新型冠状病毒肺炎患者发生复合终点事件危险因素的meta分析

目的 探索新型冠状病毒肺炎患者发生复合终点事件的危险因素。方法 计算机检索 PubMed、EMbase、Web of Science、MedRxiv、中国知网、万方和维普数据库,搜集新型冠状病毒肺炎患者发生复合终点事件的危险因素的队列研究、病例-对照研究和横断面研究,检索时限均从2019年11月至2020年3月27日。复合终点事件包括住进重症监护室（ICU）,需要机械通气或死亡。采用 RevMan 5.3和STATA14软件进行 Meta分析。结果 共纳入8个研究,包括46 665例研究对象,涉及危险因素20个。Meta分析结果显示：年龄越大,男性,有高血压、糖尿病、慢性心脏病、脑血管疾病、肿瘤疾病、吸烟史等既往病史,肺部CT结果提示双侧肺部均有受累,以及丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、白细胞计数、中性粒细胞、肌酐、D二聚体、凝血酶原时间、超敏肌钙蛋白I水平越高的患者发生复合终点事件的风险可能更高;白蛋白,血小板计数和淋巴细胞计数的水平越低的患者发生复合终点事件的风险可能越高。结论 年龄越大,有既往病史,存在心、肝、肾等其它脏器受累以及CT结果提示双侧肺部受累的患者发生复合终点事件的风险较高,临床上应给予重视,及早干预。     

NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27双顺反子真核表达载体的构建及表达分析

目的构建并鉴定携带核转录因子KB（nuclearfactoκB,NF—κB）特异性启动子的Flagp27和增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFPp27,转染经H202干预的人脐静脉内皮细胞（humanumbilical vein endothelial cells,HUVECs）,观察其表达。方法采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体。转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB—IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EGFP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达。结论NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达。EGFP基因可以指示p27基因的表达情况。由NF-κB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功（chronic graft dysfunction,CGD）之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础。     

大麻素对星形胶质细胞谷氨酸释放的影响及机制研究

目的:观察人工合成大麻素HU210对体外培养中脑腹侧被盖(VTA)区星形胶质细胞谷氨酸释放的影响,并探讨抑制星形胶质细胞谷氨酸释放的药物治疗途径。方法:体外培养大鼠VTA脑区星形胶质细胞,RT-PCR及免疫荧光染色检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及大麻素受体1(CB1R)的表达。将培养的星形胶质细胞分为4组:对照组(培养基中只加入0.2%DMSO),HU210组(培养基中加入3μM HU210),HU210+AM281组(培养基同时加入3μM HU210及3μM AM281)和HU210+Riluzole组(培养基同时加入3μM HU210及3μM Riluzole),各组4孔。干预30 min后,采用谷氨酸检测试剂盒观察各组星形胶质细胞培养基中谷氨酸浓度。再培养VTA脑区星形胶质细胞,分为对照组(培养基中只加入0.2%DMSO)和Riluzole组(培养基中加入3μM Riluzole),干预30 min后,利用Western Blot印迹分析Riluzole干预后谷氨酸转运体-1(GLT-1)表达水平的变化。结果:RT-PCR及免疫荧光染色显示,星形胶质细胞内有广泛CB1R的表达。与对照组比较,HU210组星形胶质细胞谷氨酸的释放显著增加(P<0.01),HU210+AM281组及HU210+Riluzol组星形胶质细胞谷氨酸的释放较HU210组均显著降低(P<0.01);且HU210+Riluzol组星形胶质细胞的GLT-1表达较对照组升高(P<0.05)。结论:HU210可能通过激活星形胶质细胞的CB1R促进星形胶质细胞释放谷氨酸。Riluzole可能通过升高星形胶质细胞的GLT-1的表达,逆转HU210所致的谷氨酸释放。     

LC-MS/MS同时测定动物源性食品中20种游离态性激素残留

目的建立快速、准确的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)同时测定动物源性食品中多种性激素残留的确证方法,调查深圳市售猪肉、牛肉、鸡蛋和牛奶中激素残留情况。方法采用乙腈提取待测组分,经过正己烷去脂、HLB-NH2柱串联固相萃取净化后,采用LC-MS/MS电喷雾电离(ESI),多反应监测(MRM)模式检测,内标法定量。结果所测样品中大都检出一定量的内源性激素,20种目标性激素的方法定量限为0.5～1.0μg/kg,方法平均回收率60.4%～118.2%,相对标准偏差2.5%～16.2%。结论方法快速准确,可用于动物源性食品(猪肉、牛肉、鸡蛋和牛奶)中20种游离态性激素的检测。     

含CXCL12基因的重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的:构建并鉴定含小鼠CXCL12基因和EGFP基因的重组腺病毒载体,并观察其表达。方法:利用腺病毒载体系统Adeno-X,通过质粒抽提、电泳、酶切、连接、转化等基因工程技术,构建重组腺病毒质粒pAdeno-CXCL12-EGFP;酶切、PCR鉴定;利用293细胞包装pAdeno-CXCL12-EGFP,荧光倒置显微镜观察EGFP的表达。结果:成功构建重组腺病毒质粒pAdeno-CXCL12-EGFP,转染pAdeno-CXCL12-EGFP的293细胞内可见EGFP表达。结论:利用腺病毒载体系统Adeno-X成功构建含CMV启动子的CXCL12和EGFP基因的腺病毒载体。     

