绿脓假单胞菌DNA的分子生物学研究

为使医院感染流行病学调查方法由生物学提高以分子生物学水平。方法选用不同限制性核酸内切酶（ＢａｍＨＩ，ＨｉｎｄＩＩＩ，ＥｃｏＲＩ），对绿脓假单胞菌主要生物型进行染色体ＤＮＡ酶切，凝胶电泳后获得限制性核酸内切酶（ＲＥＡ）图谱，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从Ｅ．Ｃｏｌｉ中分别扩增出１６ｓ，２３ｓ核糖体核糖核酸（ｒＤＮＡ）基因，以（α－Ｐ＾３２）ｄＡＴＰ经缺口平移法标记ｒＤＮＡ作为广谱探针，经Ｓｏｕｔｈ     

第四次全国医学分子微生物学和免疫学学术会议纪要

根据中华医学会２００１年度学术活动计划，为服务国家西部大开发战略，促进相关学科发展。由中华医学会微生物学和免疫学分会组织，军事医学科学院野战输血研究所和第四军医大学微生物教研室共同主办的“第四次全国医学分子微生物学和免疫学学术会议”于２００１年９月１７－２１日在西部边陲新疆乌鲁木齐市召开。出席本次大会的代表，分别来自全国各地方和军队的科研、教学、医疗及其他相关部门和单位，还有来自海外和香港特区的专家、学者以及新疆当地的同行，共计１３０多人。代表中中青年和具有高级专业技术职务者均占半数以上。本次会…     

弗氏柠檬酸杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱. 方法以优化的反应体系及单一随机引物L8,对临床分离的116株C.freundii进行RAPD分析,并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱. 结果 116株临床分离C.freundii共得78种RAPD型. 结论 RAPD法可将C.freundii分型78种.     

弗劳地枸橼酸盐杆菌致小儿腹泻病因探讨

为了解弗劳地枸橼酸盐杆菌引起小儿腹泻的致泻机理,对从腹泻患儿粪便中分离的弗老地枸橼酸盐杆菌采用聚合酶链反应(PCR)技术和家兔肠袢结扎等试验。结果,50株受检菌中共检出产肠毒素菌26株,其中产LT16株、产ST6株、产ST-LT4株。动物眼角膜试验表明枸橼酸盐杆菌不具有侵袭性。结果提示产肠毒素是该菌致患儿腹泻的重要因子。     

医院感染阴沟肠杆菌rDNA指纹图分析

应用ＰＣＲ技术从大肠杆菌中分别扩增出１６Ｓ、２３Ｓ核糖体ＲＮＡ基因（ｒＤＮＡ），以［α－￣３２Ｐ］ｄＡＴＰ经缺口平移标记ｒＤＮＡ后作为广谱探针。选用ＨｉｎｄｉＩＩＩ、ＥｃｏＲＩ、ＢｇＩＩ和ＢａｍＨＩ不同内切酶，对医院感染阴沟肠杆菌及环境分离菌进行染色体ｒＤＮＡ指纹图分析。结果：１０名感染患者、显微外科患者和氧气瓶的分离菌指纹图完全相同，对照菌有差异。证明此次医院感染病原菌属同一克隆株，传播途径为消毒不彻底的上氧设施和吸痰器。该法准确、可靠，特异性强、重复性好，为控制和预防医院感染，追踪传染源和传播途径提供了遗传学信息。     

DNA探针检测痢疾杆菌和侵袭性大肠杆菌的研究——17kb和2.5kb探针及其与Sereny试验的比较

用~(32)P标记17kb和2.5kb两个侵袭基因小片段作探针、分别与168株痢疾杆菌、60株侵袭性大肠杆菌及300株沙门氏菌属等作菌落杂交。结果表明:两个探针均只与携带120—140Md侵袭性大质粒的菌株杂交,而未见与其它对照株产生非特异阳性,但17kb探针能与Is_1序列产生可见的杂交背景。Sereny试验表明,探针杂交阳性的菌株,并非都能引起豚鼠眼结膜炎;而Sereny试验阳性者,经传代保存也可转变为阴性。     

DNA探针检测痢疾杆菌和侵袭性大肠杆菌的研究——Ⅰ探针的制备及效果观察

我们用快速简便提取法制备探针供体菌重组质粒;用透析袋电泳洗脱法回收其17KbEcoR I酶切片段,该片段属福氏5型痢疾杆菌毒力质粒的一部分。用缺口翻译技术制备α~(-32)PdATP标记探针,菌落原位杂交和Southern blot杂交能特异地检测痢疾杆菌和侵袭性大肠杆菌。这些方法适宜于一般实验室开展DNA探针临床诊断和流行病学调查。     

聚合酶链反应检测霍乱弧菌

为快速、准确地检测霍乱弧菌，控制霍乱流行，研究建立了一种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法。根据霍乱弧菌肠毒素ＣＴ基因序列，自行设计一对特异引物，扩增片断为２９６ｂｐ，同时采用一种高效率、快速、简便的方法提取并纯化ＤＮＡ，该法能成功地检测各种样品中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌。应用ＰＣＲ技术和常规分离培养方法对９０９份腹泻患者粪便标本和１８份环境水样标本进行平行检测。结果表明，两种方法的检测结果一致，粪便标本阳性率为４．２％（３８／９０９）；水样标本为２２．２％（４／１８），其中１份粪便标本和１份水样标本，是经过第２次增菌培养后，检出用性，而ＰＣＲ方法未见假阳性及假阴性结果。表明ＰＣＲ方法准确、快速、灵敏，并可在２、３小时内检测出含３个菌细胞的标本。因此，该方法可广泛应用于检测各种临床、环境标本中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌。     

炭疽及其主要类属芽胞杆菌分类鉴定方法

本文记述了用表型、遗传型和热裂解气相色谱法对炭疽杆菌及其主要类属菌的鉴定结果。只依表型特征,可以明确地把炭疽杆菌区分出来。按遗传型鉴定可显示炭疽杆菌和蜡样杆菌较近的亲缘性,炭疽杆菌典型株与蜡样杆菌虽有差别,但非典型株与之差别则不显著。气相色谱法目测指纹图的特征峰,蜡样杆菌和枯草杆菌截然不同;但炭疽杆菌的峰型典型株近似蜡样杆菌,多数非典型株与枯草杆菌不易区分。     

第四次全国医学分子微生物学和免疫学学术会议纪要

根据中华医学会 2 0 0 1年度学术活动计划 ,为服务国家西部大开发战略 ,促进相关学科发展。由中华医学会微生物学和免疫学分会组织 ,军事医学科学院野战输血研究所和解放军第四军医大学微生物教研室共同主办的“第四次全国医学分子微生物学和免疫学学术会议”于 2 0 0 1年 9月 17～ 2 1日在西部边陲新疆乌鲁木齐市召开。出席本次大会的代表 ,分别来自全国各地和军队的科研、教学、医疗及其他相关部门和单位 ,还有来自海外和香港特区的专家、学者以及新疆当地的同行 ,共计 130多人。代表中中青年和具有高级专业技术职务者均占半数以上。此次…