镉对NRK肾细胞PKCα表达的影响及PKC抑制剂BisⅠ的生物学作用

目的：探讨不同浓度氯化镉（CdCl2）对NRK细胞内蛋白激酶Cα（PKCα）mRNA及其蛋白质表达的影响,以及PKC抑制剂Bisindolymalei mide I（Bis I）对镉染毒NRK细胞PKCαmRNA及蛋白质表达的生物学作用。方法：应用实时荧光定量PCR技术检测不同浓度（0、1.25、2.50、5.00、10.00μmol/L）CdCl2对NRK肾细胞处理6h与12h后PKCαmRNA表达的影响,同时用Western blot技术检测CdCl2对NRK肾细胞内PKCα蛋白质表达的影响。用PKC抑制剂Bis I预处理细胞后,用不同浓度CdCl2（0、2.50、5.00μmol/L）进行染毒,再检测PKCαmRNA及蛋白质的表达变化。结果：CdCl2浓度在1.25~10.00μmol/L范围内,可引起NRK肾细胞内PKCαmRNA及蛋白质表达水平升高,并呈时间_剂量_效应关系;PKC抑制剂Bis I能明显抑制镉引起的PKCαmRNA及蛋白质的表达。结论：CdCl2可以诱导NRK肾细胞内PKCαmRNA及蛋白质表达,PKC抑制剂Bis I具有一定程度抑制CdCl2对PKCα的诱作用,因此在抑制CdCl2对生物机体的伤害作用方面具有生物学意义。     

肾细胞癌RASSFlA基因启动子区甲基化状况与表达水平研究

目的检测19例肾细胞癌患者癌组织及癌旁组织Ras相关区域家族蛋白1A（RASSFlA）基因启动子区甲基化情况并检测其mRNA表达水平,探索两者之间的联系。方法收集肾细胞癌患者癌组织及相应癌旁组织19份,分别提取其基因组DNA,以甲基化特异性PCR（Methylation special PCR,MSP）法检测RASSFlA基因启动子区甲基化情况。并以QPCR法检测了RASSFlA基因的mRNA表达水平。结果19例中有lO例肾细胞癌患者癌组织存在高甲基化,mRNA表达水平表达降低,二者之间存在显著负相关性（r=-0．8734,P〈0．01）。结论肾细胞癌中RASSFlA基因启动子区存在高甲基化,并抑制该基因的表达。     

三氯乙烯对肝细胞代谢酶基因与凋亡基因表达的影响

目的：探讨三氯乙烯（trichloroethylene,TCE）对人L02肝细胞代谢酶基因CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1和凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2 mRNA表达水平的影响。方法：以1%二甲亚砜（DMSO）为溶剂对照,用不同浓度TCE（0.25、0.5、1.0和2.0mmol/L）染毒L02肝细胞24h,另外用同一浓度1.0mmol/L TCE染毒细胞3～24h,采用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术检测L02肝细胞中CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1和凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2 mRNA的表达。结果：不同剂量TCE染毒后CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1 mRNA表达明显上升,CYP1A2升高36%～726%,CYP3A4升高56%～525%,CYP2E1升高15%～94%,与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2表达水平也明显升高,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。用1.0mmol/L TCE染毒3～24h,同样发现肝代谢酶基因和凋亡基因表达增加,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论：TCE可诱导L02肝细胞中代谢酶基因及凋亡基因表达变化,肝代谢酶基因和凋亡基因可能在TCE对肝细胞毒性效应中发挥重要作用。     

β-1，3-D-葡聚糖的遗传毒性研究

目的 检测β-1，3-D-葡聚糖的遗传毒性。方法 采用Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验对受试物进行遗传毒性研究。结果 β-1，3-D-葡聚糖Ames试验在加和不加S9条件下均无致突变性，对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验无诱发微核作用，小鼠精子畸形试验未见精子畸形率增高。结论 β-1，3-D-葡聚糖在本实验条件下，无致突变作用。     

应用胚胎干细胞试验(EST)评价邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)的胚胎毒性

目的利用小鼠胚胎干细胞试验(EST)模型,初步评价邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)的胚胎毒性。方法采用悬滴悬浮法培养小鼠胚胎干细胞(m ESCs),观察受试物对m ESCs分化能力的影响,结合CCK-8法判断受试物对m ESCs及小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)的细胞毒性结果,预测受试物的胚胎毒性。用已知强胚胎毒性化合物5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)、无胚胎毒性化合物青霉素-G(P-G)对模型进行有效性验证,并将经过验证的EST模型用于评价受试物DEHP的胚胎毒性。结果利用建立的EST模型对5-FU、P-G胚胎毒性进行评价,结果表明5-FU为强胚胎毒性,P-G为无胚胎毒性,与文献报道一致;DEHP对m ESCs和3T3的半数抑制浓度分别为IC50m ESCs=315μmol/L(126μg/ml),IC503T3=307μmol/L(122.8μg/ml),m ESCs的半数抑制分化浓度为ID50m ESCs=323μmol/L(129.2μg/ml),经EST模型判断公式计算得出该化合物为弱胚胎毒性化合物。结论建立的EST模型的有效性验证结果与ECVAM的结论一致,可用于胚胎毒性的筛选和评价;经EST模型评价DEHP的胚胎毒性为弱胚胎毒性。     

