肺炎球菌溶血素基因的克隆

目的应用基因工程技术克隆肺炎球菌溶血素（pneumolysin,Pn）基因,为研制中耳炎蛋白多糖结合疫苗奠定基础.方法根据Walker等肺炎球菌溶血素基因序列（GenBank accession no.X52474）,设计一对各带有一个限制性酶切位点的引物,运用PCR从肺炎球菌的染色体DNA扩增出肺炎球菌溶血素基因.对该PCR产物进行酶切、回收,并将其克隆入表达载体pET-28a,然后转化至大肠杆菌JM109（DE3）宿主细胞中.结果通过常规基因克隆方法和PCR技术,成功构建重组体,酶切鉴定和基因测序证实构建正确.结论利用基因工程技术成功克隆了肺炎球菌溶血素基因.     

建立引物双标记的 PCR- ELISA 法检测军团菌mip 基因

许多流行病学、临床观察和实验研究均表明,军团菌的早期诊断十分重要,虽然ＰＣＲ技术是一种早期、快速、敏感、特异的诊断方法,但临床应用尚有待于不断发展和完善。近年来随着对军团菌基因水平的深入研究以及ＰＣＲ及其相关技术的不断发展,为军团病的早期诊断提供了良好的契机。在众多的方法中,ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ法有望将ＰＣＲ技术发展为临床常规应用的诊断方法,而成为当今国内外临床医学研究的热点。本文拟建立一种新的检测嗜肺军团菌ｍｉｐ基因的引物双标记１　上海医科大学华山医院传染病学教研室（２０００４０）２　美国食物药…     

基于度中心度和格兰杰因果分析对基底节区早期缺血性卒中患者的脑网络有效连接变化研究

目的 采用度中心度(DC)和格兰杰因果分析(GCA)方法研究早期基底节区缺血性卒中(EISB)患者脑功能网络有效连接变化,分析其与认知功能障碍的关系.方法 对27例EISB患者组及27例健康对照组(HC)行静息态功能磁共振成像扫描,选取组间DC值有统计学差异的脑区作为种子点进行全脑体素GCA分析;比较两组一般认知功能差...     

结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗抗结核作用的研究

结核病是由Mtb引起的一种呼吸道传染病,全球结核病疫情仍然十分严峻,而卡介苗预防结核病的效果并不理想,研究新型结核病疫苗已成为国内外结核病研究的热点之一。将本课题组自1998年至今研究Mtb Ag85A DNA疫苗的免疫原性、治疗效果进行综合与概述,结果表明Mtb Ag85A DNA疫苗可诱导小鼠体液免疫和Th1型细胞免疫应答,可减少小鼠组织中的Mtb尤其是耐多药Mtb的数目,该疫苗与常规化疗联合不仅可提高机体免疫力,并可有效地杀灭或抑制Mtb,从而提高化疗效果。     

急性药物性肝病用药探讨

<正>药物性肝病(drug-induced liver disease,DILD)又称药物性肝损伤,是药物经不同途径进入体内,因其毒性作用或机体的过敏反应而造成肝脏不同程度损伤,病程一般在3个月以内[1]。近年来,随着新药的不断问世,临床应用药物种类的迅速增加,患者自行服药的机率增多,急性药物性肝病护肝药物的合理选择也成为一个重要的临床课题。     

抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的研究——12株杂交瘤细胞的建立及其分泌抗体的分析

本文报道12株分泌抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体(HBsAg McAb)杂交瘤细胞的建株及其 McAb 性质的分析结果,用 ID、CEP、PHA 和 ELISA 等四种方法均测得较高水平的McAb。杂交瘤细胞培养液中 McAb 的 PHA 效价为1:80～1:320,由杂交瘤诱生的小鼠腹水 McAb的 ID 和 CEP 效价可高达1:3,200～6,400,PHA 和 ELISA 滴度分别为10~(-4)～10~(-5)和10~(-5)～5×10~(-7)。将这些腹水以 PBS 稀释到 10~(-5),分别与~(125)I-HBsAg(2×10~4cpm)结合,其结合率为52.8～68.4%.12个 McAb 的特异性均良好,其中1个为抗“HBs/d”亚型抗体,其余的均为抗“HBs/a”型特异性抗体。这些 McAb 均属小鼠 IgG_1亚类。选出其中3个 McAb 用于制备 HBsAg 诊断试剂,获得良好结果。     

