后,L-02肝细胞内XPV基因mRNA的表达在0～80μmol/L范围内随着剂量的增加而增加,以正常对照组XPV基因的相对表达量为1,各染毒剂量组内XPV基因mRNA的相对表达量分别增至1.20、2.02、2.37、2.67、4.40和2.32倍;80μmol/L时其相对表达量达到峰值,160μmol/L的HQ作用后,其表达却有所下降,但仍高于正常对照组。结论HQ可以诱导XPV基因mRNA的表达变化,并且呈现一定的时间和剂量依赖性,提示XPV基因可能参与了肝细胞对HQ的应答过程。     

β-1，3-D-葡聚糖的遗传毒性研究

目的 检测β-1，3-D-葡聚糖的遗传毒性。方法 采用Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验对受试物进行遗传毒性研究。结果 β-1，3-D-葡聚糖Ames试验在加和不加S9条件下均无致突变性，对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验无诱发微核作用，小鼠精子畸形试验未见精子畸形率增高。结论 β-1，3-D-葡聚糖在本实验条件下，无致突变作用。     

三氯乙烯对肝细胞代谢酶基因与凋亡基因表达的影响

目的：探讨三氯乙烯（trichloroethylene,TCE）对人L02肝细胞代谢酶基因CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1和凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2 mRNA表达水平的影响。方法：以1%二甲亚砜（DMSO）为溶剂对照,用不同浓度TCE（0.25、0.5、1.0和2.0mmol/L）染毒L02肝细胞24h,另外用同一浓度1.0mmol/L TCE染毒细胞3～24h,采用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术检测L02肝细胞中CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1和凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2 mRNA的表达。结果：不同剂量TCE染毒后CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1 mRNA表达明显上升,CYP1A2升高36%～726%,CYP3A4升高56%～525%,CYP2E1升高15%～94%,与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2表达水平也明显升高,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。用1.0mmol/L TCE染毒3～24h,同样发现肝代谢酶基因和凋亡基因表达增加,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论：TCE可诱导L02肝细胞中代谢酶基因及凋亡基因表达变化,肝代谢酶基因和凋亡基因可能在TCE对肝细胞毒性效应中发挥重要作用。     

细胞复制性衰老及早衰过程中组蛋白整体乙酰化改变

目的 检测人胚肺成纤维细胞复制性衰老及过氧化氢诱导细胞早衰过程中组蛋白整体乙酰化修饰的改变.方法 应用细胞免疫荧光实验观察组蛋白乙酰化水平变化,并基于ELISA样反应方法检测组蛋白总体去乙酰化酶的活性变化,荧光定量PCR检测乙酰化酶mRNA表达,荧光定量PCR和Western印迹检测去乙酰化酶表达变化及曲古霉素A对相应酶表达的影响.结果 在细胞复制性衰老及细胞早衰过程中,组蛋白H3和H4整体乙酰化水平逐渐下降;去乙酰化酶活性逐渐降低;与年轻细胞组相比,中年细胞与复制性衰老细胞组P300表达下降;中年细胞组PCAF稍升高,复制性衰老细胞组降低;早衰起始组P300和PCAF均升高,早衰持续组P300降低;中年细胞组HDAC1表达稍降低;复制性衰老细胞组HDAC2稍降低;而HDAC3均降低;早衰起始组HDAC1,HDAC3有不同程度升高;早衰持续组HDAC2,HDAC3降低显著,而HDAC1明显升高.曲古霉素A诱导P300,PCAF表达,而降低HDAC1,HDAC2和HDAC3表达.结论 组蛋白H3和H4整体低乙酰化是衰老细胞的伴随状态;细胞复制性衰老与过氧化氢诱导的早衰内在调控机制存在差别.     

