丙戊酸对HL-60/HT细胞P27Kip1 、P170表达水平及耐药性的影响

目的 观察丙戊酸对白血病细胞P27Kip1、P170表达水平和耐药性的影响,探讨其可能的作用机制. 方法 递增压力选择培养法建立白血病耐药细胞株HL-60/HT,MTT法检测丙戊酸作用前后细胞的增殖情况及对Ara-C耐药性的改变,流式细胞术测定HL-60细胞、HL-60/HT细胞中P27Kip1、P170的表达和细胞周期. 结果 成功诱导培养建立耐药HL-60/HT细胞,其对HT、VCR、DNR、Ara-C的耐药倍数分别为9.30、5.20、4.91、3.65倍,耐药性能稳定.HL-60/HT细胞P27Kip1表达水平明显低于正常人单个核细胞及HL-60细胞(P<0.05),P170表达水平则明显高于正常人单个核细胞及HL-60细胞(P<0.05). 丙戊酸+Ara-C联合用药对HL-60、HL-60/HT细胞的生长抑制率明显高于单独用药的丙戊酸组和Ara-C组,q值分别为1.37和1.51,说明合用具有协同作用.丙戊酸作用于HL-60、HL-60/HT细胞后,细胞中P27Kip1表达水平、G1期细胞比加药前增加(P<0.05);P170表达水平在加药前后无明显变化(P>0.05). 结论 耐药白血病HL-60/HT细胞中P27Kip1的表达低于敏感细胞HL-60,丙戊酸能抑制HL-60/HT细胞增殖,并降低其对Ara-C的耐药性.作用机制可能与改变P27Kip1的表达、增加G1期细胞含量有关,与P170作用无关.     

异基因外周血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血16例疗效分析

目的：评价异基因外周血干细胞移植（ Allo－PBSCT）治疗重型再生障碍性贫血（ SAA）患者的安全性及疗效。方法回顾性分析接受Allo－PBSCT的SAA临床资料,其中接受同胞HLA相合供者移植8例,亲缘单倍体供者移植4例,非血缘移植4例;预处理方案为环磷酰胺＋抗胸腺细胞球蛋白±氟达拉滨或环磷酰胺＋白消安＋抗胸腺细胞球蛋白;移植物抗宿主病（ GVHD）预防方案联合应用环孢素＋短程甲氨蝶呤±酶酚酸酯;输注单个核细胞（MNC）（5.3～69.5）×108· kg－1,中位数为7.5×108· kg－1,CD34＋细胞（0.47～16.1）×106· kg－1,中位数为5.8×106· kg－1。结果16例患者均获得造血重建,7例患者发生急性GVHD,2例患者发生慢性GVHD。无移植物排斥。移植后随访1～73个月,中位随访时间23个月,14例患者生存,移植相关死亡2例。预期5年总体生存率为（83±11）％。结论 Allo－PBSCT治疗SAA患者安全有效。     

正常妊娠和妊高征患者血小板活化的研究进展

正常妊娠时孕妇血液系统发生显著变化，随着孕期进展，逐渐趋向高凝状态。妊高征作为妊娠特有的疾病，发病率较高，严重威胁母儿健康，其基本病理之一是血凝亢进。血小板在止血、凝血、血栓形成中起着极其重要的作用，活化的血小板是血栓的主要成分，也是血栓形成的重要因素。     

家兔动脉粥样硬化与血小板源内皮型氧化氮合酶表达的相关性

目的 探讨家兔动脉粥样硬化及斑块形成与血小板源内皮型氧化氮合酶(eNOS)表达的关系. 方法 设立模型组、治疗组和非治疗组及对照组,每组家兔6只.模型组、治疗组和非治疗组每天给予胆固醇饮食,至12周建立家兔动脉粥样硬化模型,建模后继续喂养至24周,同时治疗组服用普伐他汀10 mg/d;非治疗组仅给予普通饮食.实验终点剥离家兔主动脉观察大体和组织病理形态,反转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)方法 检测血小板源eNOS/mRNA水平. 结果 模型组和非治疗组均可见明显动脉粥样硬化和(或)斑块形成;主动脉最大脂纹或斑块厚度占整个血管壁厚度的百分比,对照组、模型组、治疗组和非治疗组分别是0.04±0.02、0.82±0.16、0.33±0.18和0.77±0.14,治疗组与非治疗组比较,差异有统计学意义(F=33.759,P=0.001).血小板(2～4×108/ml)eNOS mRNA表达在对照组、模型组、治疗组和非治疗组分别是1.02±0.28、0.41±0.27、1.00±0.77、0.40±0.29,治疗组较非治疗组明显增高(F=3.544,P=0.02). 结论 血小板源eNOS表达与动脉粥样硬化及斑块的形成呈负相关;普伐他汀对动脉粥样硬化及斑块的逆转作用可能与血小板源eNOS有关.     

