人Toll-like receptor 2胞外段的克隆和表达

目的 克隆、表达人Toll-like receptor 2(TLR2)胞外段(A26-T588)基因，获得人TLR2胞外段蛋白。方法 RT-PCR扩增TLR2胞外段基因，以pcDNA3．1 质粒为载体在HEK293细胞中表达TLR2胞外段蛋白，同时以pcDNA3．1 ／TLR2(A26-T588)重组质粒免疫昆明鼠，制备抗TLR2胞外段蛋白多抗。结果 PCR扩增及重组质粒测序结果表明成功地构建了pcDNA3．1 ／TLR2(A26-T588)真核表达质粒，SDS-PAGE分析纯化产物在Mt为68000处出现明显蛋白条带。重组质粒DNA免疫小鼠3次后，血清抗体滴度可达1：250。TLR2胞外段蛋白可与LPS结合，并在一定的质量浓度范围内呈剂量依赖性。结论 构建的pcDNA3．1 ／TLR2(A26-T588)真核表达质粒可在哺乳动物细胞中表达TLR2胞外段蛋白，并与重组质粒DNA免疫小鼠抗血清及TLR2单克隆抗体TL2.1特异性反应，由此证明其表达正确。     

生物素─链霉亲和素系统在检测巨细胞病毒抗体中的应用

本文用自制ＣＭＶ抗原和生物素－链霉亲和素系统试剂，通过最适条件的对比，建立了检测人血清中抗巨细胞病毒ＩｇＭ、ＩｇＡ类抗体的ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ，并与普通ＥＬＩＳＡ作比较，结果表明，ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ的非特异性吸附明显低于普通ＥＬＩＳＡ，与普通ＥＬＩＳＡ相比，抗体效价分别提高５和７倍，阳性率分别提高６８％和１５３．５％。在实际工作中曾用ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ检测临床样品１６５份，就所得结果进行分析。表明ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ检测ＣＭＶＩｇＭ和ＩｇＡ可提高特异性和灵敏度，值得推广应用。     

类风湿关节炎患者外周血Th细胞亚群的变化及依那西普的调节作用

目的:观察活动期类风湿关节炎(RA)患者外周血中辅助性T细胞亚群(Th1、Th2和Thl7)数量和比例的变化,探讨依那西普治疗对Th亚群的作用.方法:选择20例活动期中重度RA患者,随机分为依那西普加MTX联合治疗组、MTX治疗组,于治疗前后分离PBMC,采用流式细胞术(FCM)检测Th1、Th2、Th17细胞的数量及Th1/Th2比值,同步用ELISA测定培养上清中IFN-γ、IL-4、IL-17水平,与同期选择的健康对照组比较并与患者的病情活动指标进行相关性分析.结果:治疗前活动期RA患者PBMC中IFN-γ Th1细胞的量、IL-17 Th17细胞的量及平均荧光强度、Th1/Th2比值均高于健康对照组[(27.0±2.9)%vs(23.2±1.7)%,P<0.05;(36.78 ±2.6)%vs(2.35±0.9)%及(26.61±2.6)vs(11.4±1.2),P<0.01;(12.8±1.6)vs(8.60±1.9),P<0.01];依那西普加MTX联合治疗12周后,RA患者的病情改善,IFN-γ Th1细胞、Th1/Th2比值、IL-17 Th17细胞的量及平均荧光强度、培养上清中IL-17水平均低于治疗前,而与健康对照组相比无统计学意义(P>0.05),且联合治疗组降低的幅度均大于MTX治疗组;治疗前后Th17细胞的量与C反应蛋白(CRP)、疾病活动指数(DAS28)的消长呈正相关(P<0.05,r=0.38和P<0.05,r=0.42).结论:IL17 Th17细胞、IFN-γ Th1细胞及Th1/Th2比值的增高可能参与活动期RA的发病机制,依那西普治疗可改善RA病情并下调Th1和Th17细胞亚群.     

人Toll 样受体-9胞外区N端蛋白的表达及其抗体的制备

目的:构建人Toll样受体-9(hTLR-9)基因5′端序列的表达质粒,在大肠杆菌中表达,并以表达的hTLR-9-N免疫小鼠制备抗体。方法:构建hTLR-9基因5′端(707~1167bp)的硫氧还蛋白(thioredoxin)融合表达质粒pET32a-hTLR-9-N。将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.5mmol/LIPTG诱导下表达。表达产物用SDS-PAGE进行鉴定。以8mol/L尿素溶解的包涵体作为免疫原,免疫昆明种小鼠制备抗hTLR-9-N的抗体。结果:融合表达质粒pET32a-hTLR-9-N在E.coliBL21(DE3)中以相对分子质量(Mr)为31000的包涵体形式表达;Westernblot分析证明hTLR-9-N在大肠杆菌中得到正确表达。表达的目的蛋白初步纯化后的纯度达90%以上;以hTLR-9-N为抗原制备的抗血清效价为1∶25600;该抗血清可以与转染后稳定表达全长hTLR-9的HEK293细胞产生结合反应。结论:成功地在大肠杆菌中表达hTLR-9N末端蛋白,制备的抗hTLR-9-N抗体可特异性结合表达全长hTLR-9的真核细胞。     