应用胚胎干细胞试验(EST)评价邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)的胚胎毒性

目的利用小鼠胚胎干细胞试验(EST)模型,初步评价邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)的胚胎毒性。方法采用悬滴悬浮法培养小鼠胚胎干细胞(m ESCs),观察受试物对m ESCs分化能力的影响,结合CCK-8法判断受试物对m ESCs及小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)的细胞毒性结果,预测受试物的胚胎毒性。用已知强胚胎毒性化合物5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)、无胚胎毒性化合物青霉素-G(P-G)对模型进行有效性验证,并将经过验证的EST模型用于评价受试物DEHP的胚胎毒性。结果利用建立的EST模型对5-FU、P-G胚胎毒性进行评价,结果表明5-FU为强胚胎毒性,P-G为无胚胎毒性,与文献报道一致;DEHP对m ESCs和3T3的半数抑制浓度分别为IC50m ESCs=315μmol/L(126μg/ml),IC503T3=307μmol/L(122.8μg/ml),m ESCs的半数抑制分化浓度为ID50m ESCs=323μmol/L(129.2μg/ml),经EST模型判断公式计算得出该化合物为弱胚胎毒性化合物。结论建立的EST模型的有效性验证结果与ECVAM的结论一致,可用于胚胎毒性的筛选和评价;经EST模型评价DEHP的胚胎毒性为弱胚胎毒性。     

纳米二氧化硅对HaCaT细胞中PAPR-1基因表达及其启动子甲基化的影响

目的 研究纳米二氧化硅(nm-SiO2)对人皮肤表皮细胞系(HaCaT)细胞中聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1 (poly[ADP-ribose] polymerase 1,PARP-1)基因的表达及其基因启动子区甲基化的影响.方法 分别以2.5、5.0、10.0 μg/ml的nm-SiO2溶液和10 μg/ml的微米级SiO2(micro-SiO2)溶液处理HaCaT细胞24 h;以3μmol/L DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR,DAC)处理48 h 10 μg/ml的HaCaT细胞为阳性对照(DAC组),并设立溶剂对照组(CTRL组).应用荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和蛋白质印迹法(Western-blot法)检测PARP-1在mRNA水平和蛋白水平的表达变化,应用亚硫酸氢盐测序(bisulfite pyrosequence,BSP)法检测PARP-1基因启动子区CpG岛的甲基化状态.结果 HaCaT细胞暴露nm-SiO2 24 h后,经nm-SiO2处理后,micro-SiO2染毒组和2.5μg/ml染毒组PARP-1表达与CTRL组的差异无统计学意义(P＞0.05),与CTRL组比较,5、10 μg/ml染毒组及DAC处理组细胞的PARP-1表达下调,差异有统计学意义(P＜0.05),且其下调水平随着浓度的增大而增高.BSP结果显示PARP-1启动子区-229点甲基化状态升高.结论 nm-SiO2可以降低HaCaT细胞中PARP-1基因的表达,可能与其对PARP-1基因启动子区CpG岛的甲基化影响有关.     

深圳市成年居民初级农产品中铅的暴露风险评估

目的 对深圳市18岁以上成年居民通过膳食暴露铅的风险进行评估。方法 应用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MAS）对2018年深圳市市售的11种初级农产品中铅污染水平进行检测;应用3 d入户的调查方法对深圳市18岁以上622名居民11种初级农产品的消费量进行调查;应用@risk软件以蒙特卡罗算法计算深圳市18岁以上居民通过11种初级农产品对铅的暴露水平,应用暴露边界法（MOE）对暴露风险进行评估。结果 深圳市18岁以上居民通过膳食对铅的总暴露量的最小值为0.023 0 mg/(kg·d)、中位数为0.372 6 mg/(kg·d) 、第95百分位数为0.799 3 mg/(kg·d);从食品污染的角度来看,蔬菜和畜肉中的铅污染是引起深圳成年居民膳食铅暴露风险的主要原因。50%深圳市18岁以上居民通过膳食暴露铅的MOE值大于3.22,95%的深圳成年居民MOE值大于1.5,有0.1%的18岁以上深圳居民通过膳食暴露于铅的MOE值小于1,处于危险的铅暴露模式。结论 深圳市18岁以上居民通过膳食暴露于铅的风险较低,但对膳食铅暴露的监测和评估应持续开展。     

