实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌方法的建立和应用

目的建立丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的实时荧光PCR快速检测方法,用于沙门菌属内的分型鉴定。方法根据GenBank公布的丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR检测方法。结果检测体系灵敏度高,纯DNA和菌液的最低检出限分别可达10fg和20CFU/反应体系;特异性好,对71株细菌的检测符合率达100%。20株沙门菌采取盲号模拟血培养标本进行血培养检测及鉴定,检出5株丙型副伤寒沙门菌和4株猪霍乱沙门菌,与试验的菌株相符。70份食品中用实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌均为阴性,而用传统方法分离培养未检出。结论建立的实时PCR检测方法可以快速、特异、灵敏地检测出丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌。     

深圳地区致泻性大肠埃希菌多位点可变数目串联重复序列分析分型方法的研究

目的通过比较多位点可变数目串联重复序列分析（MLVA）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方法,探索更优的致泻性大肠埃希菌（DEC）的快速溯源方法。方法本研究采用筛选的可变数目串联重复序列（VNTR）位点,对DEC菌株进行MLVA分型,并将该方法与金标准PFGE进行比较评估。结果PFGE分型方法将58株DEC分为43种带型,其中3种带型成簇,多样性指数（DI）值为0.965。 MLVA分型方法将58株菌分为42种带型,4种型别成簇,DI值为0.955。 此外,2种方法对2起暴发菌株的分型结果一致。结论MLVA方法与PFGE方法对深圳地区的58株DEC菌株的分型能力差异无统计学意义,但MLVA具有快速、简便、通量高的特点,使得MLVA优于PFGE分型方法,在疾病监测、疾病暴发调查中将会发挥重要的应用价值。     

M肉汤法在沙门菌血清分型中的应用

目的建立一种简便快捷的沙门菌H抗原诱导方法,用于沙门菌的血清分型。方法将沙门菌接种于M肉汤过夜培养进行鞭毛诱导,吸取少量再次进行M肉汤2次诱导,取诱导后的肉汤进行沙门菌血清型鉴定,同时用血平板-滤纸条搭桥法和软琼脂法比对。结果 30株沙门菌同时用3种不同的方法诱导,应用M肉汤法一般1~2次都能鉴定出来,效果比搭桥法和软琼脂法好。应用M肉汤法对369株沙门菌进行血清分型,诱导1次的分型率为81.30%,诱导两次的分型率为97.02%。结论 M肉汤法操作简单、方便、成本低,诱导效果好,适合用于沙门菌血清分型鉴定。     

一起副溶血性弧菌食物中毒的溯源及毒力基因研究

目的对一起副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行分型溯源和毒力基因分析。方法采用荧光定量PCR对分离副溶血性弧菌株检测致热性溶血素TDH基因,并利用脉冲场凝胶电泳进行分子分型,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果从抽检食物中毒样品中分离的5株副溶血性弧菌TDH基因检测结果显示均为阳性;PFGE分型4株副溶血性弧菌带型一致,1株带型与其他分离株有1条带的差异。结论利用脉冲场凝胶电泳对食物中毒病原菌进行分子分型并进行毒力基因检测,为食源性疾病溯源及分子流行病学研究提供科学依据。     

香港海鸥形菌荧光PCR快速检测方法的建立

目的:建立检测香港海鸥形菌的实时荧光PCR方法。方法:根据香港海鸥形菌以16SrDNA基因设计探针和引物,建立检测香港海鸥形菌荧光PCR方法,并对建立的方法进行特异性、灵敏性的评价。结果:检测体系灵敏度高,菌液的最低检出限可达40 CFU/反应体系;特异性好,对329株细菌的检测符合率达100%。结论:建立的实时PCR检测方法可应用于食源性致病菌中香港海鸥形菌的快速检测。     

蜡样芽胞杆菌食物中毒分离株分子分型分析

目的建立蜡样芽胞杆菌的分子分型方法,应用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的溯源研究。方法从2000-2009年广东省深圳市食物中毒暴发和散发病例的临床分离株中挑选47株蜡样芽孢杆菌进行鉴定及生化分型,同时进行vrrA基因PCR扩增并对产物进行测序,用Bio-edit和MEGA软件对DNA序列进行同源性比较。结果传统生化分型:47株蜡样芽胞杆菌中有5株菌不能分型,其余42株菌可分为2型、10型和4型,其中2型16株,占34.04%,10型16株,占34.04%,4型10株,占21.28%;分子分型:47株菌可分为13个基因型MT1-MT13,其中MT13型19株,占40.43%,MT1型8株,占17.02%,MT10型4株,占8.51%。结论 vrrA基因作为蜡样芽胞杆菌分子分型的一个多态性遗传标记,可用于蜡样芽胞杆菌DNA分子分型研究,对食物中毒溯源有重要意义。     

