Tet-On在乳腺癌自杀基因治疗中诱导细胞凋亡的实验研究

目的：构建Tet调节的自杀基因HSVtk重组逆转录病毒，探讨其治疗乳腺癌的作用机制。方法：构建重组逆转录病毒RevTRE／HSVtk与RevTet—On感染乳腺癌细胞株MCF-7。Southern杂交检测细胞中HSVtk基因的整合。应用倒置荧光显微镜、流式细胞术、TUNEL、苔盼蓝排斥试验观察分析在Tet调控下，重组病毒对感染的乳腺癌细胞杀伤作用机制。以MCF-7细胞构建裸鼠乳腺癌模型。观察Tet调控下病毒对肿瘤细胞的杀伤作用．并对瘤体进行病理分析。结果：重组病毒感染乳腺癌细胞株MCF-7后，乳腺癌细胞随着DOX浓度的增高和GCV作用后，细胞死亡增加并呈现细胞凋亡等特征。乳腺癌裸鼠在DOX诱导7天GCV治疗30天后与对照组比较，在Tet调控下乳腺癌裸鼠肿瘤体积减小并可诱导乳腺癌细胞凋亡。结论：重组逆转录病毒在DOX诱导GCV作用下对病毒感染的MCF-7细胞具有诱导细胞凋亡的作用．能有效地杀伤肿瘤细胞。     

Tet-On调节的自杀基因对人乳腺癌细胞的体外杀伤和旁观者效应研究

目的探讨Tet调控下的自杀基因HSVtk对人乳腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法构建重组逆转录病毒载体pRevTRE／HSVtk，通过磷酸钙共沉淀法，分别将pRevTRE／HSVtk和pRevTet-On导入乳腺癌细胞株MCF-7。以RT—PCR法检测不同Dox浓度下转染乳腺癌细胞中HSVtk基因的表达，MTT法检测细胞生长抑制率，通过检测混合细胞生长克隆来评价Tet调控下的自杀基因的旁观者效应和对乳腺癌细胞的杀伤作用。结果建立了一株稳定的受多西环素（Doxcycline，Dox）诱导、表达HSVtk基因的乳腺癌细胞株MCF／TRE／tk／Tet—On。当Ganciclovir（GCV）及Dox浓度增加时，细胞存活率下降。MCF／TRE／tk／Tet—On在总细胞中的比例〉10％时，有明显的旁观者效应。结论在Tet—On调控下，导入乳腺癌细胞中的HSVtk基因产物能将药物前体GCV转变为毒性代谢物质，并诱发旁观者效应进一步杀灭乳腺癌细胞。     

携带双调控自杀基因的重组腺相关病毒载体的构建及初步应用

目的:为构建携带受Tet-On以及VEGF启动子调控自杀基因的重组腺相关病毒载体。方法:用PCR方法扩增VEGF启动子,将其插入pAAV/TRE/HSVtk/Tet-On,形成重组载体pAAV/VEGF/ TRE/HSVtk/Tet-On质粒。进行病毒包装后得到了AAV/VEGF/TRE/HSVtk/Tet-On重组腺相关病毒。用重组腺相关病毒感染乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺HBL-100细胞,用MTT法及RT-PCR检测在Dox诱导下,GCV对rAAV感染的MCF-7细胞和HBL-100细胞的杀伤作用以及HSVtk基因在MCF-7细胞内的表达情况。结果:在rAAV+Dox+GCV组,GCV对rAAV感染的MCF-7细胞的杀伤作用明显高于rAAV+Dox组,rAAV+Dox组以及HBL-100组,并且RT-PCR结果显示经Dox诱导HSVtk表达较明显。结论:成功构建了携带双调控自杀基因的重组腺相关病毒载体,该病毒载体能有效的感染乳腺癌细胞MCF-7,并能联合GCV治疗,抑制肿瘤细胞生长,而且具有靶向性。     

住院医师规范化培训小讲课的组织与实施

住院医师规范化培训小讲课是住院医师规范化培训教学工作的重要组成部分,是住院医师临床实践与理论知识学习的重要衔接环节。可以完善住院医师的临床理论知识体系,训练住院医师临床思维的形成,帮助学员进行知识的更新,同时提高带教老师的教学水平和专业水平。合理选题、科学设计是提高小讲课授课质量的关键。同时要注重学员的反馈,不断改进教学内容与方法。重视小讲课住院医师规范化培训教学活动对提高住院医师培训质量至关重要。     