PARG基因沉默在六价铬诱导细胞周期改变中的作用北大核心CSCD

目的深入了解PARG的功能及探讨PARG基因沉默在调节六价铬诱导细胞周期改变的作用。方法使用前期构建的PARG基因缺陷细胞(sh PARG细胞)和正常16HBE细胞作为研究对象,进行0、0.3、0.6、1.2、2.5和5.0μmol/L的六价铬[Cr(Ⅵ)]溶液染毒处理24 h,利用免疫荧光法检测PAR的表达、流式细胞仪观察细胞周期、RTPCR分析ATM和P53基因mRNA水平的表达。结果 Cr(Ⅵ)染毒处理后,正常16HBE细胞的S期明显延长,0、0.3、0.6、1.2、2.5和5.0μmol/L剂量组S期细胞比例分别为18.3%、21.6%、26.0%、30.9%、38.8%和43.2%,G2期明显缩短;sh PARG细胞的S期延长,但比例增幅远小于正常16HBE细胞,0、0.3、0.6、1.2、2.5和5.0μmol/L剂量组S期细胞比例分别为17.0%、19.0%、20.1%、21.2%、24.5%和31.3%。正常16HBE细胞内P53基因表达随Cr(Ⅵ)作用剂量的增加而逐渐升高,PARG缺陷细胞内P53基因表达改变不明显(与对照组相比,P>0.05);Cr(Ⅵ)染毒处理后,两种细胞内ATM基因的表达均增加,但正常16HBE细胞内增加更明显,如:5.0μmol/L的Cr(Ⅵ)作用时,正常16HBE细胞内ATM基因的表达升高可达6.67倍(与对照组相比,P<0.01),而sh PARG细胞内ATM基因表达仅升高2.27倍(与对照组相比,P<0.01)。结论 PARG基因沉默可对抗Cr(Ⅵ)诱导的细胞周期时相改变。     

深圳市市售酒类塑化剂检测结果分析与风险评估

目的 通过检测深圳市售酒中塑化剂的含量,了解塑化剂在酒中迁移污染状况并对其健康风险进行评估,为酒类食品安全提供科学依据。 方法 2014－2016年依据深圳市食品安全风险监测方案,对深圳十个区市售酒类进行采样,按照国家食品污染物监测手册的检测方法进行酒中塑化剂的检测。 结果 全市2014－2016年共检测酒类样品505份,塑化剂超标23份,超标率为4.55%,不同年度间超标率差异有统计学意义(χ²=6.949,P=0.031),呈现逐年下降趋势(χ²_趋势=4.273,P=0.039), 2014年最高(8.13%),2015年最低(2.67%)。主要超标项目是邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)和邻苯二甲酸二异辛酯(di(2-ethylhexyl) phthalate, DEHP)。不同酒类品种塑化剂超标率由高到低依次为其他酒(6.45%)、白酒(5.26%)、红酒(1.96%),但差异无统计学意义(χ²=3.658,P=0.161)。不同采样地点塑化剂超标率坪山区最高(6.06%),龙华区最低(2.63%),但不同区域超标率差异无统计学意义(χ²=1.351,P=0.998)。风险评估显示,深圳市居民每天通过酒类摄入的DBP和DEHP的量分别为0.14 g/(kg·bw)和 0.268 g/(kg·bw),未超过国家食品安全风险评估专家委员会提出的两种物质的每日耐受摄入量[DBP:0. 01 mg/(kg·bw),DEHP: 50 μg/(kg·bw)]。 结论 2014－2016年深圳市售酒类存在塑化剂不同程度的迁移污染,呈逐年下降趋势,主要超标项目是DBP和DEHP,但其含量对饮酒者的健康风险处于可接受范围内。     

深圳市居民铅镉膳食摄入水平评估

目的了解深圳市居民膳食中铅、镉暴露的摄入量,评估深圳市居民膳食铅、镉暴露风险。方法对深圳市市售食品中铅、镉含量进行监测,结合居民膳食摄入量调查结果,应用FAO/WHO推荐的食品中化学污染物膳食暴露评估方法,比照铅、镉的暂定每周耐受摄入量((Provisional tolerated Monthly intake,PTWI),对居民膳食中铅、镉暴露水平进行评估。结果深圳市居民平均每周膳食中铅暴露量为0.003 4 mg/kg BW,占PTWI的13.60%;镉暴露量为0.013 3 mg/kg BW,占PTWI的190.00%。铅、镉贡献率较大的食品均是水产品及其制品、米及其制品。结论深圳市居民膳食中铅暴露水平低于PTWI,镉暴露水平高于PTWI。深圳市居民水产品及其制品、米及其制品的消费量大,对居民膳食铅、镉贡献率较高,仍有必要减少膳食中铅、镉的摄入,尤其是镉的膳食摄入量。