浅谈留学生医学微生物学教学的尝试和思考

随着我国教育体制改革的深化，中国加入了世界贸易组织（WTO），在政治、经济、文化等方面与世界各国的交往日趋密切和频繁。自2003年以来，为了适应我国医学教育国际化发展趋势，我校开始接收外国留学生。这些学生来自印度、尼泊尔等国，有良好的英语基础，所以在校期间采用英语授课。医学微生物学是留学医学生的一门重要基础课，其教学效果的好坏不仅影响整体教学效果的评价，也对中外医学教育交流产生影响。作者对此次留学生微生物学教学实践工作进行总结，并探讨医学院校开展医学留学生教育的可行性和方式方法，为留学生教育提供参考。     

类风湿关节炎滑膜侵蚀软骨SCID鼠模型的建立及初步实验研究

目的建立类风湿关节炎(RA)-SCID小鼠模型,观察滑膜对软骨的侵蚀情况,为探讨RA滑膜侵蚀软骨机制及治疗奠定基础。方法70只SCID小鼠,3～6周龄。无菌获得12例非关节炎患者正常关节软骨,修剪成约2 mm×2 mm×1 mm后备用。同时取10例RA患者(膝关节或髋关节)滑膜组织修剪成约3 mm×6 mm的小块(片),这些小块包裹软骨后共植入SCID鼠肾包囊处,4例骨关节炎(OA)患者滑膜及2例正常滑膜同样处理作对照。术后观察小鼠和移植物的一般情况,从第4周开始分批处死SCID小鼠并切除移植物,进行苏木素-伊红(HE)染色病理分析。结果大部分滑膜及软骨在SCID小鼠体内存活,4周开始滑膜黏附并侵蚀软骨,12周后RA滑膜明显破坏软骨,移植物细胞浸润、软骨破坏与RA病理类似,OA滑膜轻微破坏软骨,而正常滑膜几乎不破坏软骨。结论RA滑膜植入SCID可成活并能侵蚀软骨,RA-SCID小鼠可作为人源化滑膜侵蚀软骨模型,在探讨机制特别是软骨破坏及治疗方面可能有明显优势。     

麝香保心丸对高同型半胱氨酸血症大鼠内皮功能的影响

目的在大鼠高同型半胱氨酸血症(HHcy)模型上,探讨麝香保心丸对血管内皮功能的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、HHcy组及HHcy+麝香保心丸组,每组8只。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平,采用硝酸还原酶法检测大鼠血浆一氧化氮(NO)含量,采用免疫组织化学法检测主动脉一氧化氮合成酶(eNOS)表达。结果 L-蛋氨酸灌胃能够诱导大鼠HHcy模型,使血浆NO含量减少,血管内皮eNOS表达同步下调;采用麝香保心丸干预后,内皮功能有所改善。结论麝香保心丸可改善HHcy引起的内皮功能障碍。     

HIV-1gp41核心结构模拟位的筛选与鉴定

目的：筛选并鉴定HIV-1 gp4l核心表位。方法：用识别HIV-1 gp41的构象特异性单克隆抗体NC-1筛选噬菌体12肽库，通过夹心ELISA、NC-1特异性阻断实验、竞争抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆，DNA序列分析阳性克隆。结果：经3轮筛选，随机挑取24个噬菌体克隆，ELISA鉴定表明有lO个克隆可与NC-1结合，DNA序列分析并推导氨基酸序列，共5种序列：HDVHHRWVYLLS、ITVNEWLYTSEQ、HGRSHGMFKPKR、MGPIARPHWHLN、DMYRSPRPKPDT。其中gp41N肽和C肽所形成的复合物可特异性阻断表达HDVHHRWVYLLS，VNEWLYTSEQ和MGPIARPHWHLN的克隆与NC-1的结合。结论：所得序列HDVHHRWVYLLS，VNEWLYTSEQ及MGPIARPHWHLN模拟HIV-1 gp41六螺旋束核心表位。     