恶性肿瘤合并弥散性血管内凝血68例临床分析

目的:探讨恶性肿瘤合并弥散性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation,DIC)的临床特点及诊治。方法:对68例恶性肿瘤合并DIC患者的临床资料进行分析。结果:血小板减少63例,纤维蛋白原<1.5 g/L41例,FDP>20 mg/L62例,D-二聚体升高29例。68例患者中治愈37例,显效10例,总有效率69.1%。自动出院3例,死亡18例。结论:颅内出血是影响急性白血病合并DIC预后的不利因素;急性早幼粒白血病诱发的DIC是在疾病初发期;早期肝素抗凝治疗,积极治疗原发疾病,是DIC抢救成功的关键。     

丙戊酸诱导白血病HL-60细胞凋亡及其对h-tert基因表达的影响

为了探讨丙戊酸（valproic acid,VPA）对白血病HL-60细胞诱导凋亡的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验（CCK-8法）观察不同浓度VPA在不同作用时间对HL-60细胞增殖的影响,采用荧光显微镜检及流式细胞术检测细胞凋亡,并观察VPA作用后HL-60细胞端粒酶亚单位h-tert基因、凋亡相关蛋白表达和caspase-3活性的变化。结果表明：VPA呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖（r=-0.87）.,诱导细胞凋亡;同时,抗凋亡蛋白BCL-2表达明显下降,促凋亡蛋白BAX表达上调,caspase-3活性增强,h-tert mRNA表达逐渐下降,HL-60细胞的凋亡率与h-tert mRNA表达呈负相关。结论：VPA可抑制白血病HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;VPA可能通过下调h-tert mRNA、BCL-2蛋白表达,上调BAX表达及增强caspase-3活性而发挥抗白血病作用。     

普伐他汀对家兔血小板源一氧化氮系统影响的实验研究

目的动态观察普伐他汀治疗前后血小板源一氧化氮(NO)系统的变化及其与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)进程的关系。方法高胆固醇饲养诱导AS新西兰白兔模型30只。设普伐他汀药物干预组(A组,0周时开始服用普伐他汀10mg/d至24周)、普伐他汀药物治疗组(B组,在高胆固醇饲养(12周时开始服用普伐他汀10mg/d至24周)、无药物对照组(C组,0~24周均不用药)。采用RT-PCR方法检测A、B、C三组在0,6,12,18,24周不同时间血小板源内皮型氧化氮合酶(eNOS)基因mRNA和诱导型氧化氮合酶(iNOS)基因mRNA表达、氧化氮合酶(NOS)活性及NO含量的变化;通过大体病理形态证实不同时间大动脉AS程度及斑块形成情况。结果血小板源eNOSmRNA在0,6,12,18,24周时的表达量:A组无明显改变;B组分别是0.95±0.77,0.53±0.33,0.49±0.25,0.83±0.28,1.00±0.77(P<0.05);C组分别是0.82±0.16,0.40±0.29,0.33±0.29,0.51±0.23,0.19±0.12(P<0.05)。6,12周时B组和C组与A组比较明显降低(P<0.05);18,24周时,B组与A组无明显差异,但A组和B组较C组明显增高(P<0.01)。iNOS mRNA表达在A、B、C三组不同时期均无变化。NOS活性及NO含量在三组不同时期变化与eNOS mRNA相似。大体形态:A组未见AS形成;B组12周时见大动脉内膜粗糙,有大量脂纹,24周时有部分大动脉仍有脂纹,但内膜较光滑,未见斑块;C组24周时各大动脉均见大量斑块或脂纹。结论随着高胆固醇血症(HC)及AS的形成,血小板源eNOS mRNA表达量、NOS活性及NO含量逐渐降低;普伐他汀能上调血小板源eNOSmRNA表达,提高NOS活性,并能稳定AS病变的继续发展或使其逆转。     

