星形孢菌素诱导小鼠T细胞中Caspase非依赖性细胞死亡方式的研究

目的:研究星形孢菌素(staurosporine,STS)诱导的小鼠T细胞中Caspase非依赖性细胞死亡方式,探讨T细胞死亡的分子机制。方法:在加入或不加Caspase抑制剂z-VAD-fmk(20μmol.L-1)情况下,检测STS(100 nmo.lL-1)刺激后小鼠T细胞的凋亡率,DNA ladder,线粒体膜电位变化以及凋亡相关蛋白AIF,细胞色素C和Bax等的变化。结果:STS诱导的小鼠T细胞凋亡中存在Caspase非依赖性细胞死亡方式,其DNA ladder改变与Caspase依赖性死亡方式不同,线粒体膜电位依然下降,AIF从线粒体转移到细胞质中要早于细胞色素C,且两者的转移需要Bax结合到线粒体上。结论:在STS诱导的小鼠T细胞死亡中,Caspase非依赖性死亡方式可能是Caspase依赖性死亡方式的替代途径,这对于维持T细胞的数量和保证免疫系统功能的正常发挥具有十分重要的意义。     

中远红外线对荷瘤鼠免疫功能的影响

近年来,各国医学家们在实验和临床研究做的大量工作证明,中远红外线可治愈或延长癌症病人的生命。本实验通过中远红外线对荷瘤（S-180和H-22肝癌）小鼠的照射,测定小鼠的非特异性与特异性免疫的功能状态,探讨中远红外线具有提高机体免疫功能作用的程度。     

抗肿瘤抗生素平阳霉素研究与临床应用40年

平阳霉素是由我国学者自主研制并投入临床应用的抗肿瘤药物,是博来霉素类抗肿瘤药物的新品种.日本报道的博来霉素(bleomycin)是含有13种组分的复合物,其中以A2为主要组分,而A5只占1%左右;平阳霉素则是单一A5组分的制品.平阳霉素的研究开发与临床应用经历了长期的过程.1969年从浙江省平阳县土壤分离发现产生菌,1978年通过鉴定投产并进入临床应用,1982年获国家发明奖二等奖,平阳霉素被收载于中国药典,1994年进入首批国家基本药物目录,迄今已经历40年.平阳霉素已成为我国临床较常用的抗癌药物.平阳霉素用于制备抗体靶向药物的潜在价值正在进行研究.     

单链抗体与力达霉素辅基蛋白在大肠埃希菌表达的发酵工艺

目的 确定工程菌E.coli BL21(DE3)StarTM/pEFL表达抗Ⅳ型胶原酶单链抗体与力达霉素辅基蛋白构成的融合蛋白Fv-LDP的摇瓶发酵工艺.方法 比色法测定菌体浓度,干燥失重法测定细菌干重,SDS-PAGE-Spot Denso法测定融合蛋白Fv-LDP表达量,单因素或正交设计优化发酵工艺.结果 确定了融合蛋白Fv-LDP表达的最佳培养基配方和培养条件,融合蛋白Fv-LDP表达量为830μg/ml左右,比LB培养基的产量提高5.6倍.结论 优化工程菌发酵工艺大大提高了融合蛋白Fv-LDP表达水平,不仅为下一步中试研究和规模化生产奠定了基础,而且为其它生物来源的抗体和抗生素组分在基因工程大肠埃希菌的生产提供了发酵方面的实验证据.     

抗肿瘤抗生素C1027对人结肠癌HCT 8细胞凋亡相关基因表达的影响

目的:研究抗肿瘤抗生素C1027 对人结肠癌HCT-8 细胞凋亡相关基因表达的影响。方法:利用cDNA 排列(cDNAarrays)、Northern 杂交、RT-PCR 检测技术。结果:用10 nmol·L^-1 C1027 处理HCT-8 细胞8 h 后,利用cDNA 排列检测,发现C1027 可以促进TRIP,TRAF3 ,DR4 ,MCH6 ,MCH4,Apo-3 ,DR5,ABLL,STAT1 等基因的表达,抑制rhoC的表达。用Northern 杂交及RT-PCR 也得到了同样结果。结论:C1027 可能通过调节TNF 受体家族有关的凋亡信号传导通路,诱导细胞凋亡,发挥抗瘤活性。     

