青霉素、链霉素体外对人脐带组织源间充质干细胞胞外分泌物基因表达的影响

本研究探讨青霉素和链霉素对人脐带组织源间充质干细胞增殖、凋亡和胞外分泌物基因表达的影响。首先分离培养人脐带间充质干细胞,然后检测其免疫表型以及向成骨细胞和脂肪细胞分化的能力,并用MTT法检测细胞增殖,定量RT-PCR法检测胞外分泌物(ECS)和凋亡相关基因(bcl-2,bax)的cDNA表达。结果表明:培养得到的贴壁细胞表型符合间充质干细胞特征,低浓度的青霉素和链霉素可以有效促进脐带间充质干细胞的增殖,其最佳作用浓度为100 U/ml;同时青霉素和链霉素能降低其细胞外分泌物(extracellular secretion,ECS)成分的表达,抗生素浓度越高,ECS表达降低越多;而且低浓度的青链霉素还能提高bcl-2/bax的cDNA表达比值。结论:在脐带MSC的体外培养中,低浓度的青霉素、链霉素可增加细胞增殖,降低凋亡比率,但大剂量使用会降低脐带MSC胞外分泌物的基因表达。     

三维和二维培养的脐带间充质干细胞DNA甲基化水平比较

目的 探讨三维培养对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)全基因组DNA甲基化状态的影响。 方法 通过贴壁培养法获得UC-MSCs,采用流式细胞术鉴定其细胞表型。采用聚氟乙烯巢状片进行三维培养,吖啶橙荧光观察UC-MSCs在支架上生长情况。采用甲基化DNA免疫共沉淀测序(MeDIP-Seq)技术检测细胞全基因组DNA甲基化情况。 结果 成功分离培养UC-MSCs并证明其表型符合国际标准,细胞黏附在聚氟乙烯巢状片三维培养体系中且生长良好。MeDIP-Seq结果显示,三维培养后UC-MSCs全基因组DNA甲基化水平较二维培养整体上调。基因本体(GO)分析显示,与二维培养的细胞相比,三维培养的UC-MSCs中上调的差异甲基化基因多参与蛋白质的代谢、膜相关细胞器的组成、酶活性调节等;而下调的差异甲基化基因主要参与囊泡运输和cGMP代谢过程。通路分析显示,三维培养的UC-MSCs中上调的差异甲基化基因多参与RNA转运、神经配体受体活性、Notch信号通路等;下调的差异甲基化基因多参与磷酸肌醇代谢通路和囊泡分泌相关的通路。 结论 三维培养改变了UC-MSCs的DNA甲基化谱,所涉及的甲基化上调基因多参与细胞的迁移和增殖功能。三维培养降低了UC-MSCs的免疫调控和分泌囊泡相关基因的甲基化水平。     

血管内皮生长因子对人骨髓和脐带间充质干细胞中内皮细胞组分的影响

本研究旨在比较人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)和脐带间充质干细胞(UC-MSC)中的内皮细胞(EC)比例,并探讨血管内皮生长因子(VEGF)对MSC中EC比例的影响。利用流式细胞术检测EC标志CD34+CD133+和vWF+CD31+双阳性细胞的比例,用瑞氏染色观察经VEGF作用的MSC细胞形态变化,免疫荧光技术观察CD34、CD133、CD31、VWF的表达,最后采用实时荧光定量PCR检测VEGF对EC标志性基因表达的影响。结果表明:BM-MSC和UC-MSC中存在少量EC及内皮祖细胞(EPC),经VEGF 10 ng/ml作用24 h后,MSC的长宽比变大,EC比例上升而EPC比例下降,EC相关标志基因Tie-2和ecNOS等的表达均上调,其中UC-MSC对VEGF的反应更明显。结论:BM-MSC和UC-MSC中存在少量的EC及EPC,VEGF可以提高EC的比例和细胞功能。     

混合脐血移植的实验研究

为探讨混合脐血移植重建免疫造血系统的可行性,扩大脐血移植（CBT）的应用范围,将孕20日的C57BL／6（H-2b）小鼠和615（H-2k）小鼠经剖腹产取出胎盘和胎鼠,剪碎后分离出脐血单个核细胞（MNC）,将二者各1×10     

脐动、静脉造血干细胞/祖细胞的比较

目的探讨胎盘绒毛膜在胎儿期造血中的作用,寻找造血干/祖细胞的新来源,供临床移植应用。方法分别测定并比较脐动、静脉血中CD+34细胞含量及粒-单细胞集落形成单位（CFU-GM）、混合集落形成单位（CFU-MIX）、高增殖潜能集落形成单位（HPP-CFU）集落的产率。结果脐静脉中CD+34及CD+34/CD-38细胞含量分别为（1.25±0.94）％和（0.61±0.50）％,较脐动脉血中的含量（0.77±0.50）％、（0.33±0.27）％显著增高（P均<0.05）;脐动、静脉血单个核细胞（MNC）大多处于静止期（>95%）,二者差异无显著性（P＞0.05）,但合成期细胞的比率在脐静脉血中为（2.2±1.8）％,明显高于脐动脉血的比率（0.9±1.0）％;脐静脉血中CFU-GM、CFU-MIX和HPP-CFU的产率分别为（49.7±28）/2×105MNC、（8.7±4.6）/1×105MNC和（1.6±1.2）/1×105MNC,明显高于脐动脉血的产率（18±9）/2×105MNC、（5.2±2.7）/1×105MNC和（0.4±0.4）/1×105MNC,差异有显著性（P均<0.05）。结论脐静脉血中造血干/祖细胞的含量高于脐动脉,提示胎盘绒毛膜在胎儿期造血中具有一定的作用,并有可能成为造血干/祖细胞的又一来源。     