21世纪肿瘤治疗的机遇与挑战

肿瘤的治疗一直是困扰医学界的难题之一。随着生命科学的发展，尤其是人类基因组计划的完成，基因治疗在肿瘤学方面的应用显示出巨大的。文章从哲学系统论与认识论的角度探讨21世纪基因治疗等生物技术在肿瘤治疗方面的应用成就、发展趋势及面临的挑战。     

综合性大学医学教学运行模式与管理机制的改革与实践

在高校体制改革中，为加快高等医学教育事业的发展，我们对国内，外改革的现状进行调查研究，充分发挥综合大学优势，在合并调整，在改革中发展医学教育，提高医学教育办学层次，充分利用教学资源，组建新的院系和中心实验室，提高办学效益，为创建国内一流综合性，研究性的大学，为培养创新人才作出更大贡献。     

脑干胶质瘤引起双眼内斜视一例

病例报告:男性,11岁,因双眼内斜视,头晕伴呕吐40天于1997年5月16日入院。患者于40天前上午无明显诱因出现双眼内斜视,伴头晕呕吐,呕吐呈非喷射状,呕出胃内容物少许,无咖啡样液体。有视物成双现象,无视物旋转,无耳鸣。之后,逐渐出现双下肢无力,行走不稳。于病后2周在湘阴县人民医院行CT检查无异常发现。起病以来,无发热、头痛,无大小便失禁、食纳差、有饮水呛咳、吞咽困难现象。体重无减轻。学习成绩、智力无改变,视力无明显下降,无其它特殊病史可询。     

综合疗法在脑卒中后假性球麻痹患者吞咽功能重塑中的作用

目的探讨针刺及功能训练配合药物治疗在脑卒中后假性球麻痹患者吞咽功能重塑中的作用。方法对126例脑卒中后假性球麻痹患者进行针刺、吞咽功能训练配合药物治疗,对治疗4周后的疗效作吞咽障碍的康复评定,并与对照组进行统计学比较分析。结果在治疗后4周,综合治疗组有效率为86.1%,对照组有效率为42.6%,两组疗效比较差异有显著性(P<0.01)。结论综合治疗能明显改善脑卒中后假性球麻痹患者的吞咽功能,减少并发症,提高卒中患者的生存质量。     

周围神经端侧吻合再生纤维来源的实验研究

目的：探讨周围神经端－侧吻合后再生纤维（侧芽）的来源。方法：将Wistar大鼠左侧腓总神经切断后端一侧吻事到外膜开窗的胫神经干 ,术后15周对胫神经和腓总神经分别用快兰和核黄作神经干注射标注,取背根神经节（DRC）荧光显微镜下观察被标记细胞,取吻合口附近的胫,腓神经段经饿酸染色后在光镜下观察腓总神经内轴突与胫神经轴突的关系。结果：实验组带根节内未发现双标细胞,光镜下,可清晰地见到左侧腓总神经内的再生纤维从胫神经近侧端下行而至。结论：周围神经端一侧吻合腓总神经内的再生纤维来自于胫神经的侧芽缺乏依据。因无法排除来自腓总神经近端生长锥和受损胫神经纤维生长锥的可能。     

逆转录病毒载体介导的HSVtk基因表达及提高重组逆转录病毒滴度的研究

目的 探讨逆转录病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVtk)基因表达及提高逆转录病毒滴度的措施。方法 将HSVtk基因插入逆转录病毒载体pRevTRE中,构建重组逆转录病毒载体。通过微乒乓感染法导入包装细胞PA317中,以潮霉素B筛选克隆细胞,浓缩克隆细胞上清制备重组逆转录病毒。在不同时间及不同丁酸钠浓度下,检测分析经筛选获得阳性克隆靶细胞中有无HSVtk基因的表达及如何获得高滴度的重组病毒液。结果 成功构建了重组逆转录病毒载体RevTRE／tk,制备的重组病毒感染靶细胞后有HSVtk基因的表达。结论 通过微乒乓感染法在包装细胞PA317培养30h和10mmol／L丁酸钠浓度下,经冷冻超速离心能获得携HSVtk基因的高滴度逆转录病毒颗粒,为其基因治疗的应用及研究奠定了基础。