人类Ⅱ型胶原蛋白活性肽段多聚基因的构建和表达

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发展机理尚未完全阐明,目前认为与自身免疫密切相关,Ⅱ型胶愿蛋白(type Ⅱ collagen,CⅡ)是最可能的自身抗原(1).国外的研究提示,CⅡ的这种免疫活性主要一现在其250-270片段(hCⅡ250-270)上[1,2].本文用基因工程的方法,选用大肠杆菌(E.coli)偏爱密码子,化学合成优化该片段的基因组成,利用酶切位点将其串联成六聚体,并在E.coli中进行表达,获得大量重组hCⅡ250-270的类似物,为进一步研究该段活性肽的功能提供条件.     

美托洛尔提高慢性心力衰竭患者生存质量的作用

探讨美托洛尔对高慢性心力衰竭患（CHF）的生存质量（QOL）的影响。方法：50例CHF患随机分为两组,常规抗心衰治疗,治疗组加用美托洛尔,分别在治疗开始前、第8周、第24周测量心功能,采用问卷自答的方式,对CHF患治疗前后QOL进行进行评定,并以50例正常人为对照。结果CHF患QOL较正常人明显降低;治疗8周后,CHF患QOL均能得到改善,美托洛尔治疗组第24周时心功能及QOL较对照组有明显差异（P＜0．05）。结论：美托洛尔有显提高CHF患的远期QOL。     

静息心率与原发性高血压患者靶器官损害的相关性

目的：分析静息心率(resting heart rate，RHR)增加与高血压靶器官损伤的相关性。方法：对120例高血压患者分别测定其静息心率、血糖、血脂，并作超声心动图检查，对同期进行健康检查的100名正常志愿者作为对照组，进行分组研究。结果：高血压组静息心率[(78．25&;#177;9．12)次／min]显著高于正常对照组[(71．11&;#177;11．02)次／min，P&;lt;0．05]，高血压合并左室肥厚者RHR高于无左室肥厚者[(81．92&;#177;7．11)，(72．90&;#177;9．01)次／min，P&;lt;0．05]；高血压合并高血糖、高血脂组RHR高于血糖、血脂正常者[(80．31&;#177;8．80)，(75．11&;#177;9．20)次／min，P&;lt;0．05]；[(79．81&;#177;9．30)，(74．32&;#177;8．20)次／rain，P&;lt;O．05]。结论：高血压患者静息心率增加与高血压靶器官损害及高血压并代谢异常呈明显正相关。     