823例无精子症患者的染色体畸变类型及生殖激素水平

目的探讨无精子症患者的染色体畸变类型及性激素变化情况。方法对本室2000-2005年823例无精子症患者进行染色体核型分析并采用R IA法检测患者血浆生殖激素水平。将激素水平不同的患者分为4组进行临床分析。结果823例无精子症病人中检出染色体畸变158例,占19.2%。其中,性染色体异常152例,占96.2%,常染色体异常6例,占3.80%。性染色体数目异常中,K linefelter综合征119例,占75.30%,47,XYY 4例,占2.53%。性染包体结构畸变中46,XY,delYqtl-tel-16例,占10.12%,其它类型的性染色体结构畸变共计6例,占3.80%。性反转7例,占4.43%。各类型的染色体畸变患者的生殖檄索水平有不同的表现。823例无精子症患者中染色体核型正常者665例占80.8%。激素水平不同的4组组间比较有非常显著性差异。FSH、LH升高T降低病变在睾丸。病变不在睾丸和特发性无精子症者,各种激素值表现不一。结论对无精子症患者进行染色体与生殖激素的检测有利于鉴别无精子症的类型:染色体,尤其是性染色体畸变可导致无精子症的发生,使得生殖激素分泌异常,不同类型的染色体结构畸变患者的性激素水平存在差异;生殖激素FSti、LH、T、PRL水平可以反映无精子症患者睪丸病变部位,及受损伤的严重程度。     

模拟HIV-1 gp41 CHR表位短肽的筛选及研究

目的 利用针对HIV-1跨膜蛋白gp41CHR序列合成肽C34的单克隆抗体1G1筛选噬菌体12肽库，旨在找寻模拟C34肽表位的序列，同时探索该短肽成为HIV-1gp41NHR与CHR结合抑制物的可能性。方法 以1G1为钓饵蛋白对噬菌体12肽库进行亲和筛选，以双夹心ELISA鉴定阳性克隆。结果 经3轮筛选后，随机挑选17个噬菌体克隆，其中6个克隆与1G1显示出较强的结合活性，上述6个阳性克隆经DNA测序，氨基酸序列相同；HYEFWAWNWEAN，其明显的疏水性质类似于G34N末端，特异性鉴定显示这些克隆均能够与HIV-1gp41N多肽结合，结论 该噬菌体克隆展示肽可模拟HIV-1gp41CHR多肽表位，并可与N多肽结合。     

缺血再灌注对心肌细胞Ca~(2+)-ATP酶蛋白及其基因表达的影响

目的 研究鼠缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）心肌细胞肌浆网钙ＡＴＰ酶（ＳＲ·Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ,ＳＥＲＣＡ２ａ）的蛋白及其基因表达的变化,探讨基固调控在。肌保护中的作用。方法 将ＳＤ大鼠分为正常对照组与Ｉ／Ｒ组,利用离体心工作模型进行灌注,采用Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ方法检测心肌细胞ＳＥＲＣＡ２ａ蛋白的含量,利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－Ｂｌｏｔ方法测定ＳＥＲＣＡ２ａ ｍＲＮＡ相对含量。结果Ｉ／Ｒ心肌细胞的ＳＥＲＣＡ２ａ蛋白含量（０．５３８±０．００６ｖｓ１．０２０±０．０１５）及其ｍＲＮＡ相对量（０６２±０．００８ｖｓ０．９５±０．００９）均明显下降,分别下降３４．７％与４７．３％,其变化状态与其心肌功能变化一致。结抡 缺血再灌注过程严重影响了心肌细胞 ＳＲ·Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ蛋白及其基因的表达,ＳＥＲＣＡ２ａ基因表达显著下降可能是心肌Ｉ／Ｒ损伤的重要机制;若采取有效措施进行基固调控,增强ＳＥＲＣＡ２ａ基因的表达,可能起到保护Ｉ／Ｒ心肌细胞、增强心肌功能的作用。     

CAROTID INTIMA- MEDIA THICKNESS AND THE ASSOCIATION WITH CARDIOVASCULAR RISK FACTORS IN THE ELDERLY

INTRODUCTION It is reported that increased carotid arterial intima- me- dia thickness (IMT) was the sign of early atherosclerosis and associated with coronary atherosclerosis and cardiovascular risk factors. Age itself was an important risk factor for the increased IMT(1). Shi(2) found that the p- revalence of carotid atherosclerosis increased with advancing age, but the increased carotid IMT was not in relation to clinically diagnosed coronary heart disease, cerebral infarction, hyper…     

急性白血病患者68例中MLL基因易位的发生

11号染色体q23的易位可造成几种类型的白血病.易位多聚集于MLL(mixed lineage leukemia)基因内部,造成MLL基因的重排.     

尿液分析仪与化学法检测结果比较(摘要)

材料与方法 MA-4210型尿液自动分析仪.广西桂林医疗仪器厂生产的8A试剂带,批号:951008.仪器法按MA-4210型尿液分析仪使用说明书的操作程序进行.化学法分别采用蛋白质:磺柳酸法,葡萄糖:班氏法,隐血试验:匹拉米酮法,酮体:亚硝基铁氰化钠法,尿胆原:Ehrlich法.50份尿液标本来自门诊随机病人及住院病人的尿液.