siRNA特异性沉默整合素连接激酶对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响

[目的]探讨整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的表达抑制对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响。[方法]设计并合成ILK基因的siRNA,同时设立空白对照和阴性对照和阳性实验组,利用脂质体Translipid转染PC3细胞,用半定量RT-PCR和Western-blot检测转染前后PC3细胞ILK mRNA和蛋白的表达水平变化,吖啶橙和嗅乙啶(AO/EB)双重染色检测诱导PC3细胞凋亡的作用,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测PC3细胞体外增殖的变化。[结果]PC3细胞转染ILKsiRNA 48h后,与空白对照和阴性对照相比,ILK的mRNA表达水平和蛋白表达水平明显下调(31.6%±3.13%、25.3%±2.36%,P<0.01);并诱导34.8%±2.20%(P<0.01)的细胞凋亡;细胞重新种板24、48、72h,与空白对照和阴性对照相比,可以明显抑制细胞增殖,其增殖抑制率分别为9.9%±0.55%、27.8%±1.67%、43.7%±2.0%,P<0.01。[结论]以ILK为靶向的siRNA能够有效下调ILK基因的mRNA和蛋白表达水平,显著抑制P...     

拟Smac促凋亡多肽的合成及其生物活性的初步研究

目的探讨拟Smac多肽的合成及其对膀胱癌细胞的促凋亡生物活性。方法应用固相多肽合成技术,合成具有细胞膜穿透性SmacN7融合多肽,经RP-HPLC纯化、纯度分析,用质谱仪定性鉴定;通过荧光显微镜观察细胞凋亡形态、细胞增殖抑制率测定及流式细胞仪分析,研究其对低剂量丝裂霉素C诱导的膀胱癌T24细胞的凋亡促进作用。结果 可穿透性融合多肽SmacN7产物峰纯度达95％以上,分子量为3278．08,质谱鉴定结果与合成预期结果完全一致;50-500 μg／L SmacN7作用12-48h,肿瘤细胞出现典型的凋亡形态学改变;随着SmacN7浓度的增加或作用时间的延长,细胞增殖抑制率出现明显增加,药物作用12h、24h、48h后增殖抑制率分别为（9．62±1．07）％～（61．48±1．15）％、（24．17±1．02）％～（72．86±1．68）％、（43．24±1．15）％～（84．91±1．74）％;肿瘤细胞凋亡率也明显增加,分别为（6．12±1．16）％～（49．81±2．11）％、（13．47±1．15）％～（64．54±2．27）％、（28．91±1．08）％～（82．36±2．19）％。结论 固相合成的拟Smac融合多肽SmacN7为高纯度的目的肽,能够稳定地转入细胞内且利用率高,并有明显促进低剂量丝裂霉素C诱导的膀胱癌T24细胞凋亡的生物活性,为进一步研究膀胱肿瘤的生物治疗积累了有价值的资料。     

前列腺体检三项检查不可少

前列腺是男性特有的性腺器官,位于尿道和膀胱之间。在体检中,涉及男性前列腺的项目有哪些呢？一般地说,前列腺检查主要包括直肠指诊、前列腺B超和前列腺特异性抗原（PSA）检测。     

经膀胱镜碎石术治疗膀胱结石(附11例报告)

报告经膀胱镜碎石术治疗膀胱结石11例,结石直径为1.0～3.5cm,经过均顺利。体会是:视野清晰是防止膀胱粘膜损伤、顺利进行碎石的关键。该术式操作简便、经济、安全、病人痛苦少、恢复快,适于门诊及基层医院开展。     

短期运用环孢素A对供者骨髓移植所诱导的混合嵌合体和免疫耐受的抑制作用

目的探讨临床常用免疫抑制剂对供者骨髓移植和T淋巴细胞协同刺激信号阻滞联合诱导的混合嵌合体和免疫耐受的影响。方法将BALB/c小鼠的皮肤移植于C57BL/6小鼠背部,术后经尾静脉注射BALB/c小鼠骨髓细胞5×10~7个和AdCTLA4-FasL 5×10~9 PFU(标准方案组),部分小鼠在此基础上还接受环孢素A(CsA组)、霉酚酸酯(MMF组)和环孢素A、霉酚酸酯联合(CsA+ MMF组)皮下或腹腔注射,共用药28 d,同时设移植后不给任何处理的对照组。观察移植皮肤存活情况,流式细胞仪测定受者外周血Vβ11~+T淋巴细胞的水平和供者来源细胞的嵌合水平,行单向混合淋巴细胞反应(MLR)了解受者对供者抗原的反应。结果除对照组外,其它几个组在短期内(21 d)均诱导了高水平的混合嵌合体(＞30%),但在停药后的140 d,仅标准方案组和MMF组仍保持稳定的嵌合水平。对照组移植皮片的存活时间为(9．8±1．2)d,CsA组和CsA+MMF组皮片存活时间均不超过50 d,标准方案组和MMF组皮片存活时间均超过150 d,明显长于CsA组和CsA+MMF组(P＜0．05)。术后150 d,标准方案组和MMF组的MLR受到显著抑制,刺激指数均＜1,而CsA组和CsA+MMF组的MLR未受抑制(刺激指数均＞1)。术后21d时,各组小鼠外周血中Vβ11~+T淋巴细胞的水平均低于对照组,但标准方案组和MMF组的Vβ11~+ T淋巴细胞较CsA组和CsA+ MMF组更低(P＜0．05),至术后140 d时,标准方案组和MMF组的Vβ11~+ T淋巴细胞比例降至更低水平。结论CsA或含CsA的免疫抑制方案对供者骨髓移植和输注CTLA4-FasL联合诱导的混合嵌合体和免疫耐受具有抑制作用,其机理可能与早期外周供者反应性T淋巴细胞删除减少有关。     