循环免疫复合物的检测技术及其评价

循环免疫复合物(以下简称CIC)的形成是正常机体免疫反应的一部份,有利于破坏和清除对机体有害的抗原。但在某些特殊情况下,如抗原物质的持续存在或机体清除复合物的机能减退,GIC就可沉积于组织,激活一些生物活性因子,引起组织损伤,导致发生免疫复合物性疾病,如:血清病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。目前已建立了多种检测CIC的技术,并为深入研究CIC的致病机制,监视免疫复合物病的复发和恶化,以及判断预后,观察疗效,提供了有用的工具。 CIC的检测技术可分为抗原特异性和抗     

不同剂量结核病DNA疫苗及细胞因子联合免疫的研究

目的：评价结核分枝杆菌MPT64（简称M64）和ESAT6（简称E6）DNA疫苗不同剂量联合免疫、与细胞因子联合免疫的保护效力，以及Ag85A（简称85A）和Ag5B（简称85B）DNA疫苗的保护效力。方法：将C57BL／6小鼠随机分为14组免疫：①生理盐水；②载体pVAX1 100μg；③卡介苗；④M64100μg＋E6100μg；⑤M6450μg＋E650μg；⑥M6475μg＋E625μg；⑦M6425μg＋E675μg；⑧M6425μg＋E625μg；⑨M64100μg＋IFN-γ 100μg；⑩E6100μg＋IFN-γ100μg；（11）M64100μg＋IL-12 100μg；（12）E6100μg＋IL-12 100μg；（13）85A100μg；逼（14）5B100μg。用ELISA法检测血清抗体，结核分枝杆菌通过尾静脉攻击小鼠，动态观察小鼠体重变化；攻击4周后，取肺、肝和脾观察病理改变、称重量、做菌落计数。结果：不同剂量的M64和E6DNA联合免疫、85A和85BDNA分别免疫均能诱导小鼠产生特异性抗体，但M64或E6与IFN-γ或IL-12质粒DNA共同免疫后特异性抗体水平与对照组无显著性差异；各组血清抗体亚型IgG2a均无显著升高，IgG2b均显著高于IgGI。第2、3A、8、9、11、12组在感染后4周体重明显增加，而第1、14、5、6组体重下降；第3、11、9、7组的肺菌落指数较少。第10、13组肺肉眼未见明显病变；第2～4、7、9～13组肺组织主要为不同程度的增殖性反应，第1、6、8、14组肺组织为增殖性反应与渗出性反应并存，第5组为渗出性反应。结论：DNA免疫的量需100μg才能诱导产生强的保护效力；M64和E6DNA各100μg混合免疫、85ADNA疫苗的保护效力与卡介苗相当；b164和E6DNA与IFN-γ或IL-12质粒DNA共同免疫后，明显增强其保护效力。     

建立检测嗜肺军团菌mip基因的PCR-微孔板反向探针杂交法

近年来随着对军团菌基因水平的深入研究和聚合酶链反应（ＰＣＲ）及其相关技术的不断发展,为军团菌检测提供了一个快速、敏感、特异的诊断方法,并已用于环境水和临床标本中的军团菌检测,具有较好的检测效果［１］。但是,要使之成为常规的临床诊断方法,尚需不断完善和...     

左氧氟沙星联合头孢曲松钠治疗社区获得性肺炎的临床观察

目的评价左氧氟沙星联合头孢曲松钠治疗社区获得性肺炎的临床疗效。方法静脉滴注头孢曲松钠4.0g,1次/d,左氧氟沙星氯化钠注射液0.2g,2次/d,疗程5～10d。完成病例33例,观察治疗前后症状体征。结果治愈10例（30.3%）显效15例（45.5%）进步7例（21.2%）无效1例（3.0%）,总有效率为96.7%;不良反应发生率为9.1%。结论左氧氟沙星联合头孢曲松钠治疗社区获得性肺炎疗效确切,不良反应少,可作为基层医疗机构社区获得性肺炎的经验治疗。