利用寡核苷酸芯片鉴定多种肠道致病菌方法的建立与初步应用

目前,临床上对腹泻样本的检测主要依靠传统的细菌学培养及生化鉴定,操作方法繁琐,检测周期较长,而利用分子生物学方法如PCR、探针杂交等及免疫学方法也存在特异性差和灵敏度低等问题[1].     

浙江省台州地区2010－2013 年幽门螺杆菌常用抗生素耐药监测

目的 了解浙江省台州地区幽门螺杆菌（HP）对常用抗生素的耐药谱。方法 收集2010 年1 月至2013 年12 月台州市4 家医院住院及门诊39 099 例胃镜检查患者的胃黏膜标本,进行HP分离培养;采用平板掺入法检测分离株对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林、庆大霉素、左氧氟沙星和呋喃唑酮的耐药性。结果 共获得HP临床分离株13 038 株,耐药检测显示,HP对甲硝唑的耐药率＞93%,对阿莫西林、庆大霉素和呋喃唑酮的耐药率＜0.5%。对左氧氟沙星和克拉霉素的耐药率较高,于2011 年达到高点,此后耐药率逐年降低（P＜0.01）;左氧氟沙星和克拉霉素的联合耐药率在2011 年达到最高（P＜0.01）,此后明显下降,但2013 年与2012 年相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 台州地区HP分离株对甲硝唑的耐药率最高,对阿莫西林、庆大霉素和呋喃唑酮耐药率较低,临床治疗应选用阿莫西林、庆大霉素和呋喃唑酮。左氧氟沙星和克拉霉素耐药率有下降趋势,但两药的联合耐药率未出现降低,多耐菌株的出现及其原因应引起重视。     

2 357例幽门螺杆菌感染及抗菌素耐药分析

目的：检测2357例上消化道疾病患者幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染情况及其药物敏感性。方法：对患者胃黏膜组织进行增菌、分离培养、菌落涂片镜检、鉴定；Hp呈阳性者，采用纸片琼脂扩散法（K—B法）进行药物敏感性检测。结果：Hp阳性945例（40．09％）。胃癌、胃炎、消化性溃疡分别为70．27％（26／37），44．40％（737／1660），36．93％（154／417）；胃癌与胃炎、溃疡之间有显著性统计学差异（P〈0．01），胃炎与溃疡之间有明显差异（P〈0．01）。男女性别总感染率分别为59．81％和57．81％，男女性别问差异无显著性统计学差异（P〉0．05），45～55岁为Hp感染多发年龄段。药物敏感试验左氧氟沙星全部敏感；克拉霉素、庆大霉素和痢特灵3种药物的敏感率均在81．90％以上；甲硝唑的耐药率是98．10％（927／945），阿莫西林的耐药率是70．48％（666／945）；且存在多重耐药。结论：Hp是胃癌发生的重要因素，同时也是胃炎和溃疡发病因素。45～55岁之间属于Hp高感染阶段。在治疗时应注意Hp感染菌株对甲硝唑、阿莫西林和克拉霉素等药物耐药。     

基于TaqMan-MGB探针荧光定量PCR技术检定细菌和人基因组拷贝数比值方法的建立

目的建立一种可以检测细菌和人基因组拷贝数比值的方法。方法分别设计细菌和人基因组特异性引物及通用探针。以大肠埃希菌和幽门螺杆菌混合菌液及人全血样本模拟混合样本。采用TaqMan-MGB荧光PCR方法对不同稀释浓度的混合样本进行定量分析。通过比较实测比值(Ct值换算成拷贝数的比值)与理论比值,评估本研究方法的可行性和准确性。结果经变异系数法(CV)分析,6个不同浓度样本(DB1、DB2、DB3、DH1、DH2和DH3)的CV值依次为4.48%、1.57%、4.67%、1.55%、0.49%和1.29%。9组模拟混合样本中,实测比值(DB/DH拷贝数)和理论比值的误差均小于0.1,且两组数值相关性极显著(r=1.000,P0.001)。结论本研究建立的基于TaqManMGB探针荧光定量PCR技术检定细菌和人基因组拷贝数比值的方法重复性和准确度良好,可用于细菌和人类组织样本基因组拷贝数比例的检定。     

浙江金华地区幽门螺杆菌左氧氟沙星耐药与gYrA基因突变研究

目的 分析幽门螺杆菌(Hp)对左氧氟沙星耐药性及左氧氟沙星耐药菌株与敏感菌株间gyrA基因的DNA序列差异,探索gyrA基因突变在Hp左氧氟沙星耐药产生过程中的作用.方法 浙江省金华市人民医院消化科2007年7月至2008年12月进行胃镜检查的慢性胃炎、消化性溃疡的患者,将胃镜活检黏膜标本接种于Hp选择性培养基,37℃微需氧环境培养3～5 d,分离Hp菌株,采用氧化酶试验、过氧化氢酶试验、尿素酶试验和UreA基因PCR扩增鉴定菌种.左氧氟沙星药敏试验采用E-test法,筛选出耐药菌株和敏感菌株.提取Hp菌株基因组DNA,PCR扩增gyrA基因并进行测序并分析.结果 38例临床分离Hp菌株通过左氧氟沙星E-test药敏试验,其中12例最低抑菌浓度(MIC)＞1.0μg/ml,耐药菌株占31.58%,敏感菌株占68.42%.gyrA基因测序结果显示,261、271和272位点在10例耐药菌株存在突变;C261A突变2例,C261G突变1例,G271A突变2例,A272G突变2例,C261A与G271T、A272G突变2例,G271A与A272G突变1例,而在26株敏感菌株未发现突变.结论浙江金华地区分离Hp的临床菌株左氧氟沙星耐药率较高,其耐药与gyrA基因261、271和272位点有关.     