实验室条件下人角质形成细胞的培养技术

背景:随着角质形成细胞体外培养技术的建立和发展,皮肤不再被认为是单纯的生理屏障,其在机体免疫和内分泌等方面尤为重要。目的:探讨实验室条件下人体角质形成细胞的培养技术,为角质形成细胞的多方面应用提供可靠的细胞来源。设计:开放性实验。单位:解放军第四军医大学西京医院临床免疫科和皮肤科。材料:实验于2003-03/2005-03在解放军第四军医大学西京医院临床免疫科实验室完成。选取同年4月西京医院泌尿外科门诊收治的1例6岁正常男性术后的包皮为角质形成细胞的来源。方法:①对表皮细胞分离过程采取两步消化法:首先运用离散酶对全层皮肤进行低温消化,将包皮皮片浸入质量浓度为2.5g/L的Dispase酶中,4℃过夜,次日分离表皮;第二步采用胰蛋白酶和乙二氨基四乙酸的混合液进行消化。②采用改良的无血清培养技术进行人体角质形成细胞的培养,培养基为人角质形成细胞无血清培养基 2.5mg/L牛垂体浸出液 5μg/L表皮生长因子 438mg/L谷氨酰胺,其中谷氨酰胺能促进角质形成细胞的生长。③将处于对数生长期的细胞进行人角质形成细胞的冻存和复苏,加入无血清培养基制成细胞悬液,调整细胞密度为5×105/mL接种入75cm培养瓶中传代培养。置于显微镜和透射电2镜下进行细胞形态观察。主要观察指标:①原代和传代细胞的生长情况。②不同代的角质形成细胞冻存和复苏情况。③角质形成细胞形态学观察结果。结果:①原代和传代细胞的生长情况:初期细胞悬于培养液中,逐渐细胞贴附于培养皿底部。一般在6～24h内开始贴壁,细胞以圆形为主,随着时间的延长伸展成椭圆型。3d左右可见数个角质形成细胞形成的小集落或小集簇,四周可见卫星样表皮细胞增殖,多数细胞为多角形,细胞的均质性和透明度加强。5d左右细胞融合范围可达70%,9d左右细胞融合达90%,11d左右细胞完全融合形成细胞膜片。角质形成细胞可在体外稳定培养2～3个月,细胞形态和生长速度无明显改变。②不同代的角质形成细胞冻存和复苏情况:将不同代的角质形成细胞分别冻存于液氮罐中,3个月后进行复苏,发现角质形成细胞的形态和生长速度无明显改变。③角质形成细胞形态学观察结果:显微镜下细胞呈典型上皮样特征,高核浆比例,细胞紧密排列,轮廓清楚折光性好。透射电镜下培养的表皮角质形成细胞胞浆内有大量束状张力丝和张力原纤维,可见线粒体和粗面内质网,胞质周边有短的突起,细胞间有桥粒相连等角化细胞所具有的特点。结论:培养的角质形成细胞在多次传代后仍能够保持正常的形态特征,提示改良的培养角质形成细胞的技术可为实验和临床提供可靠丰富的角质形成细胞来源。     

单倍体相合骨髓移植小鼠GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体克隆谱型的分子特征

本课题通过单倍体相合骨髓移植小鼠模型,研究GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体谱型特点,以及GVHD靶器官克隆性T细胞的TCRBV CDR3分子特征。建立单倍体相合异基因移植小鼠GVHD模型,应用RT—PCR扩增小鼠肝脏、皮肤、回肠等组织移植前后TCRBV20个家族的基因序列,通过基因扫描判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质。对于寡克隆表达的TCRBV家族在长泳道测序胶上电泳,对部分单克隆条带测序,得到一组肝脏、皮肤、回肠在移植后不同时间与GVHD相关的TCRBV CDR3的分子。结果表明：单倍体相合骨髓移植小鼠在移植后14天临床开始出现典型的GVHD表现。移植后受鼠肝脏、皮肤、远端回肠等均出现典型的GVHD病理表现,在其T细胞受体谱型图上出现了分属TCRBV家族的单克隆或寡克隆增生的T细胞。肝脏、皮肤、回肠等GVHD的靶器官中部分克隆性增生的T细胞TCRBV CDR3分子存在一些C’末端保守的CDR3氨基酸基序（motif）。结论：单倍体相合异基因移植后发生GVHD的组织可出现T细胞单克隆及寡克隆增生,GVHD相关T细胞克隆共用一些保守的TCRBV CDR3基序,识别类似的抗原。     

通心络对冠心病稳定型心绞痛患者同型半胱氨酸和临床疗效的影响

目的:观察通心络胶囊对冠心病稳定型心绞痛患者血液中同型半胱氨酸(HCY)及临床疗效的影响.方法:选取冠心病稳定型心绞痛患者62例,分为治疗组及对照组各31例,对照组常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用通心络胶囊,疗程均为2个月.观察两组疗效及HCY和血脂变化.结果:(1)治疗后,治疗组HCY水平降低(P<0.01),两组总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇及甘油三酯水平均降低,高密度脂蛋白胆固醇均升高(P<0.05或P<0.01),治疗组作用更明显(P<0.05).(2)治疗组患者临床症状明显改善,总有效率为96.8%,对照组总有效率为71.0%,两组间差异有显著性(P<0.01).结论:通心络能缓解冠心痛稳定型心绞痛的临床症状,具有降低血浆HCY水平、调节血脂及改善血管内皮功能的作用.