尿脱落细胞增殖细胞核抗原mRNA检测在膀胱癌诊断中的应用价值

目的探讨尿脱落细胞增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA检测在膀胱癌诊断中的应用价值。方法收集32例膀胱癌、52例泌尿系统良性疾病患者和10例健康志愿者清晨中、后段尿液,采用RT-PCR法检测尿脱落细胞PCNAmRNA表达,并与尿脱落细胞学检查结果比较。结果PCNAmRNA诊断膀胱癌的特异性为64%,低于尿脱落细胞学检测的88%(P<0.05),敏感性为100%,高于尿脱落细胞学检测的69%(P<0.01)。膀胱良性疾病患者、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌患者尿脱落细胞PCNAmRNA表达强度分别为0.5128±0.0307、0.5153±0.0402、0.6560±0.0626、0.8657±0.0266。膀胱良性疾病患者与Ⅰ级膀胱癌患者间差异无统计学意义,与Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌患者间差异有统计学意义(P<0.05)。膀胱癌患者尿脱落细胞PCNAmRNA表达强度随膀胱癌分级增加而升高(P<0.05)。浸润性膀胱癌患者尿脱落细胞PCNAmRNA表达强度高于浅表性膀胱癌患者(P<0.01),分别为0.8040±0.0807、0.5595±0.0447。结论尿脱落细胞PCNAmRNA检测在膀胱癌早期诊断、常规筛查以及术后复发监测中具有潜在的应用价值。     

移植肾功能延迟恢复与长期存活的关系

为探讨移植肾功能延迟恢复（ＤＧＦ）与长期存活的关系，分析１９８５年１月－１９９４年１月施行尸体供肾移植术６８例，结果发生ＤＧＦ３１例，占４５．６％；发生至少１次排斥反应者３８９例，占５７．３％。ＤＧＦ伴斥反应才５年存活率（０）明显低于不伴有排斥反应者（２５％），ＤＧＦ≥１４ｄ者１个月内排斥反应的发生率明显地ＤＧＦ〈１４ｄ者。提示ＤＧＦ≥１４ｄ或ＤＧＦ伴有排斥反应的发生是影响患者后长期存活的一个主要     

成熟型Smac真核表达载体的构建及其在膀胱癌T24细胞中的表达

目的 构建成熟型Smac基因真核表达载体．探讨成熟型Smac基因促进肿瘤细胞凋亡的可能性。方法 以Xba Ⅰ和Bam HⅠ双酶切质粒pET15b-Smac．回收酶切释放基因片断．定向插入以Xba Ⅰ和BamHⅠ双酶切的真核表达质粒pcDNA3．1（-）中．构建含有成熟型Smac基因的真核表达载体pcDNA-MT Smac．测序鉴定重组的质粒。构建的质粒转染膀胱癌T24细胞．在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导下以原位未端转移酶标记法（TUNEL）检测凋亡率。结果 以T7引物测序证实得组的质粒pcDNA-MT Smac含有成熟型Smac基因。空白对照组、50ng／ml TRAIL处理组、转染Smac组和转染Smac后50ng ml TRAIL处理组的凋亡率分别为1．6％、20．2％、1．7％和35．7％．未经TRAIL诱导．T24细胞及转染了成熟型Smac的T24细胞间凋亡率差异无显著性意义（P〉0．05）．然而作TRAIL的诱导下．转染了成熟型Smac的T24细胞凋亡率明显高于术转染细胞．其差异有级显著性意义（P〈0．01）。结论 成功构建了含有成熟型Smac基因的真核表达载体．并证实该基因可以促进TRAIL诱导的膀胱癌T24细胞的凋亡．为研究成熟型Smac基因促进肿瘤细胞凋亡提供了实验依据。     

活体亲属供肾移植30例报告

目的 评估活体亲属供肾移植的安全性和效果. 方法 回顾性分析2003年11月至2006年9月30例活体亲属供肾移植的临床资料.其中夫妻间供肾移植2例,直系血缘亲属供肾移植28例.供受体间2条单倍体相同6例、1条单倍体相同22例;HLA全错配1例,4抗原错配1例.供体切取右肾7例、左肾23例,经腹部取肾5例、经腰部25例,均为开放手术取肾.受体再次移植2例,首次移植28例. 结果 30例供体取肾术后7～10 d出院,随访3～6个月,肾功能正常.30例受体中1例因移植肾功能延迟恢复、肺部感染死亡.术后发生排斥反应4例,1例经抗胸腺淋巴细胞球蛋白逆转,3例经甲泼尼龙冲击治疗逆转.术后发生移植肾肾周血肿再次手术止血1例;发生尿瘘2例,均经保守治疗痊愈.29例存活者随访1～4年,其中术后1年发生慢性移植物失功1例,移植肾功能正常28例. 结论 活体亲属供肾移植安全,效果良好,供肾热缺血时间短、组织配型好、排斥反应小、免疫抑制剂用量少、长期存活率高,应积极提倡和推广.