浙江省台州地区1030株幽门螺杆菌临床分离株耐药性分析

幽门螺杆菌(Helieobacter pylori,HP)是慢性胃炎、消化性溃疡的主要致病菌,与胃癌和胃淋巴瘤的发生密切相关[1].近年来,随着抗生素的广泛使用及治疗方案选择不当,导致HP耐药菌株增加.本研究对浙江省台州地区上消化道疾病患者HP感染流行情况及耐药性进行分析.     

荧光定量PCR方法检测儿童下呼吸道感染的人博卡病毒

目的建立并应用检测儿童下呼吸道感染病人博卡病毒的荧光定量PCR方法。方法选择人博卡病毒的NS1基因作为目标基因,设计荧光定量PCR引物和检测探针,以重组质粒为标准品建立标准曲线,从而建立特异性检测人博卡病毒的荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价;应用该方法对下呼吸道感染患儿的痰或吸痰、咽拭子及血清标本进行定量检测。结果本研究以人博卡病毒NS1基因中85bp的特异性保守片段为目标基因建立荧光定量PCR检测方法,质粒标准曲线的相关系数为0.999,灵敏度可达到50拷贝;应用该方法对下呼吸道感染患儿的痰或吸痰、咽拭子和血清标本进行定量检测,在176例痰或吸痰标本中检测到7例阳性标本,阳性率达到3.98%(7/176),另64例咽拭子标本中未检测到阳性标本,总阳性率为2.92%(7/240),240例血清标本均未检测到阳性标本。结论建立的荧光定量PCR方法可以特异、快速、灵敏地对儿童下呼吸道感染的人博卡病毒进行定量检测。痰或吸痰标本较咽拭子或血清标本更适用于人博卡病毒感染的核酸检测。     

蛋白芯片技术在卫生检疫中的应用前景

阐述了蛋白芯片技术基本原理、制备及分析过程、技术特点，应用领域存在的问题。结合卫生检疫工作的内容和特点，对蛋白芯片技术应用于出入境人员传染病监测方面进行探讨。由于出入境人群具有复杂多样、流动性高的特点，并有快速通关的要求，这就要求传染病的检测必须快速、高效、高通量和准确。蛋白芯片技术能进行传染病的检测和特异性分析，具有高通量、快速、高效、操作简单、结果准确、灵敏度高等特点，在卫生检疫传染病检测方面具有很好的应用前景。     

副溶血性弧菌引起食物中毒的微生物学诊断的研究

目的：为快速诊断由副溶血性弧菌引起的食物中毒和血清群，采取芯片扫描和血清学分群进行研究。方法：取食物中毒患者肛拭、污染环境涂抹样、食品等进行副溶血性弧菌分离鉴定。分离到菌株进行血清学分型和芯片扫描诊断。结果：330份样品，分离到62株（18．79％）副溶血性弧菌，其中：肛拭样品250份，阳性59份（23．60％），涂抹样品52份，阳性3份（5．77％）。血清分型表明，3株副溶血性弧菌血清型为01型；3株副溶血性弧菌血清分型为03型。菌株进行芯片扫描能显示副溶血性弧菌阳性反应。结论：实验研究表明，16起由副溶血性弧菌食物中毒事件，主要血清型为01型和03型。病原体悬液用芯片扫描能特异性地获得确切的结果。     

浙江省幽门螺杆菌cagA、vacA基因型的流行病学研究

目的 调查浙江地区幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)基因型的分布及其与临床疾病的关系.方法 采用特异引物聚合酶链反应(PCR)分析262株幽门螺杆菌的vacA基因多态性分布特点,并对其进行初步统计分析.结果 浙江8个地区分离培养的Hp菌株262株,VacA m1b基因型占27.10%(71/262);VacA m2基因型占64.89%(170/262);VacA m1b-m2基因型占4.20%(11/262);不同地区间VacA s区基因型和VacA m区基因型分布差异无统计学意义(P＞0.05).慢性胃炎分离株中VacA m1b基因型占26.47%(27/102);VacA m2基因型占66.67%(68/102);VacA m1bm2基因型占2.94%(3/102).消化性溃疡分离株中VacA m1b基因型占29.41%(40/136);VacA m2基因型占61.76%(84/136);VacA m1bm2基因型占3.68%(5/136).胃癌分离株中VacA m1b基因型占16.67%(4/24);VacA m2基因型占75.00%(18/24);VacA m1bm2基因型占4.17%(1/24).不同临床疾病间VacA m区基因型分布差异无统计学意义(P＞0.05).结论 浙江8个地区Hp菌株的优势基因型为cagA 、vacAs1/m2,vacA的s区和m区的分布与分布个体的临床类型无关.