成年起病的球形细胞脑白质营养不良1例患者的遗传学分析

目的探讨1例成年型球形细胞脑白质营养不良/Krabbe病(KD)患者的临床特征与遗传学病因。方法选取2022年2月15日因"右下肢无力进行性加重4年余"于华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科就诊的1例KD患者为研究对象。对患者进行临床、影像学及基因变异分析并进行家系验证。结果患者为36岁女性, 以痉挛性步态为主要临床表现。头颅MRI示双侧皮质脊髓束走行区对称性病变, 白细胞β-半乳糖脑苷脂酶(GALC)活性明显降低。患者的GALC基因存在c.461C>A(p.Pro154His)及c.1901T>C(p.Leu634Ser)复合杂合错义变异, 其母亲、姐姐及外甥均携带c.461C>A(p.Pro154His)杂合变异, 其父亲携带c.1901T>C(p.Leu634Ser)杂合变异。结论患者最终被诊断为成年型KD。GALC基因c.461C>A(p.Pro154His)及c.1901T>C(p.Leu634Ser)复合杂合变异可能是其遗传学病因。     

缺血性脑血管病患者血脂、同型半胱氨酸水平的变化

目的分析缺血性脑血管病患者血脂、同型半胱氨酸水平的变化。方法选取缺血性脑血管病(ICVD)患者150例为ICVD组,依据其病情分为短暂脑缺血发作(TIA)组和脑梗死(CI)组,另选择35例健康体检者为对照组。分析4组患者的相关血脂指标及血浆同型半胱氨酸指标。结果 ICVD组、TIA组、CI组与对照组患者的Hcy比较有显著差异(P0.05)。3组叶酸指标与对照组比较无显著差异(P0.05)。3组与对照组患者的TC、TG与HDL-C指标比较无显著差异(P0.05),而LDL-C指标与对照组比较有显著差异(P0.05)。3组与对照组患者的Apo A1与Apo B对比无显著差异(P0.05),而Fg指标与对照组对比有显著差异(P0.05)。结论缺血性脑血管病患者定期检测血清Hcy水平和相关血脂,对预防和干预缺血性脑血管病有较大的诊断价值。     

转染真核表达载体pGFAP-IRES2-EGFP-p27对星形胶质细胞增殖的抑制作用

目的:探讨脂质体介导真核表达载体pGFAP-IRES2-EGFP-p27转染体外培养星形胶质细胞后对其增殖的影响。方法:利用脂质体将质粒pGFAP-IRES2-EGFP-p27转染入纯化培养的星形胶质细胞,通过免疫荧光化学标记观察转染质粒pGFAP-IRES2-EGFP-p27后星形胶质细胞内外源基因EGFP、p27的表达情况,并观察其对星形胶质细胞Ki67表达的影响。结果:脂质体介导质粒pGFAP-IRES2-EGFP-p27转染后24 h即开始有EGFP的表达,48-72 h EGFP表达达高峰;通过免疫荧光标记发现,表达EGFP的细胞同时有p27表达水平明显增高;和EGFP阴性细胞相比,EGFP阳性细胞中Ki67的阳性率明显下调(P<0.01)。结论:GFAP启动子能启动目的基因p27和EGFP在星形胶质细胞的表达;连于p27的下游EGFP可作为报告基因,通过观察EGFP的表达可了解外源性p27的表达情况;导入外源性p27能有效抑制星形胶质细胞的增殖。     

复方三生双层片的制备工艺研究

目的研究复方三生双层片的制备工艺。方法分别对双层片速释部分、缓释部分进行辅料筛选,通过正交设计试验,以体外溶出度测定优化处方和工艺。结果处方优选为速释部分:复方三生浸膏15g,淀粉适量,磷酸钙12g。缓释部分:复方三生浸膏35g,PEG 6000 16.5g,糊精46.6g,丙烯酸树脂Ⅱ11.6g。复方三生双层片在2、5、10h药物释放分别达到20%～40%、40%～65%、75%以上。结论本处方合理、工艺可行,适于复方三生双层片的制备,产品缓释性能良好。     

细胞趋化因子SDF-1α对小胶质细胞趋化作用的研究

目的观察细胞趋化因子SDF-1对小胶质细胞的趋化作用以及机制探讨。方法体外培养BV2细胞系,给予不同浓度SDF-1α,进行迁移实验以确定SDF-1α对小胶质细胞趋化作用的浓度;将C6小鼠分为对照组和SDF-1α干预组,分别予以侧脑室注射PBS和SDF-1α各8周,采用免疫荧光组织化学方法观察注射后小鼠脑内小胶质细胞的数量,进一步采用Western Blot检测小胶质细胞标志物Iba-1的表达水平。结果予以SDF-1干预6 h后BV2细胞的迁移指数增加,SDF-1的受体CXCR4拮抗剂AMD3100能抑制SDF-1所致的小胶质细胞迁移;长程的SDF-1α侧脑室注射能够增加C6小鼠皮层和海马小胶质细胞的数量;Western Blot检测发现SDF-1α干预组脑组织中Iba-1表达量也明显增加。结论 SDF-1在离体和在体实验中均能趋化小胶质细胞的迁移。