人乳头瘤病毒16L1-E5表达质粒的构建及其蛋白表达

目的构建人乳头瘤病毒16L1-E5的原核表达质粒,并进行表达融合蛋白,为下一步探讨该蛋白是否能作为疫苗的研究作准备。方法以本室已构建好的阳性质粒pET32（＋）／HPV16E5为模板,PCR获得E5基因,经SalI和NotI双酶切插入已构建好的pGEX4T-1／HPV16L1,通过筛选获得正确的阳性克隆pGEX4T-1／HPV16L1-E5。pGEX4T-1／HPV16L1-E5转化入BL21感受态细胞,经IPTG诱导进行目的蛋白的表达,通过测定不同时间、不同IPTG浓度和不同温度时目的蛋白表达情况,获得蛋白表达的最佳条件,SDS-PAGE和Westernblot检测蛋白表达。结果成功构建了质粒pGEX4T-1／HPV16L1-E5,在1mmol／L IPTG、34℃、4h诱导获得最大量的目的蛋白表达。结论成功构建的pGEX4T-1／HPV16L1-E5质粒能表达出目的蛋白,为进一步研究目的蛋白功能打下了坚实的基础。     

大鼠γ-干扰素诱导蛋白-10在大肠杆菌中的表达和鉴定

目的 原核表达大鼠γ-干扰素诱导蛋白-10,并对其进行鉴定。方法 从大鼠脾细胞中提取RNA,用RT-PCR方法得到IP-10cDNA,双酶切将其插入pET-32a（＋）载体中。重组质粒pET-32a（＋）-IP-10经酶切、PCR及测序鉴定后转化大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达。结果 所获得的大鼠IP-10克隆,经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS-PAGE和Westem blot分析获得证实。结论 已成功构建原核表达载体pET-32a（＋）-IP-10,并使其在大肠杆菌中获得了融合表达。     

小鼠MIP-1α-DT390重组免疫毒素原核表达载体的构建及鉴定

目的 构建小鼠MIP-1α基因和白喉杆菌外毒素DT390基因的原核融合表达载体,诱导并鉴定该蛋白的表达.方法 通过RT-PCR获得mMIP-1α基因,通过PCR扩增质粒SPα-DT390获得DT390基因,酶切、连接,构建原核表达载体pET-32a( )-mMIP1-1α-DT390,重组质粒证实构建成功后,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导融合蛋白表达,并用SDS-PAGE和蛋白免疫印迹法鉴定.结果 成功构建了mMIP-lα与DT390基因的原核融合表达载体pET-32a( )-mMIP-Iα-DT390,重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达,表达蛋白的相对分子质量与预期值一致,并可被抗mMIP-1α和抗白喉毒素的特异性抗体所识别.结论 获得了mM皿1α与DT390融合基因在原核系统中的稳定表达,为研究其临床应用奠定了基础.     

杨氏骨科小夹板外固定疗法介绍

目的:介绍杨氏骨科小夹板外固定疗法的特点,为深入研究中医骨科外固定疗法奠定基础。方法:记录杨氏学术传人周太安主任医师骨折外固定操作要点,并进行生物力学分析和实验模拟。结果:发现其操作要点的科学性,模拟试验成功。结论:该流派小夹板固定是可行的、安全的。     

产道损伤347例临床分析

子宫下段 ,宫颈和阴道于分娩期或手术操作过程中发生裂伤是产科伴发症 ,严重者如果不及时处理 ,可危及母婴生命安全。本文总结我院 1997年 1～ 12月共 34 7例产道损伤并对原因、处理及防治方法进行讨论。1　临床资料我院 1997年 1～ 12月份住院分娩的孕产妇共计1542人次 ,发生产道损伤 34 7例 ,其发生率为 2 2 5% ,无一例死亡。其中阴道损伤 30 5例 ,占 87 9% ,宫颈裂伤 2 2例占 6 3% ,子宫下段裂伤并发膀胱破裂尿道破裂 1例 ,占 0 2 9% ,子宫下段破裂并阔韧带血肿尿道裂伤 1例 ,占 0 2 9%。年龄分布 :小于 2 5岁 10 8例 ,2 6～ 35岁 2 0…     

分泌抗人聚白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其应用

作者成功地获得了持续稳定分泌抗人聚白蛋白(PHSA)的单克隆抗体(McAb)细胞株。用~(125)I标记该McAb,采用敏感性高的RIA法对HBsAg阳性和阴性血清中老化的白蛋白分子进行了探测。结果发现PHSA主要存在于HBsAg阳性血清中。此工作为乙型肝炎病毒(HBV)与循环中PHSA结合的可能性提供了实验依据。     

抑制端粒酶活性的pSUPER RNAi系统的构建

目的 构建抑制端粒酶活性的siRNA表达载体。方法 化学合成2段编码短发夹RNA序列的、靶向端粒酶hTERT基因的寡核苷酸，各64个碱基，退火，克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切同时CIP处理后的pSUPER载体的polⅢH1启动子的下游，重组构建RNAi质粒，同时设立非特异对照．结果 重组构建的pSUP—hTE载体经双酶切电泳分析及插入基因片段序列分析，结果表明64个碱基成功插入到预计位点，并且序列完全一致。结论 载体的成功构建，为进一步研究其对端粒酶活性的抑制作用打下基础。同时使我们发展了在体内合成siRNA的方法，这项技术能广泛的用在分析基因功能、肿瘤治疗等，更加便捷地把RNAi技术用于细胞培养和哺乳动物研究。     

耻骨上前列腺摘除术40例体会

前列腺增生排尿困难是老年人的常见病。目前在我国大部分地区仍以开放性手术治疗为主。其中以耻骨上前列腺摘除术最常用。十年来,作者共施行了40例,术中采用膀胱颈后唇半荷包缝合止血技术,防止术后出血取得较好疗效,现报告如下。     

应用引导式教育治疗脑性瘫痪(附284例疗效分析)

脑性瘫痪是由多种原因所引起的脑的非进行性病变,是以运动障碍为主的综合征.脑性瘫痪的诸多治疗方法中仍以理学疗法为主,如Vojta法、Bobath法、上田法及引导式教育法等.各种治疗方法均有较好的疗效.我中心用引导式教育法治疗脑性瘫痪,其疗效较为满意.资料与方法1987～1992年收治住院的脑性瘫痪284例,男136例、女148例;年龄3～12岁,5～10岁占多数;痉挛型94例、手足徐动型84例、驰缓型14例、运动失调型3例、混合型89例;四肢瘫165例、三肢瘫43例、偏瘫38例、双瘫34例、单瘫4例.全部病例于治疗前按日本PALCI评定标准进行评定,即肢体位置(P),日常生活