大鼠胎血间充质干细胞的体外扩增及诱导分化为神经元样细胞的研究

目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的分离、扩增及向神经元样细胞分化的可能性,为进一步的动物实验研究打下基础。方法：无菌条件下采集15只孕20d大鼠的胎血,Ficoll-hvpague分离液分离出单个核细胞(mononuclear cells,MNCs)后,置于含10％胎牛血清的DMEM／LG培养传代。细胞化学染色法检测MSCs的细胞化学特征,流式细胞仪检测其免疫表型。取扩增第5代的MSCs向神经元样细胞定向诱导,免疫细胞化学法鉴定其特异性标志。结果：大鼠胎血MSCs可大量扩增,细胞化学染色示其α-丁酸萘酚酯酶(NBE)阳性,碱性磷酸酶(ALP)阴性,流式细胞仪检测显示其表达CD44、CD54,不表达CD11b、CD45。诱导后MSCs形态学观察类似于神经元,免疫细胞化学检测发现其巢蛋白(Nestin)和特异性烯醇化酶(NSE)阳性,胶原纤维酸性蛋白(GFAP)阴性。结论：大鼠胎血能够分离、扩增培养出MSCs,在适当条件下可向神经元样细胞定向诱导分化,大鼠胎血可作为MSCs的来源进一步做动物实验。     

儿童急性淋巴细胞白血病microRNA表达的研究

微小RNA(micro RNA,miRNA)被认为是一类对基因表达起负调节作用的基因产物[1].参与生命过程中一系列重要进程,包括早期发育、细胞增殖、细胞死亡等.miRNA在正常细胞和肿瘤细胞中的表达不同,我们通过基因芯片对儿童早前B细胞急性淋巴细胞白血病(pre-B-ALL)患者和非血液病患者的miRNA进行对照分析,并通过实时定量PCR进行验证,目的是发现某些特异性miRNA在调控白血病发生中的作用,为白血病的基因治疗提供依据.     

红细胞免疫检测的临床评价

为了全面评价红细胞免疫检测的临床价值，我们对２２２例不同年龄的健康人及５００例分别患者有不同疾病患者的红细胞Ｃ３ｂ受体花环，红细胞免疫复合物花环和肿瘤红细胞花环进行检测。结果发现学龄前儿童（〈７岁）及老年人（〉６０岁）略低于成人（１８～５０岁）良性疾病患者的红细胞免疫功能低于健康人（Ｐ〈０．０１），恶性肿瘤患者则明显下降，三者比较均有显著性差异（Ｐ〈０．０１）。不同临床分期肿瘤患者工细胞免疫功能也     

HUMAN UMBILICAL CORD BLOOD TRANSPLANTATION IN 4 CASES WITH ADVANCED SOLID TUMORS

Four patients with solid tumors were treated by means of highdose chemotherapy and HLA-mismatched multi-cord blood transplantation.Ofthem,3 reached complete remission,1 got fair response with tolerant side-effects.No or a little graft-versus-host reaction(GVHR)were observed.Donor cellengraftments were documented in 2 patients by cytogenetic analysis and deter-mination of hemoglobin F of the peripheral blood.Recurrent diseases wereconfirmed clinically on day 210(4 year-old girl with liposarcoma)and day 90(11 year old boy with Non-Hodgkin′s Lymphoma).These results demonstratedthat HLA-mismatched multicord blood transfusion could rescue the marrowsuppression of patients treated with myeloablative chemotherapy with no or a littleGVHR,and suggested that muIticord blood stem cells might be engrafted in asingle patient without consideration of HLA-identical.Therefore,cord blood mayprovide a rich hematopoietic resources.Further studies are needed to confirmour observation.     

脐血移植治疗难治性儿童白血病

目的：研究用ＨＬＡ不合多个脐血移植治疗难治性儿童白血病。方法：选择难治性白血病患儿，给予强烈化学治疗杀灭残存白血病细胞，再用多个脐血混合移植解救处于严重抑制状态的骨髓，以缓解白血病，延长生命。结果：治疗６例，年龄２５～１６岁，均为男性。用ＶＡＣ或ＡＶ方案化疗后，约１１ｄ外周血颗粒细胞降至零。输注脐血后平均１３ｄ外周血白细胞升至１０×１０９／Ｌ，６０ｄ内骨髓象正常，全部患者达到完全缓解。随诊１～４年，３例死亡，３例分别存活３６、４４、２０个月。结论：混合脐血移植对难治性白血病有较好疗效，其治疗作用机理值得进一步探讨。