小鼠胚胎干细胞在血管内皮生长因子作用下造血相关基因表达的研究

目的　研究小鼠胚胎干细胞系ES D3在血管内皮生长因子 (VEGF)的作用下表达造血相关基因的情况。方法　先将ES D3形成拟胚体 ,将拟胚体细胞转入含不同浓度VEGF和VEGF 干细胞因子 (SCF)培养基中。分为VEGF 2 0ng/ml组、VEGF 10ng/ml组、VEGF 5ng/ml组、VEGF 5ng/ml SCF组、VEGF 10ng/ml SCF组、VEGF 2 0ng/ml SCF组 ;同时设不加因子的自发分化对照组。采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测各组造血转录因子GATA 2和早期造血细胞阶段表达的基因c kit和 β H1表达 ,并进行定量分析。 结果　经 1周诱导培养 ,各实验组均可检测GATA 2表达 ,其中VEGF 2 0ng/ml组和VEGF SCF组表达较强。未分化胚胎干细胞不表达c kit和 β H1mRNA ,拟胚体细胞开始表达c kit,实验组以VEGF 10ng/ml SCF组和VEGF 2 0ng/ml SCF组表达最强。VEGF 10ng/ml组和VEGF 5ng/ml组 ,β H1的表达分别为阴性和弱阳性 ,其他各组可检测到阳性条带 ,以VEGF 10ng/ml SCF组表达最强 ;而自发分化组未检测到上述mRNA的表达。结论　对造血转录因子和早期造血细胞阶段表达基因的检测可进一步证实胚胎干细胞的成血分化 ,VEGF或VEGF SCF可诱导胚胎干细胞的早期造血分化     

脐血移植治疗难治性儿童白血病

目的：研究用HLA不合多个脐血移植治疗难治性儿童白血病。方法：选择难治性白血病患儿，给予强烈化学治疗杀灭残存白血病细胞，再用多个脐血混合移植解救严重抑制状态的骨髓，从而缓解白血病，延长生命。结果：治疗6例，年龄2．5一16岁，均为男性。用VAC或AV方案化疗后，约11天外周血颗粒细胞降至零。输注脐血后平均13天外周血白细胞升至l．0×109/L。60天内骨髓象正常，全部患者达到完成缓解。随诊I一4年，3例死亡，3例已分别存活36、44、ZO个月。结论：混合脐血移植对难治性白血病有较好疗效，其治疗作用机理值得进一步探讨。     

肺心病患者红细胞、淋巴细胞免疫功能的变化及其临床意义

慢性肺心病急性发作期患者16例，男10例，女6例，年龄48～77岁。健康对照组20例，男14例，女6例，年龄40～72岁。用红细胞C3b受体花结试验测定红细胞CR活性；用红细胞免疫复合物花结试验测定红细胞粘附免疫复合物含量；用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联免疫法测定T淋巴细胞亚群、NK细胞、B淋巴细胞。结果：肺心病患者急性发作期与缓解期红细胞Csb受体花结率（分别是14.81±2.104％；17．29±1．687％）均显著低于正常对照组（20.74±2．419％），P＜0．01，且发作期与缓解期比较亦有显著差异，P＜0．05。红细胞免疫复合物花结率（分别是144…     

自体骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤疗效观察

目的:观察自体骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤患者的近期疗效及其安全性。方法:选择2005-04/2006-02在山东省残疾人康复中心住院的脊髓损伤患者24例,采用随机表法分为治疗组和对照组。患者知情同意并签署知情同意书。治疗组11例,对照组13例,均经CT或MRI确诊并行手术治疗。两组在年龄、病程、损伤程度(ASIA分级)等方面均具有可比性(P>0.05)。治疗组在综合康复治疗的基础上给予自体骨髓间充质干细胞治疗,经髂骨穿刺采集自体骨髓156～180mL,分离提取骨髓间充质干细胞后经静脉途径和/或蛛网膜下腔1次性或分次注射。对照组仅给予综合康复治疗。两组均于入院当天、治疗后7,15,30,60,90d进行运动与感觉、日常生活能力、膀胱功能评定。结果:24例患者均进入结果分析。①治疗组11例患者均有不同程度的感觉、运动和自主神经功能改善,与对照组比较,差异不显著。②治疗组ASIA分级A级8例,有2例在第60天、1例在第90天评估中恢复为B级。C级1例,在第30天评估中恢复为D级,第90天评估中恢复为E级,能独立行走,生活完全自理。D级2例,其中1例在第90天评估中恢复为E级。对照组A级9例,1例在第90天评估中恢复为B级。B级1例,治疗后无变化。C级2例,1例在第90天评估中恢复为D级。③骨髓间充质干细胞移植常见的不良反应包括低热(7/11例)、头痛(2/11例)、腹胀(1/11例),其中1例于蛛网膜下腔注射后出现双下肢麻木和脑膜刺激征,均于两三天内自行消失。结论:骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤近期有一定疗效而且安全,但远期疗效有待于进一步观察。     

