尿液和脑脊液蛋白测定自动比浊法的评价

目的：评估和证实尿液和脑脊液蛋白测定自动比浊法的性能，方法：用罗氏公司的苯索氯铵试剂，以比浊法进行尿液和脑脊液蛋白测定，并对方法的检测限，病人结果可报告范围，精密度和准确度等作了实验观察，结果：方法的检测低限为0．04g/L，可定量报告的检测限为0．08g/L，病人结果可报告范围为0．08－2．0g/L，批内CV为1．5％，批间CV为2．2％，传统磺柳酸蛋白测定与之比较，二法间尿液Y1＝0．85X＋0．068，r=0.972,脑脊液Y2＝0．86X＋0．056，r=0.980。结论：本法简便，快速，准确且样本用量少（5－15ul)，适合临床实验室推广应用。     

Lp(a)检测方法及在心血管疾病诊治中临床意义的探讨

目的 研究脂蛋白(a)[Lp(a)]的检测方法及其在心血管疾病中的变化和作用。方法 采用免疫比浊法检测血清Lp(a)的含量。结果 冠心病组血清Lp(a)水平明显高于对照组(分别为31.50±16.30和13.90±9.50 mg/dl;P<0.01),而高血压病组(16.20±15.10 mg/dl)和其它类心脏病组(14.80±12.9mg/dl)与对照组均无显著差异(P>0.05)。结论 血清Lp(a)水平的升高与冠心病的发生密切相关,在冠心病的临床诊断和治疗预后中具有重要价值。     

快速、低背景凝胶染色和脱色方法

科研及临床工作中,经常需要用电泳法纯化或分离蛋白质,电泳后其胶染色方法有多种,常见的如考马斯亮蓝(G250、R250)、氨基黑及印度墨水染色法等。这些方法,各具特点,但均存在一些缺点：如需大量价格较贵且有毒性的甲醇及乙酸等溶液进行染色,染色后为降低背景,脱色十分困难,耗时长,过浓的染料溶液用后弃之,容易污染环境。我们参考国外文献及有关实验室经验,改进总结出一种应用考马斯亮蓝G250快速、低背景的二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)胶等蛋白染色、脱色方法。 一、试剂及仪器 1.试剂：1 mol/L HCL,1 g/L考马斯亮蓝G250储存液,5 mmol/L HCL胶平衡液,15 mg G250/L胶染色液(1 ml 1 mol/L HCL及15 ml考马斯亮蓝G250储存液/L),1 mmol/L HCL胶脱色液。 2.仪器：微型胶电泳仪(Miniprotein 3 System,BlO-RAD),多功能电泳仪系统(Multiphorll,Phamaca),普通摇床(上海),荧光成像系统(Fluor-S,BlO-RAD),电泳图像扫描仪：(Bio-Scanner Bio-Med lnstruments lns)。 二、电泳：SDS-PAGE,按文献常规操作。 三、染色、脱色 1.平衡：将电泳胶移至塑料盒中,按每块大胶16cm×20cm 300～500 ml,小胶9cm×10cm 100 ml,加入平衡液,平稳摇动30 min,换新鲜平衡液,重复上述步骤1～2次。 2.染色：弃平衡液,按每块大胶300～500 ml,小胶100 ml,加入染色液,平稳摇动,直至染色程度适合成像检测,通常大于4 h,最好放置过夜。 3.脱色：弃染色液,按每块大胶300～500 ml,小胶100 ml,加入脱色液,平稳摇动2～4 h,直至背景降至合适水平。 4.成像、扫描：上述脱色胶可贮存于1 mmol/L HCL中,待成像处理、密度扫描半定量测定蛋白浓度或干胶后备用。 四、结果 1.背景低; 2. 蛋白条带染色清晰; 3. 脱色快;4. 最低蛋白染色(条带目视清楚)100 ng; 5. 染色蛋白条带或双向电泳斑点于2.0～40 μg蛋白浓度范围,成像扫描分析可呈线性。 五、讨论 本法染料G250用量远远低于其他方法染料用量,减少污染。无需使用浓磷酸、乙醇或甲醇等试剂配制染色液,成本降低。本法染色脱色,背景极低,十分有利于成像扫描分析。