家兔动脉粥样硬化与血小板源内皮型氧化氮合酶表达的相关性

Objective To explore the correlation of atheroselerosis progression and the expression of platelet derived endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in rabbits. Methods A total of 24 male New Zealand white rabbits were used in this study. Six of the animals were fed with normal food (control group). Eighteen rabbits were fed with cholesterol-rich food (1 g/d) for 12 weeks to establish the atherosclerosis model. Among 18 models, 6 rabbits were executed immediately and their aorta and platelet samples were collected for further analysis (model group), 6 rabbits were orally administered with pravastatin (10 rag/d) for additional 12 weeks (treated group), and the remaining 6 rabbits were left untreated until the end of the study (untreated group). The control, treated and untreated animals were then killed, and the aorta and platelet samples were collected for eNOS expression analysis (RT-PCR). Results The aorta samples in model and untreated group exhibited rough intima and a lot of longitudinal fatty streaks, which indicated that atherosclerosis models were established successfully. While in treated group, the degree of atherosclerosis was decreased. The average percent of thickness of fatty streaks or atheroselerotic plaques relative to the whole thickness of vessel walls was 0. 04±0. 02, 0. 82±0. 16, 0. 33±0. 18,0. 77±0. 14 in control, model, treated and untreated group, respectively. The thickness of fatty streaks or atherosclerotic plaques was significantly increased in the model and untreated groups and decreased in treated group compared with the control group (both P<0. 05). The expressions of platelet derived eNOS/mRNA were 1. 02± 0. 28, 0. 41± 0. 27, 1.00 ± 0. 77, 0. 40±0. 29 in control, model, treated and untreated group, respectively. The expression of eNOS/mRNA was markedly decreased in model group and untreated group compared with the control group, but was increased in treated group compared with untreated and model groups (F=3. 544, P = 0. 024). Conclusions There is a negative correlation between eNOS expression and atherosclerosis development, which suggests that the reversal effect of pravastatin on atheroselerosis progression and plaque formation may relate to the expression of platelet derived eNOS.     

成人缺铁性贫血的诊断及治疗

铁代谢 1.铁的分布 铁广泛分布于人体各种组织中.人体内铁可分为功能铁和贮存铁两部分,前者约占70%,包括血红蛋白铁、肌红蛋白铁、与转铁蛋白、乳铁蛋白结合的铁和含铁酶类等;后者约占30%,包括铁蛋白和含铁血黄素.     

白血病K562细胞XIAP表达RNAi下调对凋亡及化疗敏感性影响的研究

目的:通过RNAi下调K562细胞X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达,观察XIAP下调后细胞凋亡及对化疗药物敏感性的变化情况。方法:K562细胞分为3组,实验组和阴性对照组分别用XIAP siRNA及阴性对照siR-NA转染,空白对照组不做任何转染处理。用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测转染后各组细胞XIAP mRNA及蛋白的表达,CCK-8法检测各组细胞对阿糖胞苷和依托泊苷敏感性的变化,流式细胞仪和Hochest染色法检测各组细胞加入不同化疗药物后细胞的凋亡情况。结果:转染后48h,实验组XIAP mRNA及蛋白表达量较阴性对照组分别下降约70.0%和60.0%,P<0.05;实验组细胞对依托泊苷和阿糖胞苷的敏感性分别提高2.77和2.28倍,P<0.05;转染siR-NA 48h后,实验组与阴性对照组、空白对照组间凋亡率差异无统计学意义,P>0.05;转染siRNA 6h后加入依托泊苷孵育48h,实验组凋亡率(41.3±1.6)%较阴性对照组(34.3±1.9)%和空白对照组(30.6±1.7)%明显增加;加入阿糖胞苷孵育48h,实验组凋亡率(47.4±1.1)%较阴性对照组(37.0±1.8)%和空白对照组(35.5±1.7)%明显增加,P<0.05。结论:XIAP siRNA能特异性下调K562细胞的XIAP mRNA和蛋白质水平的表达,提高K562细胞对依托泊苷和阿糖胞苷的敏感性,同时伴化疗药物诱导的细胞凋亡增强。