两种分离胎盘间充质干细胞方法的比较

目的：寻找从胎盘组织中分离培养间充质干细胞的最佳方法。方法：分别采用外植块贴壁法和酶消化法从胎盘组织中分离间充质干细胞,并对其形态、免疫表型、生长动力检测和多向分化能力进行检测。结果：流式细胞术和诱导分化实验表明酶液消化法分离得到的贴壁细胞表型符合间充质多能干细胞特征,且在合适诱导条件下能向造骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞分化,而外植块贴壁法获得的贴壁细胞弱表达CD29和CD105,仅能向脂肪细胞分化。结论：酶消化法可有效的从胎盘组织中分离间充质干细胞,增殖能力强,具备多向分化能力。     

人脐带间充质干细胞对大鼠子宫内膜异位症病灶神经纤维的影响

目的   探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对大鼠子宫内膜异位症(EMs)病灶神经纤维的影响。方法   hUC-MSCs从人新鲜脐带组织中分离和培养,并经过流式细胞仪鉴定。将体质量180~210g成年雌性Wistar大鼠,通过手术成功被诱导为EMs模型。将模型鼠随机分为治疗组和对照组,各12只。2周后治疗组接受含有hUC-MSCs的生理盐水尾静脉注射两周,1次/周,对照组接受相同体积和次数的生理盐水注射。4周后子宫内膜异位病灶被收集。标本被切片和用抗神经丝蛋白(NF)和神经生长相关蛋白-43(GAP-43)抗体进行免疫组化。结果   与对照组相比,治疗组的NF平均光密度值明显低于对照组(P＜0.01); GAP-43的平均光密度值与对照组相比也明显降低(P＜0.01)。 结论   hUC-MSCs能够降低EMs病灶的神经纤维密度值。     

大蒜素对皮下移植肝癌细胞生长抑制和诱导凋亡的实验研究

目的　评价大蒜素在实验裸小鼠体内抗肝癌的有效性,为临床应用大蒜素对肝癌进行介入治疗提供理论依据。　方法　建立人肝癌细胞BEL 7402裸小鼠皮下移植瘤模型,模拟介入治疗用药方法,对6组移植瘤模型分别注射生理盐水吐温溶液,1、2、5 mg/ml大蒜素,0 .2 mg/ml阿霉素,1 mg/ml大蒜素+0 .2 mg/ml阿霉素,每次注射 0. 1 ml,隔日 1 次,连续 7 次,测量肿瘤体积变化,计算各组抑瘤率,对移植瘤组织作HE染色观察,电镜观察形态改变, TUNEL法检测组织凋亡率,RT PCR技术分析处理前后BEL 7402细胞FasL mRNA表达。　结果　移植瘤生长符合指数曲线规律,各组抑瘤率分别为: 62 .8%、72 .8%、94 .5%、76. 0%和 87 .0%;各组凋亡指数分别为(2. 2±1 .1)%、(17 .2±2. 8)%、(19 .4±2 .1)%、(28. 3±3.0)%、(22. 4±2 .5)%和(37 .6±3 .9)%;大蒜素或阿霉素组FasL mRNA表达均增加,大蒜素+阿霉素组表达上调尤其明显;大蒜素或(和)阿霉素治疗后,移植瘤组织内坏死细胞增加,出现典型凋亡形态细胞。　结论　大蒜素可以有效抑制人肝癌细胞裸小鼠移植瘤生长,且呈剂量效应关系;大蒜素可通过上调FasL mRNA的表达诱导人肝癌细胞凋亡。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗阿尔茨海默病4例

阿尔茨海默病患者10例，按治疗方法分为两组：干细胞原位治疗组6例，给予重组人粒细胞集落刺激因子150 μg，腹部皮下注射，1次/d，7~10 d为1个疗程；同时给予丹参注射液20 mL，静脉滴注，1次/d，10 d为1个疗程；自体骨髓干细胞治疗组4例，经骨髓穿刺采集自体骨髓230~330 mL，分离提取骨髓单核细胞后经静脉途径和/或椎管内一次性或分次注射；注射后当日给予干细胞原位治疗。干细胞治疗前、治疗3个月后进行简易智能测量、日常生活活动能力评分及外周血细胞监测，并对患者神经功能变化及不良反应进行评价。干细胞原位治疗组6例患者未发现任何不良反应，外周血白细胞计数控制在(35~40)×109 L-1。治疗后3个月时简易智能测量评分及日常生活活动能力评分均高于治疗前（P < 0.05）。自体骨髓干细胞治疗组4例患者中发热2例，体温均在38 ℃以下，且24 h后体温恢复正常；有轻微头痛3例，未行治疗24 h后缓解。治疗后3个月时简易智能测量评分及日常生活活动能力评分均显著高于治疗前（P < 0.01）。骨髓间充质干细胞移植治疗阿尔茨海默病近期疗效明显，不良反应较少，与干细胞原位治疗联合应用疗效更佳，其远期疗效还需要进一步随访和观察。     

深低温冻存十六年后脐血造血干细胞活性的检测

富含造血干祖细胞,已成功地用于儿童造血重建[1-2].脐血的采集特点决定了其必须深低温保存后再寻求应用,脐血在液氮中是否能够长期有效保持干细胞活力即成为应用的关键,但有关10年以上的脐血冻存.