载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌细胞中糖原合成酶激酶3β表达的研究

目的构建和筛选能高效、特异性抑制人GSK-3β基因表达的siRNA表达载体,探讨其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法提取人L02细胞总RNA,RT-PCR扩增GSK-3β基因序列,克隆至pSEB-HUS真核表达载体,构建pSEB-G重组质粒。将设计、合成的3条靶向GSK-3β基因编码区的siRNA及阴性对照分别克隆至pSEB-G,构建siRNA表达载体pSEB-si1-G、pSEB-si2-G、pSEB-si3-G及pSEB-siN-G。将siRNA表达载体瞬时转染HepG2细胞,通过绿色荧光信号、RT-PCR和Western blot观察和检测其对GSK-3β基因的抑制效果,MTT实验和caspase-3活性分析检测其对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。结果经双酶切及测序证实,所构建si RNA表达载体目的基因大小、序列与预期相符。瞬时转染HepG2细胞后,其中的pSEB-si1-G能使细胞中绿色荧光信号明显减少,可显著抑制GSK-3βmRNA的表达及蛋白的合成,并使HepG2细胞增殖明显降低,caspase-3活性显著升高。结论成功构建了靶向GSK-3β基因的siRNA表达载体,沉默GSK-3β能显著抑制HepG2细胞的生长并诱导其发生凋亡。     

老化对神经白细胞素mRNA表达的影响

运用促分裂素诱导T细胞因子倍增技术和胞浆印迹杂交方法研究老化对小鼠神经白细胞素 (NLK)基因表达的影响。结果表明 ,5月龄和 2 7月龄小鼠相比较 ,后者的mRNA水平明显下降 ,仅为前者的 35 .9% ,两者NLKmRNA水平高峰均位于伴刀豆球蛋白A(ConA)刺激培养后 48h。Northern印迹分析证明 ,5月龄与 2 7月龄小鼠NLKmRNA的位置均无移动 ,但 5月龄小鼠的NLKmRNA的显影比 2 7月龄的颜色深。综合以往研究结果 ,作者认为 ,老年小鼠脾淋巴细胞中NLK ,IL 2 ,IL 3及GM CSF基因表达水平的下降 ,是由于它们的基因表达能力下降所引起的。     

mTOR信号通路与衰老

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种进化上十分保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,能对氨基酸、应激、氧、能量和生长因子等信号作出应答,并将信号传导到下游,最终调节细胞的生长和增殖.近几年研究发现,降低无脊椎模式生物中TOR通路的活性可增加寿命,雷帕霉素可延长实验鼠的寿命,表明mTOR通路与机体衰老过程的调控具有密切关系研究mTOR通路与衰老的关系及其调节衰老的机制对延迟多种病理发展并最终延长人类寿命具有重要意义     

力达霉素经线粒体依赖通路介导细胞凋亡

力达霉素(lidamycin，LDM)是具有我国自主知识产权的烯二炔类抗生素，具有较强的抗肿瘤活性，其抗肿瘤机制有待深入阐明。本研究主要利用人肝癌BEL-7402和乳腺癌MCF-7细胞研究了力达霉素对线粒体凋亡通路相关因子的影响。通过MTT法检测不同剂量力达霉素对肿瘤细胞增殖毒性；蛋白印迹技术检测线粒体和细胞质细胞色素c、总Bax，Bcl-2及p53表达；RT-PCR检测p53和bax mRNA表达等。结果发现，LDM能迅速激活肿瘤细胞线粒体凋亡通路，在2 h内就引起线粒体中细胞色素c释放至细胞质中。同时Bcl-2家族成员中促凋亡成员Bax持续增加，而抗凋亡成员Bcl-2先增加后减少。p53蛋白在6 h显著增加。Bax蛋白表达升高与其mRNA转录水平升高有关，p53蛋白表达升高与转录后水平有关。 Caspase抑制剂可以部分抑制LDM的增殖毒性。因此LDM可以通过激活细胞色素c启动的线粒体凋亡通路发挥抗肿瘤作用。     

SIRT1去乙酰化酶抑制剂引起人乳腺癌MCF-7耐药细胞凋亡的机制

本文建立一种高灵敏度的液质联用方法用于快速测定大鼠血浆中维胺酯的浓度。采用蛋白沉淀法制备样品； 色谱柱为Agilent TC C₁₈柱(150 mm×4.6 mm ID， 5 μm)， 流动相为甲醇-水-甲酸(93∶7∶0.1)， 辛伐他汀作为内标； 在三重四极杆串联质谱仪上， 采用大气压化学离子化(APCI)， 正离子方式选择性离子模式进行监测； 血浆浓度在0.05～50 ng·mL^-1线性关系良好， 定量限为10 pg·mL^-1， 日内、 日间精密度分别在95.97%～104.43%， RSD在4.63%～10.69%。本文利用该方法对大鼠进行药代动力学研究， 3个剂量 (2.5、 5和10 mg·kg^-1)大鼠灌胃给药后的药代动力学参数分别为T_1/2: (11.28±7.23)、 (8.90±3.82)、 (8.01±5.65) h； AUC_0-∞: (103.41±61.46)、 (190.23±74.99)、 (421.66±229.20) ng·h·mL^-1； MRT: (6.31±0.75)、 (5.98±0.71)、 (6.18±0.97) h； CL/F: (30.10±13.67)、 (29.58±10.59)、 (31.18±17.51) L·h^-1·kg^-1； V_d/F: (414.94±159.82)、 (356.16±139.85)、 (369.28±322.72) L·kg^-1。