深圳市成年居民初级农产品中铅的暴露风险评估

目的 对深圳市18岁以上成年居民通过膳食暴露铅的风险进行评估。方法 应用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MAS）对2018年深圳市市售的11种初级农产品中铅污染水平进行检测;应用3 d入户的调查方法对深圳市18岁以上622名居民11种初级农产品的消费量进行调查;应用@risk软件以蒙特卡罗算法计算深圳市18岁以上居民通过11种初级农产品对铅的暴露水平,应用暴露边界法（MOE）对暴露风险进行评估。结果 深圳市18岁以上居民通过膳食对铅的总暴露量的最小值为0.023 0 mg/(kg·d)、中位数为0.372 6 mg/(kg·d) 、第95百分位数为0.799 3 mg/(kg·d);从食品污染的角度来看,蔬菜和畜肉中的铅污染是引起深圳成年居民膳食铅暴露风险的主要原因。50%深圳市18岁以上居民通过膳食暴露铅的MOE值大于3.22,95%的深圳成年居民MOE值大于1.5,有0.1%的18岁以上深圳居民通过膳食暴露于铅的MOE值小于1,处于危险的铅暴露模式。结论 深圳市18岁以上居民通过膳食暴露于铅的风险较低,但对膳食铅暴露的监测和评估应持续开展。     

深圳市居民铅镉膳食摄入水平评估

目的了解深圳市居民膳食中铅、镉暴露的摄入量,评估深圳市居民膳食铅、镉暴露风险。方法对深圳市市售食品中铅、镉含量进行监测,结合居民膳食摄入量调查结果,应用FAO/WHO推荐的食品中化学污染物膳食暴露评估方法,比照铅、镉的暂定每周耐受摄入量((Provisional tolerated Monthly intake,PTWI),对居民膳食中铅、镉暴露水平进行评估。结果深圳市居民平均每周膳食中铅暴露量为0.003 4 mg/kg BW,占PTWI的13.60%;镉暴露量为0.013 3 mg/kg BW,占PTWI的190.00%。铅、镉贡献率较大的食品均是水产品及其制品、米及其制品。结论深圳市居民膳食中铅暴露水平低于PTWI,镉暴露水平高于PTWI。深圳市居民水产品及其制品、米及其制品的消费量大,对居民膳食铅、镉贡献率较高,仍有必要减少膳食中铅、镉的摄入,尤其是镉的膳食摄入量。     

肾细胞癌RASSF1A基因启动子区甲基化状况与表达水平研究

目的 检测19例肾细胞癌患者癌组织及癌旁组织Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)基因启动子区甲基化情况并检测其mRNA表达水平,探索两者之间的联系.方法 收集肾细胞癌患者癌组织及相应癌旁组织19份,分别提取其基因组DNA,以甲基化特异性PCR(Methylation special PCR, MSP)法检测RASSF1A基因启动子区甲基化情况,并以QPCR法检测了RASSF1A基因的mRNA表达水平.结果 19例中有10例肾细胞癌患者癌组织存在高甲基化, mRNA表达水平表达降低,二者之间存在显著负相关性(r=-0.8734, P<0.01).结论 肾细胞癌中RASSF1A基因启动子区存在高甲基化,并抑制该基因的表达.     

深圳市市售酒类塑化剂检测结果分析与风险评估

目的 通过检测深圳市售酒中塑化剂的含量,了解塑化剂在酒中迁移污染状况并对其健康风险进行评估,为酒类食品安全提供科学依据。 方法 2014－2016年依据深圳市食品安全风险监测方案,对深圳十个区市售酒类进行采样,按照国家食品污染物监测手册的检测方法进行酒中塑化剂的检测。 结果 全市2014－2016年共检测酒类样品505份,塑化剂超标23份,超标率为4.55%,不同年度间超标率差异有统计学意义(χ²=6.949,P=0.031),呈现逐年下降趋势(χ²_趋势=4.273,P=0.039), 2014年最高(8.13%),2015年最低(2.67%)。主要超标项目是邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)和邻苯二甲酸二异辛酯(di(2-ethylhexyl) phthalate, DEHP)。不同酒类品种塑化剂超标率由高到低依次为其他酒(6.45%)、白酒(5.26%)、红酒(1.96%),但差异无统计学意义(χ²=3.658,P=0.161)。不同采样地点塑化剂超标率坪山区最高(6.06%),龙华区最低(2.63%),但不同区域超标率差异无统计学意义(χ²=1.351,P=0.998)。风险评估显示,深圳市居民每天通过酒类摄入的DBP和DEHP的量分别为0.14 g/(kg·bw)和 0.268 g/(kg·bw),未超过国家食品安全风险评估专家委员会提出的两种物质的每日耐受摄入量[DBP:0. 01 mg/(kg·bw),DEHP: 50 μg/(kg·bw)]。 结论 2014－2016年深圳市售酒类存在塑化剂不同程度的迁移污染,呈逐年下降趋势,主要超标项目是DBP和DEHP,但其含量对饮酒者的健康风险处于可接受范围内。     

GSTM1和GSTM3基因多态性在广东省部分地区健康人群中分布及其基因连锁分析

目的 了解谷胱甘肽-S-转移酶M1和M3(GSTM1、GSTM3)基因多态性在目标人群中分布规律,探索两基因分布之间的联系及其与人群家族史之间的相关关系.方法 应用聚合酶链式反应-2%琼脂糖凝胶电泳、聚合酶链式反应-12%聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法检测广东省部分地区606例调查对象的GSTM1、GSTM3基因型.结果 在调查人群中GSTM1(-)基因型的出现频率为56.8%(339/597);调查对象中GSTM3野生纯合子*A-*A、杂合子*A-*B、突变纯合子*B-*B出现的频率分别为62.3%(335/570)、25.8%(147/570)、11.9%(681/570).GSTM1和GSTM3不同基因型在人群中的联合表达有统计学意义(P＜0.05).有冠心病家族史的个体具有GSTM3*B-*B基因型的概率较低(P＜0.05).结论 GSTM1与GSTM3基因在被调查人群中分布有连锁现象;人群中GSTM3*B-*B基因型的表达与人群冠心病家族史之间有统计学关联.