2010—2021年深圳市ST314肯塔基沙门菌遗传特征和耐药分析

目的 了解深圳市ST314肯塔基沙门菌流行情况、遗传特性及耐药特征。方法 对2010—2021年深圳市疾病预防控制中心食源性疾病监测网络收集的14株ST314肯塔基沙门菌全基因组测序进行系统发育进化分析、耐药基因及质粒检测;采用微量肉汤法稀释法进行药物敏感性实验。结果 共收集57株肯塔基沙门菌,14株为ST314。ST314肯塔基沙门菌全球系统发育树显示,深圳分离株与越南和泰国等东南亚国家的分离株聚集分布在clade 314.2上,且深圳本地菌株间单核苷酸多态性距离较大,说明为散发。在ST314肯塔基沙门菌基因组检测到9类共17个耐药基因/突变,携带3种产超广谱β-内酰胺酶基因,包括bla_CTX-M-24(14.3%,2/14)、bla_CTX-M-55(7.1%,1/14)、bla_CTX-M-130(14.3%,2/14),均位于质粒上。关于喹诺酮类的耐药因子,在基因组中鉴定出2种质粒介导的喹诺酮耐药基因：qnrB6(71.4%,10/14)和aac(6′)Ib-cr(78.6%,11/14),一种喹诺酮耐药决定区突变T...     

新生儿科医务人员鼻拭子与临床分离MRSA的分子分型

目的了解深圳市儿童医院新生儿临床分离株和该科医务人员鼻拭子耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分子生物学特征及耐药性。方法收集新生儿科临床分离的MRSA以及新生儿科医务人员鼻拭子分离的MRSA 26株,对其进行多位点基因分型(MLST分型)、spa分型、SCCmec分型及脉冲场凝胶电泳(PFGE),同时检测pvl基因,并进行14种抗菌药物药敏试验。结果在26株MRSA中,痰占53.8%,医务人员鼻拭子筛查检出2株。MLST分型共5种,其中ST59占76.9%。spa分型有8种,t437占65.4%。SCCmec分型只有2种,SCCmecⅣ型20株(76.9%)、SCCmecV 4株(15.4%)。PVL基因检测,pvl阳性率15.4%。通过PFGE分析,从新生儿科护理人员的鼻拭子分离的一株MRSA与一株从患者分离的菌株100%同源。药敏试验结果显示所有MRSA对呋喃妥因、奎奴普丁/达福普汀、万古霉素、喹诺酮类抗菌药物100%敏感,而对红霉素、克林霉素和四环素耐药率较高,均在50%以上。结论本研究新生儿科临床分离的MRSA中,最常见的克隆是MRSA-ST59-SCCmecⅣ-t437,在新生儿MRSA的经验性治疗中不宜首选红霉素和克林霉素。     

深圳市医务人员手卫生现状调查

目的了解深圳市医务人员手卫生现状及其影响因素,以改善和提高手卫生质量。方法采用问卷调查和随机抽查方法,对本辖区内各级医疗机构医护人员手卫生执行情况进行了调查。结果深圳市医疗机构医务人员手部卫生知识掌握尚可,但洗手执行率普遍很低。接触病人黏膜、破损皮肤或伤口后洗手执行率仅31.40%,直接接触病人前洗手执行率仅9.76%。洗手方式以使用洗手液为主,占91.88%;干手方式以一次性纸巾擦干为主,占61.37%。工作忙、时间紧是影响手部卫生依从性的最主要因素。结论深圳市医务人员手卫生现状不理想,手卫生执行率较低,应强化手卫生意识,完善医院洗手设施,重点是强制执行手卫生制度。     

深圳市鼠疫宿主动物及媒介监测分析

目的通过对深圳市鼠疫宿主动物及媒介的监测和分析,为鼠疫防治工作提供依据。方法采用笼日法;采集全部活鼠体表蚤鉴定后分类;采用鼠疫间接血球凝集试验（IHA）查鼠血清F1抗体,脏器压印法分离鼠疫耶尔森氏菌。结果 2005年共捕获鼠形动物472只,捕获率8.25%,隶属于2目2科3属4种,褐家鼠占87.50%;2010年共捕获鼠形动物320只,捕获率7.52%,隶属于2目2科4属5种,褐家鼠占94.06%;两次监测均显示褐家鼠为本市优势鼠种。南山区鼠密度下降趋势明显,二者差异有统计学意义（χ2=48.7,P〈0.001）。2005年发现129只鼠形动物寄生565匹印鼠客蚤,染蚤率为27.33%,总蚤指数为1.20;2010年发现35只鼠形动物寄生79匹印鼠客蚤,染蚤率为10.93%,总蚤指数为0.25。染蚤率（χ2=31.2,P〈0.001）和总蚤指数（χ2=1 130.0,P〈0.001）呈下降趋势。2005年获鼠血清458份,2010年获鼠血清315份,鼠疫F1抗体检测均为阴性。2005年鼠脏器压印培养407份,2010年鼠脏器压印培养320份,均未分离出鼠疫杆菌。结论深圳市未发现鼠间鼠疫疫情,鼠疫媒介生物密度呈下降趋势,南山区鼠密度下降趋势明显。